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1、第三章 受精和妊娠诊断,Fertilization and Pregnancy Diagnosis,第一节 受精第二节 妊娠与妊娠诊断,一 概述 二 配子的运行 三 配子的准备 四 受精过程 五 异常受精,第一节受精,受精的发现过程在1875年,比利时动物学家Van Beneden观察了兔雌雄原核的融合,首次提出了受精的概念。1951年,美籍华人张民觉与Austin发现了精子的获能,为受精作出了划时代的贡献。到20世纪60年代以来,体外受精技术的发展使受精已不单全是在母畜体内完成之事。1978年,世界首例试管婴儿诞生。,一 概述,大体步骤,雌、雄原核发育、融合,精、卵运行,相遇,认识,结合,精
2、卵质膜融合,多精子入卵阻滞,一 概述,二、配子的运行,1 精子的运行2 卵子的运行,第一节受精,1.1子宫颈:第一道栅栏。进入子宫颈的精子,大部分进入宫颈“隐窝”形成精子库,然后再缓慢释放出来。小部分精子直接送入子宫。经过宫颈筛选,大多数精子留在外面,少数精子才进入子宫。,1 精子的运行,二、配子的运行,1 精子的运行,二、配子的运行,精子在子宫颈中运输扫描电镜像片左:精子在子宫颈上皮细胞上的排列图右:精子与子宫颈上皮细胞的相对大小,1.2子宫(宫管结合部):第二道栅栏。精子在子宫中,借助子宫的强有力收缩作用,可较快地通过。猪精子可在此处保留24h,逐步向管内输送。,1 精子的运行,二、配子的
3、运行,精子通过子宫颈示意图,1 精子的运行,二、配子的运行,1 精子的运行,精子通过子宫颈进入子宫示意图 上:精子通过子宫颈进入子宫诸因素 下:精子与子宫颈上皮细胞的相对大小,1.3输卵管(壶腹峡结合部):第三道栅栏。在输卵管内具有受精能力的精子是很缓慢的输送。(绵羊有受精力的精子在配后68h入管,并在壶腹峡结合部停留,直到排卵时才释放入壶腹部,啮齿动物也有类似的规律),这一关筛选精子最严格。峡部精子相对处于静止状态,一旦进入壶腹便被激活,而进入壶腹部的精子数极少,牛羊不超过1000个,而绝大部分在雌性生殖道中消失。,1 精子的运行,二、配子的运行,精子库和精子栅栏示意图,1 精子的运行,二、
4、配子的运行,清除精子电镜图左、中:白细胞吞噬精子扫描电镜图右 :白细胞吞噬精子透射电镜图,二、配子的运行,2.1卵子运行过程,母畜发情排卵时,输卵管伞部开张,由于伞部和输卵管系膜不断活动,使伞部在卵巢表面扫动;同时由于卵巢固有韧带的收缩,使卵巢左右翻动,二者的共同作用使卵母细胞-卵丘复合体扫入伞内。进入伞部的卵子很快运行至壶腹部与获能精子相遇而受精,受精卵继续运行至壶峡结合部,在此处停留约2d以上,然后下行到宫管联结部,进而到达子宫内,2 卵子的运行,子宫颈粘液扫描电镜图片:左:排卵时子宫颈粘液扫描电镜像片;右:黄体期子宫颈粘液扫描电镜像片 注意:两图子宫颈粘液“网格”的相对大小,左图中精子的
5、相对大小,2.2卵子运行机理,2.2.1输卵管的活动:输卵管肌层的收缩,卵巢系膜、输卵管系膜、伞系膜及子宫输卵管韧带等的收缩活动。 2.2.2输卵管上皮的纤毛活动:上皮纤毛的摆动是卵子在输卵管内运行的主要原因之一。 2.2.3输卵管上皮的分泌活动:输卵管上皮分泌物的流向,在一定程度上影响卵子运行的方向和速度。,2 卵子的运行,2卵子的运行,卵子运输示意图,上:猪卵子运输示意图 下:卵子在输卵管峡部的运输,2 配子的运行,2.3卵子运行速度和维持受精能力时间,卵子在输卵管全程的运行时间因不同家畜而异,一般3-6d,牛约90h,绵羊约72h,猪为50h左右,马约120h。运行速度因不同区段也有差异
6、,从输卵管伞底部至壶腹部仅需5min,而在壶峡联结部内侧滞留约2d以上。卵子维持受精能力的时间要比精子短,不超过24h。但也有例外,如犬的可长达6d。,2 卵子的运行,1 精子在获能前的准备 2 卵子在受精前的准备,三、配子的准备,第一节受精,1、精子在获能前的准备,1.1精子获能(Capacitation)Austin(1951)和张明觉(1951)首先报道了精子的获能。他们指出哺乳动物刚射出的精子没有受精能力,只有在雌性生殖道内运行过程中发生进一步充分成熟的变化后,才获得受精能力,此现象称为获能。,三 配子的准备,在一般情况下,交配往往发生在发情开始或发情盛期,排卵则发生在发情结束前后。精
7、子获能的重要意义在于使精子超激活和准备进行顶体反应,以利其通过卵子的透明带。,1.1 精子获能,1、精子在获能前的准备,1.1.1 获能时精子形态学和生化变化 1.1.2 获能部位:主要部位在子宫和输卵管,最终在输卵管内完成。 1.1.3 获能因子:获能因子主要在发情期前后输卵管液内,与母体内雌激素和孕酮的比例有关。 1.1.4 获能所需要的时间:因种类不同而异,猪为3-6h,绵羊为1.5h。 1.1.5 精子获能的可逆性:精子的获能是一个可逆过程。,1.1 精子获能,1、精子在获能前的准备,1.2 顶体反应:获能时精子头部的去能因子被除掉,引起精子头部质膜形态发生变化,同时顶体内酶被激活,这
8、一过程成为顶体反应。,精子顶体反应示意图: A:精子顶体反应前; B:精子顶体反应中 C:精子顶体反应后,1 精子在获能前的准备,精子顶体反应示意图 1、精子顶体反应前 2、精子顶体反应后注意精子与卵黄膜的结合位点 3、精子顶体反应 a. 精子顶体反应前 b. 精子顶体反应中 c. 精子顶体反应后期,注意脱落的精子膜和顶体外膜 d. 精子顶体反应后,1.2 顶体反应,2、卵子在受精前的准备卵子排出后,也有类似于精子获能的成熟过程或准备过程,这一过程中,卵泡液与输卵管液的混合对卵子的作用不可忽视,经过几小时后,卵子才具有受精能力,刚排出卵子在输卵管管起始部,不会受精。有人认为,当皮质颗粒数量达最
9、大时,卵子受精能力最高。透明带表面出现多糖残基,具有识别同源精子并与其发生特异结合的作用,卵子质膜在受精前较不稳定。许多形态和生化变化,认为是卵进入输卵管后发生的,与受精有密切关系。可见,输卵管分泌物对卵子在受精前的准备是需要考虑的。卵子的核质、细胞质也发生互相渗透与变化。,三 配子的准备,四、受精过程受精是指精卵完成生理成熟后,两者互相相遇,精子主动向卵子内部转入,从而出现一系列的复杂的细胞学和细胞化学的变化过程,此变化才能使两者充分结合成新的接合子。受精始于精、卵相遇,两性原核合并并形成合子时结束。,第一节 受精,成熟的精子结构,四 受精过程,成熟的卵母细胞,四 受精过程,1 精子穿透放射
10、冠的过程:这是精子入卵的第一道屏障,精子经顶体反应,放出透明质酸酶和放射穿透酶,溶解细胞间的基质(胶质状),打开一条通道,与透明带接触。,四 受精过程,四 受精过程,2 精子穿过透明带,3 精子进入卵黄膜穿入透明带后先到卵黄周隙,当一旦接触卵黄膜,则精子停止活动,接触膜20分后,便融合一起(中后部质膜与黄膜接触)黄膜表面绒毛抓住精子头,同时卵黄旋转,使精子尾也进入卵周隙随后,精卵膜融合,渐使精子包进卵膜内。在精子头与卵黄膜融合的同时,卵子激活,并有一系列反应。,四 受精过程,精子进入卵黄膜,四 受精过程,3.1皮质反应(cartical reaction):精子接触卵黄膜时,接触点膜电荷改变并
11、扩散整个膜持续去极化数分钟,在卵黄膜下的皮质颗粒向卵子表面移动,并与卵黄膜融合,以胞吐方式将其内容物排入卵周隙,皮质反应从入卵处开始,迅速扩散于膜四周与透明带这是一种防止卵黄膜再被其他精子穿透的防御性反应。皮质颗粒内容物含有粘性加入了皮质颗粒膜透明膜物质,可阻止原体酶作用。,四 受精过程,3.2 卵黄膜反应(vitellihe reaction):皮质反应引起卵黄膜的改组,称之为封闭作用同时颗粒内容物与卵黄膜紧粘面成一透明膜叫保护层从而改变卵表面结构,防止第二个精子进入。3.3 透明带反应(zona reaction):皮质颗粒内容物的释放,改变了透明带的性质,从而阻止其他粘入穿入,可能内容相
12、中的类胰蛋白酶破坏了透明带上的特异性粘子受体。(兔卵子无透明带反应)但在猫,卵周隙中有多精,叫补充精子。,四 受精过程,3.4 原核形成:精子入卵后,头膨大,核疏松,膜消失,核内其他也消失,在疏松的染色质外双形成新膜,由一个粘细胞核成类似体细胞核,这个重新形成的核叫雄原核。雌原核的形成类似雄原核,二者同时发育,体积上升(可达原来20倍)雄原核往往比雌原核大,雌原核特点染色质分布不均(不对称)。,四 受精过程,3.5 配子配合(合子形成):充分发育的原核,相向移动至卵中央,核仁,膜消失,二者紧密接触,再迅速收缩,染色体重新组合,至此受精结束。,四 受精过程,1、多精子受精:2个或2个以上精子,同
13、时进入卵黄参加受精(仅占12%)一般卵子在衰老或阻滞失常是发生(猪多见,牛、羊偶见)。 2、双雌核受精:极体未排出而发育成原核。多见于猪。 3、雌核发育或雄核发育:受精开始正常,后来一方原核不能形成。多倍体,单倍体均在早期死亡。 4、孤雌生殖:不经配子配合,而卵子核发育。(生前死亡)。,第一节 受精,五、异常受精,第二节 妊娠与妊娠诊断,一 妊娠 二 妊娠期 三 妊娠诊断,一、妊娠,妊娠是从受精开始,经由受精卵阶段、胚胎阶段、胎儿阶段,直到分娩(妊娠结束)的整个生理过程。,第二节妊娠与妊娠诊断,早期胎儿,一 妊娠,一 妊娠,人的早期胎儿,1、早期胚胎的迁移受精卵随着卵裂与发育,经过一段时间后进
14、入子宫角。受精卵在脱出透明带之前,一直处于游离状态。在子宫内的出现迁移现象,猪的胚胎在从一角到子宫体,再到另一个宫角,单胎动物也有迁移现象,尤其双卵最后选取优势之处附着于子宫内膜上,称定位。,一 妊娠,一 妊娠,合子的形成,一 妊娠,受精卵-桑椹胚,一 妊娠,2、胚胎附植胚胎一旦在子宫中定位,便结束了游离状态,开始同母体建立紧密的联系,这个过程称为附植。首先单胚的滋养层皱襞和子宫壁皱壁加深贴附粘着,牛羊于子宫阜粘着。接着(18天左右)子宫上皮微绒毛与滋养层细胞突起(也称表面微绒毛)出现交叉。相互连接或侵入,继续形成牢固的附着。在附植过程中,激素的因素起决定性作用。,一 妊娠,一 妊娠,受精卵的
15、发育及胚泡附植,二、 妊娠期,妊娠期是指胎生动物和胎儿在子宫内完成生长发育的时期。通常从最后一次配种(有效配种)之日算起(妊娠开始),直到分娩为止(妊娠结束)所经历的一段时间。,第二节妊娠与妊娠诊断,部分动物妊娠期,二妊娠期,1 影响妊娠期因素,1.1遗传因素:亲代的遗传型可影响胎儿在子宫内的生活时间。如瘤牛的妊娠期要比黄牛的长; 1.2 环境因素:妊娠期的长短除受遗传影响外,还受外界环境的影响。春季产犊的牛妊娠期比秋季产犊的长,夏季产犊妊娠期最短; 1.3胎儿数目和性别因素:多胎家畜怀胎数目少时妊娠期比怀胎数目多时要长; 1.4管理及疾病因素:营养不良、慢性消耗性疾病、饥饿、强应激等能使分娩
16、提前,妊娠期缩短,甚至流产。,二 妊娠期,2 胎儿数目,根据正常排卵的卵子数和子宫内的胎儿数可将家畜分为两类:单胎动物(monotocous animals)和多胎动物(polytocous animals) 2.1 单胎动物:正常情况下,只排出一个卵子,子宫内只有一个胎儿发育。牛偶见双胎,罕见三胎、四胎;马罕见双胎。绵羊一般看作单胎动物。 2.2 多胎动物:通常一次能排3-15枚或更多枚卵子,妊娠时子宫内都有两个以上胎儿,只有一个胎儿的情况很少。猪6-12头,大型犬6-10只,小型犬2-4只,猫平均3-5只。,二 妊娠期,三、妊娠诊断采用临床和实验室的方法对动物是否妊娠、妊娠时间及胎儿和生殖器官的异常情况进行检查,叫妊娠诊断。,第二节妊娠与妊娠诊断,1 妊娠诊断的方法1.1、外部诊断法:问诊:配种日期和配种次数;最后一次配种后是否发情;配种以后,母畜食欲是否增进。视诊:注意体态及胎动等变化。腹部轮廓,一般腹部两侧不对称;检查阴道黏膜色泽、黏液性状和子宫颈形状及其黏液的变化。,三 妊娠诊断,触诊:一按突然一松(羊用之),可以隔着腹壁直接摸胎儿,看是否有硬块,羊有时可摸到子叶。此法只能用于妊娠后期,大家畜不如小家畜可靠。听诊:隔着母体腹壁听取胎儿心音,听诊部位同外部触诊部位基本一样。,