《黄颡鱼“全雄1号”省推广中心》由会员分享，可在线阅读，更多相关《黄颡鱼“全雄1号”省推广中心（150页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、湖北省水产技术推广中心,黄颡鱼“全雄1号”品种培育与商业应用,刘汉勤 Tel: 13886089203 e-mail: ,水利部中科院水工程生态研究所 INSTITUTE OF HYDROECOLOGY MWR AND CAS,汇报提纲,项目来源：全雄性黄颡鱼的研究（编号：20002P0801）是湖北省科技厅2000年下达的重点科技攻关计划项目 完成单位：水利部中国科学院水工程生态研究所、中国科学院水生生物研究所和武汉百瑞生物技术有限公司共同研发完成,项目来源,1）国家自然科学基金面上项目（编号：31172400）2）公益性行业（农业）科研专项经费项目（编号: 20090304604- 03、
2、20090304604-04）3）农业科技成果转化资金项目（编号：2010GB23320633）4）“十二五”国家科技支撑计划（编号：2012BAD26B05）5）中国科学院院长基金（编号：082403-1-301）6）湖北省重点科技发展项目计划（攻关计划，编号：20002P0801）7）湖北省自然科学基金（编号：2009CDA121）8）湖北省自然科学基金项目（编号：2009CDB330）9）湖北省自然科学基金项目（编号：2010CBB02101）,项目支持,全国黄颡鱼产量(单位：吨）,分类地位：鲶形目(Siluriformes)、鮠科(Bagridae)、黄颡鱼属(Pseudobagrus
3、) 经济价值：肉质细嫩、肉味鲜美、无肌间细刺，重要的名特优养殖品种,（数据源于中国渔业统计年鉴）,全国黄颡鱼苗种需求(单位：尾),2011年全国部分省份黄颡鱼养殖产量（单位：吨）,项目背景,市场需求,项目背景养殖需求,雄黄颡鱼和雌黄颡鱼,2008年，湖北荆州某地池塘养殖4月龄雌雄黄颡鱼体重雌鱼(n=266;雄鱼，n=269);雄性体重是雌性的2.42倍,鱼类雄性单性苗种生产的方法（ Beardmore et al.,2001；楼允东等，2008）： 人工挑选 温度控制 激素性逆转 种间杂交 转基因技术 超雄鱼技术(YY/Supermale)：稳定可靠，适合规模化生产，研究周期长,国内外发展趋势
4、,项目背景,项目背景,Mair.et al(1997)采用GMT技术生产全雄鱼工艺流程图,Varadaraj.K采用性逆转与雌核发育生产全雄鱼工艺流程图,本项目采用性逆转与雌核发育集成技术生产全雄鱼工艺流程图,项目背景,国内外技术对比,Mair, G.C., Abucay, J.S., Skibinski, D.O.F., Abella, T.A. & Beardmore, J.A. (1997). Genetic manipulation of sex ratio for the large-scale production of all-male tilapia, Oreochromis
5、niloticus. Canadian journal of fisheries and aquatic sciences, 54: 396-404., Fishgen Ltd. 网站 http:/ XY,EE2雌性化,XX,XY,XX,YY,YY,XX,XY,YY,YY,EE2雌性化,雌鱼,EE2雌性化,雌核发育Gynogenesis,全雄鱼,EE2雌性化,正常雌鱼,雌鱼,超雄鱼,超雄鱼繁育体系,全雄鱼繁育体系,第一步，获得XY生理雌鱼,第二步，经雌核发育后获得YY超雄鱼，并将其性逆转得到YY生理雌鱼,第三步，将YY超雄鱼与YY生理雌鱼交配,可批量繁育YY超雄鱼；将YY超雄鱼与正常雌鱼交配可
6、规模化生产全雄鱼,核心技术路线：采用雌核发育结合性逆转技术获得超雄及全雄黄颡鱼繁育体系,技术路线,刘汉勤等.水生生物学报.2007，31（5）：718-725,雄核发育 XY雄鱼 性逆转成 XY雌鱼,2000 2003,XY雌鱼雌核发育,2004,测交验证筛选 YY超雄鱼分子标记,2005 2006,YY生理雌鱼，建立超雄鱼繁育系,2007 2008,超雄和全雄黄颡鱼批量繁殖,20082009,黄颡鱼“全雄1号”成果鉴定和新品种申报,2010,黄颡鱼“全雄1号”全国试产产量3亿尾,2011,育种过程,研究历程,人工诱导黄颡鱼性逆转技术 人工诱导黄颡鱼雌核发育技术 黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的
7、分离及其在人工性别控制中的应用 YY超雄鱼的获得 超雄黄颡鱼繁育系的建立与批量化繁育,关键技术,性逆转鱼的解剖及第二性征的观察,40日龄解剖压片观察，左:卵巢，右：精巢,100日龄解剖观察，左:卵巢，右：精巢,成鱼直接观察第二性征，左:卵巢，右：精巢,关键技术性逆转技术,60日龄精巢,60日龄卵巢,8个候选性别特异性片段在雌雄黄颡鱼（各15尾）中AFLP 呈现,Pf62M和Pf33M是 黄颡鱼跨家系稳定的雄性连锁AFLP 标记,雄性连锁AFLP标记,黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的分离,关键技术DNA分子标记,两轮个体筛选所获得的6个黄颡鱼Y或X染色体连锁AFLP片段分别在（A）8个XX、XY和
8、YY个体中和（B）15个雌、雄鱼样品中的呈现。,Pf62-Y和Pf33-Y为Y染色体连锁片段 Pf44-X、Pf62-X、Pf63-X和Pf117-X为X染色体连锁标记,性染色体连锁AFLP标记,黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的分离,关键技术DNA分子标记,性染色体连锁片段侧翼序列克隆及转化为SCAR标记,黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的分离,关键技术DNA分子标记,D.Wang, H.-L.Mao, H.-X.Chen.,et al.,2009.Animal Genetics,40,978-981,黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的分离,关键技术DNA分子标记,2009年黄颡鱼“全雄1号”的雄性特异
9、分子标记检测结果 注：材料为：5尾YY超雄黄颡鱼，5尾普通黄颡鱼雌鱼亲本和36尾子代全雄幼鱼,45日龄卵巢,45日龄精巢,关键技术全雄黄颡鱼分子与性腺解剖检测,人工诱导黄颡鱼性逆转技术 人工诱导黄颡鱼雌核发育技术 黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的分离及其在人工性别控制中的应用 YY超雄鱼的获得 超雄黄颡鱼繁育系的建立与批量化繁育,关键技术,XX XY,EE2雌性化,XX,XY,XX,YY,YY,XX,XY,YY,YY,EE2雌性化,雌鱼,EE2雌性化,雌核发育Gynogenesis,全雄鱼,EE2雌性化,正常雌鱼,雌鱼,超雄鱼,超雄鱼繁育体系,全雄鱼繁育体系,第一步，获得XY生理雌鱼,第二步，经
10、雌核发育后获得YY超雄鱼，并将其性逆转得到YY生理雌鱼,第三步，将YY超雄鱼与YY生理雌鱼交配,可批量繁育YY超雄鱼；将YY超雄鱼与正常雌鱼交配可规模化生产全雄鱼,核心技术路线：采用雌核发育结合性逆转技术获得超雄及全雄黄颡鱼繁育体系,刘汉勤等.水生生物学报.2007，31（5）：718-725,关键技术YY超雄鱼的获得,YY超雄黄颡鱼及YY生理雌鱼的测交验证示意图,XY,EE2雌性化,雌核发育,候选雌鱼(XX和YY),候选雄鱼( YY),淘汰,正常雌鱼(XX),筛选子代均为100%雄鱼家系或组合,正常雄鱼( XY),正常雌鱼(XX),方法1,方法2,方法3,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁
11、育,侯选的“YY”超雄黄颡鱼与正常XX雌鱼后代测交的性比,注：*，经过卡方检验，0.95P 值 1.00，即出现理论上后代雌雄性比(0：N) 概率在95%-100%之间，侯选亲本可确认为YY黄颡鱼雄鱼。,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,侯选的“YY”超雄黄颡鱼与正常XX雌鱼后代测交的性比（续）,注：*，经过卡方检验，0.95P 值 1.00，即出现理论上后代雌雄性比(0：N) 概率在95%-100%之间，侯选亲本可确认为YY黄颡鱼雄鱼。,2007年，30组测交实验，筛选到YY超雄黄颡鱼12尾，其概率为40%,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与正常雄鱼XY
12、后代测交的性比,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与正常雄鱼XY后代测交的性比（续）,注：*，经过卡方检验，0.95P 值 1.00，即出现理论上后代雌雄性比(0：N) 概率在95%-100%之间，侯选亲本可确认为“YY”黄颡鱼雌鱼。,2007年，33组测交实验，筛选到YY黄颡鱼雌鱼7尾，其概率为21%,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,人工诱导黄颡鱼性逆转技术 人工诱导黄颡鱼雌核发育技术 黄颡鱼性别连锁特异DNA标记的分离及其在人工性别控制中的应用 YY超雄鱼的获得 超雄黄颡鱼繁育系的建立与批量化繁育,关键技术,侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与侯选的“YY”黄颡
13、鱼雄鱼交配后代的性比,注：“”表示由于测交验证数据缺失没有家系记录或子代数据缺失，“*”表示基因型为YY的黄颡鱼家系；“#” 表示被保留用于建立超雄黄颡鱼繁育系组合,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与侯选的“YY”黄颡鱼雄鱼交配后代的性比（续）,注：“”表示由于测交验证数据缺失没有家系记录或子代数据缺失，“*”表示基因型为YY的黄颡鱼家系；“#” 表示被保留用于建立超雄黄颡鱼繁育系组合,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与侯选的“YY”黄颡鱼雄鱼交配后代的性比（续）,注：“”表示由于测交验证数据缺失没有家系记录或子代数据缺失，“*”
14、表示基因型为YY的黄颡鱼家系；“#” 表示被保留用于建立超雄黄颡鱼繁育系组合,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与侯选的“YY”黄颡鱼雄鱼交配后代的性比（续）,注：“”表示由于测交验证数据缺失没有家系记录或子代数据缺失，“*”表示基因型为YY的黄颡鱼家系；“#” 表示被保留用于建立超雄黄颡鱼繁育系组合,2007年，实施58组侯选的“YY”黄颡鱼雌鱼与侯选的“YY”黄颡鱼雄鱼配对实验，配对成功家系2个，其概率为3.4%.,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,YY超雄黄颡鱼的生殖力,图7-8 YY超雄黄颡鱼与对照雄鱼的精子数量,图7-9 YY超雄黄颡鱼与对照雄鱼精
15、子对应的受精率,精子数量,受精率,1龄和2龄YY超雄黄颡鱼性精子数量与对照雄鱼之间均没有显著性差异（图7-8）；1龄和2龄YY超雄黄颡鱼与对照雄鱼精子对应的受精率之间均没有显著性差异（图7-9）；,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,YY生理雌鱼与YY超雄鱼之间的受精率,图7-12 1龄YY雌鱼与1龄YY超雄魚及对照雌鱼与雄鱼的受精率,图7-13 2龄YY雌鱼与2龄YY超雄魚及对照雌鱼与雄鱼的受精率,1龄YY雌鱼与1龄YY超雄魚受精率显著性低于对照雌鱼与雄鱼的受精率(P 0.05)（图7-12）；2龄YY雌鱼与2龄YY超雄鱼受精率显著性低于对照雌鱼与雄鱼的受精率(P 0.05)（图7-13）。,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,YY超雄黄颡鱼繁育系的遗传杂合度,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,图 历年YY超雄黄颡鱼的规模化繁育,关键技术超雄鱼繁育系的建立与批量化繁育,7.8,4,5,6,全雄黄颡鱼种质检测报告,全雄黄颡鱼种质检测报告,全雄黄颡鱼种质检测报告,全雄黄颡鱼种质检测报告,检测结果：全雄黄颡鱼符合中华人民共和国水产行业标准黄颡鱼(SC 1070-2004),
