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1、以陈坤教授2005 年在中华流行病学杂志上的文章为例，文献中只列出了基因名称、位点信息及所使用的引物。首先进入到NCBI 的 Entrez Nucleotide 数据库， http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore，点击左下的 BLAST 链接，进入序列比对界面。点击左下nucleotide blast，将文章所列上游引物CCAGTCGAGTCTACATTGTCA放入Enter Query Sequence 框内， 点击下方的BLAST 按钮， 即可进行该引物的基因序列比对。首先给出基本情况，如21 个碱基，还有图示（Graphic Summary）等。下拉观察图示部
2、分， 色彩表示得分的高低， 黑色得分最低， 本比对中可见蓝色是最高分，表示配对非常好，点击其中一个蓝的线条，则可看到其具体信息，刚才输入的引物序列也在其中，可见21 个碱基与比对基因序列完全吻合，同时也能看到你所研究的基因名称，这两项可以用来检查比对出来的基因是不是你想要的。收集其中的关键信息，就是引物在这个基因中的起始位置为6573423。用同样的方法将下游引物进行BLAST ，同样获取其在所研究基因的位置信息（终止位置）为6573835。此时可点击此页面引物序列上方显示研究基因名称的链接cytochrome P450, family 2, subfamily E, polypeptide 1，即可进入到该基因所在染色体基因组的页面，注意右边Change Region Shown， 可将刚才获取的上下游引物在基因中的位置信息填入其中，点击 Update View，下拉，即可获得上下游引物之间的序列。此时可以再看一下上下游引物是否是此序列的头和尾，以检查此序列是否为你所需。另外，显示此序列长度为413bp，而文献中显示为 410bp， 此也正常， 可能存在基因的缺失或插入现象。
