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1、饲料中矿物元素分析 饲料中磷的分析测定,黎观红 江西农业大学动物科技学院,9/4/2018,1,饲料中磷的测定,饲料中总磷的测定（钼黄比色法）饲料中植酸磷的测定（三氯乙酸）,9/4/2018,2,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,一、原理先将试样中有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色络合物（NH4）3PO4NH4VO316MoO3（磷钒钼酸复合体），在波长400nm下进行比色测定。此法测得为总含磷量，其中包括动物难以吸收的植酸磷。,9/4/2018,3,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,二、仪器设备及试剂盐酸、硝酸、偏钒酸铵、钼酸铵、磷酸二氢钾；实验室用样品
2、粉碎机或研钵、分样筛、分析天平、分光光度计、高温炉、坩埚、容量瓶、容量瓶或具塞比色管、刻度移液管、凯氏烧瓶。1 盐酸 11（V1V2）2 浓硝酸3 高氯酸4 钒钼酸铵显色剂（避光保存，如生成沉淀则不能继续使用）5 磷标准溶液（50g/ml，用磷酸二氢钾配制，溶液中加入了3ml浓硝酸）,9/4/2018,6,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,三、测定步骤（1）试样的分解A、干法（不适用于含磷酸氢钙的饲料）B、湿法C、盐酸溶解法（适用于微量元素预混料）,9/4/2018,7,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,三、测定步骤（1）试样的分解A、干法（不适用于含磷酸氢钙的饲料）称取试样25g于坩
3、埚中，精确至0.0002g，在电炉上小心炭化，再放入高温炉于550下灼烧3h（或测定粗灰分后连续进行），在盛灰坩埚中加入盐酸溶液10mL（11，V+V）和浓硝酸数滴，小心煮沸约10 min，将此溶液转入100 ml容量瓶，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。与测定钙的方法一致，只是盐酸溶液浓度不一样。有研究认为，用测定钙后的分解液可直接用于测定饲料总磷。,9/4/2018,8,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,三、测定步骤（1）试样的分解B、湿法称取试样0.55g于凯氏烧瓶中，精确至0.0002g，加入浓硝酸（GB623分析纯）30mL，加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后
4、加入高氯酸（GB623分析纯）10mL，小心煮消沸至溶液无色,不得蒸干（危险！），冷却后加蒸馏水50mL，且煮沸腾驱逐二氧化氮，冷却后转入100mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,为试样分解液。 研究认为，湿法是目前较为理想的、稳定的一种分解方法，分解完全，易于操作。准确度和优于干法。通风良好的情况下进行。 干法分解样品时，灼烧过程中，样品飞溅、灰化不完全等因素易引起较大的误差。,9/4/2018,9,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,三、测定步骤（1）试样的分解C、盐酸溶解法（适用于微量元素预混料）称取试样0.21g（精确至0.0002g ）于100 ml烧杯中，缓缓加入盐酸溶液10m
5、L（11，V+V）使其全部溶解，冷却后溶液转入100 ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。,9/4/2018,10,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,三、测定步骤（2）标准曲线的绘制,9/4/2018,11,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,三、测定步骤（2）试样的测定准确移取试样分解液110 ml于50 ml容量瓶，加入钒钼酸铵显色试剂10 ml，用水稀释至刻度，摇匀，放置10 min。以0 ml溶液为参比，用10 mm比色池，在400 nm波长下，用分光光度计测得试样分解液得吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。,9/4/2018,12,一、饲料中总磷量的测定（
6、钼黄比色法）,三、测定步骤（3）结果计算式中：m试样质量；V试样分解液总体积；V1比色测定时所移取试样分解液体积；a由标准曲线计算所得的试样分解液含磷量，g/50ml；106为从g转化为g的系数。,9/4/2018,13,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,四、影响因素（注意事项）（1）酸度的影响（配制磷标准溶液） 硝酸用量对被测物质的吸光度有较大的影响。当 1000mL 磷标准液加1+1 硝酸24mL 之间时，测得溶液吸光度不变。故本实验选择加入3mL硝酸。 （2）显色剂用量的选择 实验表明，显色剂用量在9.511.0mL 范围内，溶液吸光度较大且恒定，因此本实验选用显色剂用量为10mL。
7、 （3）显色时间的影响 每隔510min 测定一次溶液的吸光度，显色时间在10min 时吸光度达最大且恒定，在50min 内显色稳定，对测定结果基本没有影响。故本实验选择10min 作为显色稳定时间。,9/4/2018,14,一、饲料中总磷量的测定（钼黄比色法）,四、影响因素（注意事项）（4）共存离子影响及消除A、钙离子干扰及其消除饲料中含大量的钙，在分解液中以Ca2+ 形式存在，它可与PO43-离子生成Ca3(PO4)2 沉淀（Ksp=2.010-29），使结果偏低。当 pH 7.0 时，产生酸效应，Ca2+与PO43-不能生成Ca3(PO4)2 沉淀，所以，控制溶液pH 7.0 可以消除C
8、a2+的干扰。由于本实验在样品处理过程中加入了酸，故无需另作处理便可消除Ca2+的干扰。 B、砷离子干扰及消除砷（V）可与钼酸铵产生与主反应类似的黄色物质杂多酸，使测定结果偏高。选用0.5% Na2S2O3 作掩蔽剂。选择0.5% Na2S2O3 溶液3.0mL作掩蔽剂效果最佳。,9/4/2018,15,二、饲料中无机磷的测定,动物体内的磷主要来自饲料，但植物性饲料中的磷相当一部分是以有机磷(主要为植酸磷)的形式存在，不能被动物充分利用，大部分随粪便排除体外。因此，在配合饲料中必须补充足够的无机磷。但如果用之过量，常常又会破坏畜禽生长的正常代谢过程及必要的生产过程。因此，作为评价饲料品质，不仅
9、要求测定总磷含量，而且要求对不同化学形态的磷分别进行定量测定。但目前通用的常规化验指标都是测总磷，并不能确定其中有机磷的含量。,9/4/2018,16,二、饲料中无机磷的测定,1无机磷测定原理将饲料样品用盐酸和硝酸处理，使无机磷浸提出来，对滤液进行测定，可求出无机磷。将总磷含量减去无机磷含量，即得有机磷含量。 2测定无机磷样品处理准确称取试样25g置于100ml烧杯中，加10ml盐酸溶液和硝酸数滴，加水30ml，搅拌数分钟，然后定量转入100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过滤弃去初始的20ml滤液，为试样分解液。3测定步骤同总磷测定方法。,问题讨论： 总磷和无机磷测定有什么不同？,9/4
10、/2018,17,三、饲料中植酸磷的测定（TCA法）,植物性饲料中的磷以植酸磷和非植酸磷两种形式存在。植酸即肌醇六磷酸，是一种淡黄色粘稠状液体，易溶于水，可经盐酸水解生成肌醇和正磷酸。植酸在植物体中一般不以游离形式存在，而是与钙、镁、钾、钠、铁等金属离子结合，几乎都是以复盐(与若干金属离子结合)或单盐(与一种金属离子结合)的形式存在，称为植酸盐phytate)，或称为肌醇六磷酸盐,9/4/2018,18,三、饲料中植酸磷的测定（TCA法）,植物性饲料中的磷大多以植酸磷的形式存在，而单胃动物体内缺乏植酸酶或酶的活性不高，长期以来人们往往是按照植物性饲料中磷的有效率为总磷的13的假设来进行饲料配方设计，有的甚至忽略不计，而用无机磷来满足动物对磷的需要量，这样势必造成磷源的浪费，导致磷的过量排泄。常见植物性饲料原料植酸磷含量. 表1,9/4/2018,19,三、饲料中植酸磷的测定（TCA法）,（一）原理用30g/L三氯乙酸作浸提液提取植酸盐，然后加入铁盐使植酸盐生成植酸铁沉淀，与氢氧化钠反应转化为可溶性植酸钠和棕色氢氧化铁沉淀，用钼黄法直接测出植酸磷含量。,9/4/2018,20,表1 常见植物性饲料原料植酸磷含量 Back,9/4/2018,21,
