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1、,第九章 血浆蛋白质检验,三、血浆蛋白主要组分的生物化学检验,二、血清蛋白质电泳组分的临床分析,第一节 血浆蛋白质,一、血浆蛋白质的功能和分类,一、血浆蛋白质的功能和分类,（一）血浆蛋白质的功能,1.营养、修补作用； 2.维持血浆胶体渗透压； 3.作为血液pH缓冲系统的一部分； 4.载体蛋白； 5.抑制组织蛋白酶； 6.催化作用 7.参与凝血与纤维蛋白溶解 8.免疫防御功能,（二）血浆蛋白质的分类,最简单：分为清蛋白和球蛋白 较实用：由电泳获得血浆蛋白质概貌 功能分类：比较复杂，但方便研究,1.电泳分类法,醋纤膜电泳或琼脂糖电泳：清蛋白1球蛋白2球蛋白球蛋白球蛋白分辨率高时：可有1和22中也可
2、有两条如果采用聚丙烯酰胺凝胶电泳， 在适当条件下可以分出30多个 区带。,正常血清蛋白电泳图谱示意图及其扫描曲线,2.功能分类法,运输载体类 补体蛋白类 免疫球蛋白类 凝血蛋白类 蛋白酶抑制物类 血清酶类 蛋白激素类,（三）影响血浆蛋白质浓度的因素,1.急性时相反应蛋白（APP）：对炎症和组织损伤的非特异性反应，血浆蛋白质如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、触珠蛋白、铜蓝蛋白、C4、C3 、纤维蛋白原、C-反应蛋白和血清淀粉样蛋白A等浓度显著升高或升高，而血浆前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白浓度则出现相应下降。这些血浆蛋白质统称为急性时相反应蛋白（APP）。 这种现象称为急性时相反应（APR）。 增加
3、超过25%的蛋白质称为正向APP，下降25%以上的蛋白质称为负向APP .,APR的机制 是对炎症的一般反应。 损伤部位释放的细胞因子，包括白介素、肿瘤坏死因子和、干扰素以及血小板活化因子等，引发肝细胞中APP合成量的改变。 正向APP是机体防御机制的一个部分，尤其是活化补体、蛋白酶抑制剂对酶活性的控制、触珠蛋白对被破坏红细胞中释放Hb的保护作用等。 作为营养蛋白的负向APP此时合成减少，可为合成正向APP提供更多的氨基酸原料 。,APR的时相 C-反应蛋白首先升高 12小时内1-酸性糖蛋白也升高 然后1-抗胰蛋白酶、触珠蛋白、C4和纤维蛋白原升高 最后是C3和铜蓝蛋白升高 通常在25天内这些
4、APP达到最高值,APP的临床应用帮助监测炎症发生及过程和观察治疗反应尤其是那些升高最早和最多的蛋白质。,疾病时血浆蛋白质的浓度变化被体内类固醇激素的状态复杂化，包括类固醇激素治疗、妊娠和口服避孕药。,2.类固醇激素,二、血清蛋白质电泳组分的临床分析,醋纤膜电泳正常百分含量 清蛋白： 5768 1球蛋白：1.05.7 2球蛋白：4.911.2 球蛋白： 713 球蛋白： 9.818.2,正常图谱 肾病综合征,肝硬化(-桥) 肝硬化(不典型-桥),高浓度的甲胎蛋白可表现为清蛋白与1区带间一条清晰的新带。 C-反应蛋白异常增高可出现特殊界限的区带。 单核细胞白血病可出现由于溶菌酶异常增多的后区带。
5、,其他异常区带,浆细胞病与M蛋白,正常血清蛋白电泳上显示的宽区带主要成分:免疫球蛋白。 发生浆细胞病（plasma cell dyscrasia）时，异常浆细胞克隆增殖，产生大量单克隆免疫球蛋白或其轻链或重链片段，病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白，在蛋白电泳时呈现一个色泽深染的窄区带，此区带较多出现在或区，偶见于区。,浆细胞病的电泳图,电泳条带由上至下依次为Alb, 1, 2, , 区带箭头所指为可疑M区带血清蛋白电泳图,多发性骨髓瘤,多发性骨髓瘤IgG型 多发性骨髓瘤IgA型,三、血浆蛋白主要组分的生物化学检验,1.前清蛋白 2.清蛋白 3.1-抗胰蛋白酶 4.1-酸性糖蛋白 5.触珠
6、蛋白 6.2-巨球蛋白 7.铜蓝蛋白 8.转铁蛋白 9.C-反应蛋白 10.2-微球蛋白,（一）前清蛋白 （prealbumin，PA）, 分子量：54kD；T：1.9d； 主要包括：视黄醇结合蛋白和甲状腺素转运蛋白 PI=4.7 ；蛋白电泳时迁移至Alb的前方； 肝实质细胞合成，可作为组织修补材料和运载蛋白。,1.性质：,2.前清蛋白的临床意义, 营养不良的指标, 肝功能不全的指标,敏感, 负性急性时相反应蛋白,（二）清蛋白（albumin，Alb）,分子量66.2kD 不含糖，高度溶于水的血浆蛋白质 在生理pH环境中为负离子。 肝实质细胞合成 T：19d 血浆中含量最多的蛋白质,1.性质：
7、,2.清蛋白的生理功能,维持血浆胶体渗透压：血浆渗透压的75%80%由Alb维持 血浆中主要的载体蛋白，具有结合各种配体分子的能力 缓冲酸碱，维持酸碱平衡作用 营养作用,3.清蛋白的临床意义,1） 降低, Alb合成不足, Alb的分布异常, Alb过度丢失, Alb分解代谢增加,2）升高：少见,蛋白质摄入不足,肝功减退,（三）1-抗胰蛋白酶 （1 antitrypsin，AAT ）,分子量52kD；pI为4.8 含糖10%12% 在醋纤膜电泳中位于1区带（1区带的主要组分） 主要由肝细胞合成，单核细胞、肺泡巨噬细胞和上皮细胞也能合成,1.性质：,AAT是一种蛋白酶抑制剂，主要对抗多形核白细胞
8、起吞噬作用时释放的溶酶体蛋白水解酶。所以当AAT缺乏时，可使蛋白水解酶过份地作用于肺泡壁的弹力纤维而导致肺气肿的发生。,2. AAT的生理功能,AAT发挥作用具有PH依赖性：中性或弱碱性时，显示最大抑制；PH4.5时活性表失。,AAT具有多种遗传表型，其中以PiMM型（正常的等位基因）最多见，占人群的90%以上 根据等位基因出现频率的不同，缺陷变体可进一步分为常见和少见两部分，最常见的缺陷变体为Z和S型, 可表现为以下遗传分型：PiZZ、PiSS、PiSZ、PiMZ、PiMS。以MM型的蛋白酶抑制能力作为100%，ZZ型的相对活力仅为15%、SS为60%、MZ为57%、MS为80%，SZ为35
9、%。,3. AAT的遗传表型,PiZZ型、PiSS型甚至PiMS型常伴有早年出现的肺气肿 低血浆AAT可发现于胎儿呼吸窘迫综合征 PiZZ表型会发生肝损害，导致肝硬化,3. AAT的临床意义,AAT属APRP，在炎症、感染、肿瘤、肝病时均显著增加。,1）AAT缺陷：,2）AAT增加：,（四）1-酸性糖蛋白(1 Acid Glycoprotein, AAG),分子量约40kD ；pI为2.74.0 属血浆中含糖量最高（达45%）、酸性最强的糖蛋白 典型的APRP 主要在肝脏产生, 某些肿瘤组织也可产生 可结合利多卡因和普萘洛尔等药物,1.性质：,2.AAG的临床意义, 雌激素使AAG降低。, A
10、AG目前主要作为急性时相反应的指标， AAG增高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的指标之一。,糖皮质激素增加，可引起AAG升高。,在营养不良、严重肝损害、肾病综合征以及胃肠道疾病致蛋白严重丢失等情况下AAG降低。,（五）结合珠蛋白（haptoglobin，Hap）（触珠蛋白）,一种APRP和转运蛋白（与红细胞释放的游离Hb结合，每分子Hp可结合两分子Hb，结合不可逆）。 电泳中位于2区带。 个体间有多种遗传表现。分子中有、亚基，形成22 四聚体。,1.性质：,2.结合珠蛋白的功能,运输血管内游离Hb到网状内皮细胞降解，防止Hb从肾脏丢失而为机体保留铁，并能避免Hb对肾脏的损伤。,3. 结合珠蛋白的临
11、床评价,Hp下降：溶血性疾病。Hp参考范围较宽，须连续观察溶血是否处于进行状态。血管外溶血不会使Hp发生变化。严重肝病患者，Hp合成减少。Hp升高：属APRP，烧伤和肾病综合征等情况下，血Hp常明显升高。,触珠蛋白的几种遗传表型,（六）2-巨球蛋白（2-macroglobulin,2-MG）,血浆中分子量最大的糖蛋白，相对分子质量约为720kD，由肝细胞、单核细胞和星形细胞合成，半衰期约5d,1.性质：,2.2-巨球蛋白的功能,2 MG分子内部有内环硫酯键，能与多种离子和分子结合，特别是能与蛋白水解酶结合，结合的复合物引起2MG的分子构象的改变，从而抑制了pro水解酶的活性，导致酶不易作用于大
12、分子底物。（酶未失活） 若底物为分子量小的蛋白质，则能被2MG-蛋白酶复合物所催化而水解。 因此，2-MG可选择性地保护某些蛋白酶的活性。,2-MG增高：低清蛋白血症，尤其是肾病综合征时，显著增高。 2-MG降低：严重的急性胰腺炎和进展型前列腺癌治疗前。,3.2-巨球蛋白的临床意义,（七）铜蓝蛋白（ceruloplasmin,Cp，CER）,含铜的2球蛋白，肝脏合成 每分子结合68个铜原子，因含铜而呈蓝色 95%的血清铜存在于Cp中，其余5%呈可扩散状态 血循环中的Cp可认为是铜的无毒性代谢库,1.性质：,2.铜蓝蛋白的功能特征,血浆铜的转运 具有氧化酶活性：对铁（可催化Fe2+氧化为Fe3+
13、）、多胺和多酚类底物有催化其氧化的能力。 具有抗氧化作用，可防止组织中脂质过氧化物和自由基的生成，特别在炎症时具有重要意义。,3.铜蓝蛋白的临床评价,Cp浓度减少有关的疾病：包括Wilson病、营养性铜缺乏和Menkes病（遗传性铜吸收不良）。 属于急性时相反应蛋白：在妊娠、感染、创伤和肿瘤时血浆浓度增加。但在营养不良、严重肝病及肾病综合征时往往下降。,4.Wilson病的诊断标准,定义：Wilson病是一种常染色体隐性遗传病，即患者血浆Cp含量明显减少，血浆游离铜增加，铜沉积在肝可引起肝硬化，沉积在脑基底节的豆状核则导致豆状核变性，因而该病又称为肝豆状核变性。 Wilson病诊断标准：Cp下
14、降，血清总铜浓度降低、游离铜增加和尿铜排泄增加，肝中铜的含量升高。,（八）转铁蛋白（transferrin， TRF ）,分子量约79.5kD；pI 5.55.9；半寿期为7d 为单链糖蛋白，含糖量约6% 电泳位置在区带 主要由肝细胞合成 能可逆地结合多价阳离子，每分子TRF可结合2个Fe3+ 血浆中TRF的浓度受食物铁供应的影响,1.性质：,TRF是血浆中主要的含铁蛋白，负责运载由消化道吸收的铁和红细胞降解释放的铁。TRF-Fe3+复合物被摄入细胞，从而将大部分Fe3+运输到骨髓，用于Hb合成，小部分则运输到各组织细胞，用于形成铁蛋白，以及合成肌红蛋白、细胞色素等。,2.TRF的功能,3.
15、转铁蛋白的临床意义,用于贫血的鉴别诊断和对治疗的监测 作为营养状态的一项指标 TRF是负性APP，而妊娠和应用雌激素时则增高,（九）C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）,是一种可以结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质（1941年发现），命名为C-反应蛋白（C-reactiveprotein，CRP）。 肝细胞所合成的APRP，含5个相同的亚单位，非共价地结合为盘形多聚体 相对分子质量为115140kD 电泳分布在慢区带，有时可延伸到区带,1.性质：, 在钙离子存在下，CRP可结合卵磷脂和核酸及多种细胞、真菌、原虫等体内的多糖物质。 结合后的复合体具有对补体系统的激活作用，
16、引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用，而表现炎症反应。 CRP也可识别和结合由损伤组织释放的内源性毒性物质，然后将其进行去毒或从血液中清除，同时CRP则自身降解。,2. C-反应蛋白的功能,3. C-反应蛋白的临床意义,第一个被认识的APRP，APR的一个极灵敏指标CRP是非特异性指标，主要用于结合临床监测疾病： 筛查微生物感染； 评估炎症性疾病的活动度； 监测系统性红斑狼疮、白血病和外科手术后并发的感染 监测肾移植后的排斥反应等。,分子量：1.18万，存在于所有有核细胞的表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞，并由此释入血循环，半衰期约2h。 能完全透过肾小球滤过膜，肾小管几乎全部重吸收并分解。,
