药理学实验课

《药理学实验课》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药理学实验课（169页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、药理学实验课,药理教研室,药学专业实验课程安排,（1）实验基本技能,（2）不同给药途径对药物的影响,（4）药物对家兔离体肠平滑肌的作用,（5）吗啡镇痛实验,（3）药物抗炎实验,足肿胀法,耳片法,热板法,扭体法,临床医学（本）实验课程,（1）实验基本技能,（2）不同给药途径对药物的 影响,（5）药物对家兔离体肠平滑肌的作用,（7）药物对肠推进实验的影响,（4）吗啡镇痛实验,（3）药物抗炎实验,（8）药物对家兔心电图的影响,（6）药物对家兔动脉血压的影响,实验课程学习要求,实验课程学习目的,药理学实验一、基本实验操作 看短片,实验报告,标题 实验目的： 实验原理： 实验器材： 实验方法： 结果：

2、讨论： 结论：,二、不同给药途径对药物的影响,实验目的：掌握小鼠给药的基本方法。比较不同给药途径药物起效的时 间快慢 实验原理：不同的给药途径药物吸收不同,1,实验动物：小鼠 实验器材：0.4%戊巴比妥钠、1ml注射器、 1ml灌胃器。,2,取6只小鼠，称重、分组、标记给0.4戊巴比妥钠（腹腔、皮下、灌胃）（0.1ml/10g）观察小鼠翻正反射消失及恢复的时间分析、比较实验结果,计时,（1）注意给药途径的正确操作。（2）注意小鼠翻正反射消失时间判定（1min）。,4,仔细观察记录实验 结果，结合药理学 总论知识思考，何 种给药途径起效最 快。为什么？,药理学实验二、抗炎实验 1、大鼠足肿胀法2

3、、小鼠耳片法,1、大鼠足肿胀法,1.1 实验目的：学习利用鸡蛋清制急性炎症动物模型方法。观察糖皮质激素的抗炎作用。 1.2 实验原理： 鸡蛋清为异性蛋白，可致动物急性炎症，出现局部肿胀，容积增加。比较給药组与对照组动物局部容积的变化，从而观察到药物的抗炎作用。,1,和,实验动物：大鼠（雄性）实验药物：0.5%氢化可的松、10%鸡蛋清、生理盐水主要仪器：（PV-200足趾肿胀测定仪）,大鼠两只：称重、标记,甲、乙二鼠右踝关节的突起点处用笔划线作为测量标志，测定大鼠正常足容积(见后图),动物,给药30min， 从右后足掌心向掌跖关节方向进针，皮下注射10%新鲜蛋清0.1ml。 (见后图),注射蛋清

4、后15min、30 min、45min、，测量右后足的体积，记录数据。 计算肿胀率=（药后-药前体积）/ 药前体积100%,甲（给药组）：腹腔注射0.5%氢化可的松溶液 0.3ml/100g 体重 乙（对照组）：腹腔注射生理盐水0.3ml/100g 体重,计时,皮下注射新鲜蛋清,抗炎实验中动物性别的选择：雄性 测定大鼠足体积时，选定统一测量位置（大鼠足外踝关节突起） 注意测量时别把鼠足插得过深，避免测量杯中水溢出，影响准确性。 大鼠捉拿时别捉得过紧，避免其窒息死亡。 鸡蛋清现配现用。,2、小鼠耳片法,2.1 实验目的：学习利用化学药物刺激制急性炎症动物模型方法。观察糖皮质激素的抗炎作用。 2.

5、2 实验原理： 化学刺激物，可致动物急性炎症，出现局部肿胀，重量改变，比较給予药物前后动物局部肿胀程度的变化从而观察到药物的抗炎作用。,和,实验动物：小鼠（雄性）实验药物：0.1%地塞米松、二甲苯、生理盐水主要仪器： 分析天平、打孔器、手术剪等,小鼠4只，称重、标记,四只分二组,30min后用二甲苯0.05ml均匀涂抹每只鼠的右耳,涂抹45min后小鼠脱臼处死，分别用打孔器取相同部位左右耳片，电子天平称重。计算：右耳-左耳=肿胀度； 肿胀率=（右耳-左耳）/左耳100%,给药组：腹腔注射0.1地塞米松0.1ml/10g 体重 对照组：腹腔注射生理盐水0.1ml/10g 体重,计时,抗炎实验中动

6、物性别的选择：雄性 小鼠耳廓滴加二甲苯时，正反面均匀涂抹。避免滴入耳廓内。 小鼠左右耳打耳片位置统一（耳廓中间部位）。 使用打孔器注意：1、安全；2、别打硬物。 注意时间合理分配。,4,本实验中选择雄性动物的原因？,药理学实验 四、药物对家兔离体肠平滑肌的作用,药物对家兔离体肠平滑肌的作用,浴槽实验前准备(预热）：,1、领取器材,2、浴槽内加水,3、测定筒内加液,4、接通电源,5、按压温度调节旋钮,6、调温为37,1.1 实验目的：学习离体平滑肌器官的实验方法。观察拟胆碱药和抗胆碱药对离体家兔肠平滑肌的作用。 1.2 实验原理： 乙酰胆碱通过激动M受体兴奋胃肠平滑肌；阿托平可阻断M受体；氯化钡

7、直接兴奋胃肠平滑肌。,1,和,实验动物：家兔实验药物：乙酰胆碱溶液（1/10万）、0.1% 硫酸阿托品溶液、1% 氯化钡溶液 实验试剂：台氏液主要仪器：离体平滑肌槽（浴槽）,在浴槽（大试管）中，加入台氏液70ml （标线处），加热，维持水370.5 。,3,3,斜角在上,取家兔一只，颈椎脱臼处死。,立即打开腹腔，找到幽门部，分离十二指肠，以2cm左右穿线，分段结扎，剪取肠段（一只兔取三段）。,每组取一肠段，在上下结扎线内侧边缘各剪一小口。肠段贯通。,3,将肠段，一端连结通气钩，置测定管（麦氏浴槽）中。另一端连结张力换能器弹簧片上。上下调节双凹夹，控制张力的大小。,3,打开气量调节旋钮，让气泡缓

8、慢通入，1-2个气泡/秒即可。,打开电脑，点击桌面中BL-420图标，进入主菜单，点击工具栏上的“实验项目”，消化道实验，消化道平滑肌生理特性（2）,双击,正常曲线,乙酰胆碱,阿托品,乙酰胆碱,1. 肠管稳定10分钟，记录一段正常活动曲线 。,2. 加入1:10万乙酰胆碱溶液0.2ml，记录其收缩幅度，待收缩明显后。,3. 立即加入0.05% 硫酸阿托品0.2ml。观察结果。,4. 平滑肌收缩曲线稳定后，再次加入1:10万乙酰胆碱溶液0.2ml ，结果与（1）相比较，观察结果有何不同。,3,5.加入1% 氯化钡溶液0.2ml，观察实验结果。,3,6.待作用明显后，加入0.05% 硫酸阿托品溶液

9、0.2ml，再次观察结果。,反演窗口及剪辑,1拖,2点击,剪辑板（同时复制）,冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管。 如需换液，台氏液液面高度及温度应与以前保持一致。 加药时不要把药液直接加到标本上，以免影响结果。 浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节。,4,实验中能影响离体肠肌收缩活性的必要条件有哪些？,药理学实验 三、吗啡镇痛实验,实验目的： 掌握镇痛药的实验方法（热板法、扭体法）观察药物的镇痛作用实验原理：热刺激或者化学刺激物使小鼠产生不同的疼痛反应，观察给药前后小鼠疼痛反应的变化。 （痛阈值、扭体次数）,1,实验动物：小鼠（热板法中小鼠为雌性）实验药物： 0.1%吗啡

10、实验试剂：0.1酒石酸锑钾（或0.7%冰醋酸）、生理盐水主要仪器：热板测痛仪（RB-200智能热板仪）,2,打开实验仪器、设定温度（55）,动物初筛（选出四只），称重，合格动物分二组,测定药前痛阈值。,给药组：腹腔注射0.1%吗啡 0.1ml/10g体重 对照组：腹腔注射生理盐水0.1ml/10g体重,给药后15min、30min、45min再次测定各组小鼠痛阈值1次。,实验数据记录、整理、分析,二组,痛阈值即小鼠出现疼痛反应的时间。（以小鼠添后足作为出现疼痛观察指标。） 筛选指标以痛阈值大于5秒，小于30秒，做为筛选合格动物。 药前痛阈值测定2次痛阈值，2次间隔时间5min，取平均值， 为给

11、药前正常痛阈值。,返回,吗啡热板法镇痛结果,用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值组别 剂量（mg/kg） 动物数 药前痛阈值（s） 药后痛阈值(s) 药后痛阈值提高百分率(%)15min 30min 45min 15min 30min 45min生理盐水组 0.1ml/10g 20.1%吗啡组 0.1ml/10g 2,痛阈值提高百分率=,100%,b,四只小鼠随机分二组,给药组：腹腔注射0.1%吗啡 0.1ml/10g体重 对照组：腹腔注射生理盐水0.1ml/10g体重,各组小鼠均腹腔注射0.7%冰醋酸（0.1%酒石酸锑钾）0.2ml/只,记录各组小鼠潜伏期、15min内的扭体次

12、数,小鼠扭体反应,（给药出现扭体时间）,30min后,吗啡对小鼠的镇痛作用（扭体法）,注：疼痛潜伏期超过15mim，以15mim（900s）计。,热板仪温度设定：550.5 室温 :以15 20C为宜 热板法中动物性别的选择：雌性 痛阈值判定指标：添后足 初筛：（5s 痛阈值时间 30s）。 超过60s动物未添足，将动物取出，痛阈值以60s计算 实验中保持小鼠足底及热板内干净、干燥。 热板仪测量中注意：及时盖鼠盒盖，避免温度散失。 扭体法实验中观察：潜伏期：以注射刺激物到出现疼痛反应（开始腹部凹陷或扭体）计时。扭体次数：只数扭体反应的次数。 酒石酸锑钾、冰醋酸现用现配,4,药理学实验八、药物对

13、家兔动脉血压的影响,1.1 实验目的：学习麻醉动物急性血压实验的方法 。观察传出神经药物对动物血压的影响 。 1.2 实验原理： 盐酸肾上腺素溶液 、酚妥拉明溶液等药物能与心肌或者血管平滑肌上的相应受体结合，从而影响家兔的血压。,1,和,实验动物：家兔实验药物：肝素生理盐水液(500ml 生理盐水加肝素12ml)、1.5%戊巴比妥钠溶液、 0.01%肾上腺素溶液、 0.1%酚妥拉明溶液。,和,主要仪器：压力换能器1台、BL-420生物机能实验系统1套、手术刀1把、手术剪1把、止血钳2把、眼科剪1把、三通2个、气管插管1个、动脉插管（留置针）1根、动脉夹1个、输液针1根、20ml注射器1个、5m

14、l注射器1个、1ml注射器3个、烧杯1个、纱布1块、丝线等。,家兔称重，找到耳缘静脉，用输液针，耳缘静脉注射1.5%戊巴比妥钠2ml/kg，麻醉。（固定输液针，建立静脉输液通道）注入适量肝素生理盐水液（冲洗管道并防凝血）。,将动物背位固定于手术台上，剪去颈部的毛，颈正中切口，分离气管，（作一倒“T”形切口，插入气管插管，结扎固定。据情况可免）。,3,分离气管 气管插管,留置针管与压力换能器相连（充满肝素生理盐水）并连接在生物信号采集系统一通道上； 在气管一侧的颈动脉鞘内分离颈总动脉（注意有迷走神经伴行，应将其与颈总动脉分离）。 颈总动脉近心、远心端各穿一根线，远心端结扎；然后用动脉夹夹住近心端

15、，在靠近远心结扎处，向心方向，剪一V字型口，插入充满肝素生理盐水液动脉插管，结扎近心端，固定于动脉插管小叉上。 慢慢松开颈总动脉夹，描记正常血压曲线。,3,在气管一侧的颈动脉鞘内分离颈总动脉，进行 颈总动脉插管,分离得到颈总动脉,颈总动脉插管,连接压力换能器后，打开电脑，点击桌面上的BL-420图标，进入血压实验系统。,3,描记正常血压曲线 静脉注射0.01%肾上腺素0.15ml/kg，描记血压曲线。 恢复正常后，静脉注射0.1%酚妥拉明（0.15ml/kg) ，描记血压曲线。 恢复正常后，再次静脉注射0.01%肾上腺素0.15ml/kg，描记血压曲线。 注：每次注射药物后都需推注适量肝素生理盐水液冲洗。,作用于 、受体 的药物,3,建立静脉通道时，输液针一定要固定好，防止动物挣扎时滑脱，每次给药后都药用适量肝素生理盐水液冲洗。 随时注意插管位置，特别在挣扎时，避免扭转而阻塞血流或刺破血管。 两次给药之间须等待血压恢复正常。,4,3、先加入酚妥拉明再加入肾上腺素，血压的变化情况与第一次加入肾上腺素有何变化？为什么？,五、传出神经系统药物 对小鼠胃肠推进实验的影响,实验目的：掌握小鼠胃肠推进实验基本方法。比较拟胆碱药、抗胆碱药的作用。 实验原理：胃肠兴奋，蠕动增强，小肠中的碳墨运行长；反之运行短。,