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1、病原性球菌及检验,1. 简述病原性球菌的概念及种类。 2. 熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、 临床意义。 3. 说出葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。,学习目的与要求,对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。主要包括有 1、G+球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌。 2、G-球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌等。,第一节 葡萄球菌属 (Staphylococcus),（一）形态与染色 G+， 球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。,一、生 物 学 特 性,（二）培养特性 营养：要求不高，耐盐。 液体：均匀浑浊生长 普通琼脂平板： 血液琼脂
2、平板：,高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落； 其他葡萄球菌为白色菌落。,（三）生化反应 活泼 分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇） 触酶（）（区别于链球菌属）,（四）抗原构造 、蛋白抗原（） 、多糖抗原 金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸 （检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断） 凝固酶（）：甘油磷壁酸,（五）分类: 个种及亚种 、按色素分类：金、白、柠 、按凝固酶分类： 凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌 、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型 4. 据色素、生化反应分： 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌,三种葡萄球菌的主要性状,（六）抵抗力 无芽胞菌中最强，
3、耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。 易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.3%、3%及14%。,长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。 MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,二、致病性和免疫性,(一)致病物质 金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。 1血浆凝固酶（coagulase)： 分：结
4、合型凝固酶、游离型凝固酶。 鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。,2葡萄球菌溶血素（staphylolysin）,3杀白细胞素（leukocidin） 4肠毒素（enterotoxin）： （A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H 9个血清型） 5表皮剥脱毒素（exfoliative toxin） 6. 毒性休克综合征毒素1（toxic shock syndrome toxin 1, TSST1）,（二）所致疾病 1侵袭性疾病： （1）皮肤软组织感染 特点：病灶局限且脓汁粘稠,（2）内脏器官感染,（3）全身感染,（4）尿路感染,2毒素性疾病 （1）食物中毒,（2）烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引
5、起。,（3）毒性休克综合征 由TSST1引起,（4）假膜性肠炎,人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。 CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。,3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性,三、微 生 物 学 检 验,（一）标本采集 （二）检验程序 （三）检验方法,三、微 生 物 学 检 验,（一）标本采集 根据病情采集标本 种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。 注意：无菌操作，避免污染。,（二）葡萄球
6、菌检验程序,脓液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液,脑脊液 血液,粪便、呕吐物,直接涂片染色,增菌培养,分离培养 （血平板）,分离培养 （高盐甘露醇平板）,取可疑菌落,鉴定试验 药敏试验,涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 其他鉴定试验,报 告,初 报,（三）检验方法,1、直接涂片 适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等,初步报告： “查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌” 或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,2、分离培养 50ml葡萄糖肉汤（增菌）,浑浊,无菌（7天）,报告： 无菌生长,脑脊液、脓液、 穿刺液、咽拭、尿液,血平板,血液标本5ml,粪便、
7、呕吐物,高盐甘露醇平板,（三）检验方法,3、鉴定试验 （1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+） （2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+） （3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+） （）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生 （5）SPA检测： 金黄色葡萄球菌 （6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定 （7）API葡萄球菌鉴定试剂盒,（四）结果评价和报告,1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均 应鉴定并报告临床。 2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。 3、尿培养计数：103-104为阳性菌尿标准。 4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失
8、败时，应鉴定到种。 5、金黄色葡萄球菌（MRSA)：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。,第二节 链球菌属 (Streptococcus),一、 链 球 菌,一、生 物 学 特 性,（一）形态与染色 G+，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,一、生 物 学 特 性,（二）培养特性 条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少 数专性厌氧。 液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。 普通琼脂平板：不生长。 血液琼脂平板：,（三）生化反应 活泼 分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。 菊糖（-） 胆汁溶菌试验（-） optochin敏感试验（-）
9、触酶（-）（区别于葡萄球菌属）,（区别甲链与肺链）,（四）抗原构造 、多糖抗原（C抗原）： 群特异性。 、蛋白抗原（M、T、R、S） 型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。 3、核蛋白抗原：无特异性。,多糖抗原,蛋白质抗原,核蛋白抗原,链球菌抗原构造模式图,荚膜,（五）分类 40个种及亚种 、按溶血情况分类： （1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有12mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或溶血。为条件致病菌。 （2）乙型溶血性链球菌：菌落周围形成一个24mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或溶血。又称溶血性链球菌。致病力强，引起多种疾病。 （3）丙型链球菌：无溶血环，不致病,、按抗原结构分类： 按C抗原分群：A
10、BCD20群，对人致病的以A群为主。 按M蛋白分型：如A群：100个型，B群：4型，C群：13个型。,（五）分类,（六）抵抗力 不强，6030min杀死，对多种消毒剂敏感。 乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,二、致病性和免疫性,（一）致病物质 1、链球菌溶血素 （1）链球菌溶血素O (SLO) SLO抗体 抗链球菌溶血素O试验：协助诊断风湿热（1:400) （2）链球菌溶血素S (SLS)：无抗原性。,2、致热外毒素（猩红热毒素/红疹毒素） 3、M蛋白,4、透明质酸酶 5、链激酶 6、链道酶,（二）所致疾病 主要由A群链球菌引起。 1、化脓性感染：由皮肤伤口侵入，经呼吸道侵入，其他 途径
11、（如产褥热、蜂窝组织炎） 特点：病灶界限不清,脓汁稀薄,2中毒性疾病：猩红热 由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。,3变态反应性疾病： 风湿热 急性肾小球肾炎,二、致病性和免疫性,4其他疾病： 甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。,三、微生物学检验,（一）标本采集 （二）检验程序 （三）检验方法,（一）标本采集 根据病情采集标本 种类：脓液、鼻咽拭子、血液等 风湿热查血清抗体,（二） 链球菌的检验程序,痰、脓、穿刺液咽拭子等,脑脊液,血 液,直接涂片染色,测抗原,分离培养,增菌培养 (5%CO2葡萄糖肉汤),血平板（5%CO2）,可疑菌落,鉴定试验,初步报告,血清学
12、鉴定 （分群）,杆菌肽试验 optochin 胆汁溶菌试验 其他鉴定 敏感试验 试验,（三） 链球菌的检验方法,（1）直接镜检： （痰、脓、穿刺液、 咽拭子等） 初报：发现G+球菌， 呈链状排列,（2）分离培养： 血液、脑脊液 肉汤增菌 脓液、咽拭子等 血平板分离,（3）鉴定链球菌的主要试验： 根据形态、菌落、溶血情况进行： 杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm) Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm， d400为+,二、肺炎链球菌 (S.pneumoniae),属链球菌科，链球菌属。 广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。,一、生 物 学 特 性,（一）形态与染色
13、G+， 矛头状，成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,（二）培养特性 条件：营养要求较高，兼性厌氧菌， 5-10% C02生长最好。 产生自溶酶。 液体：培养24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。 普通琼脂平板：不生长。 血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,（三）生化反应 活泼 分解多种糖类。 菊糖（多数 + ） 胆汁溶菌试验（+） Optochin试验(+),区别甲链与肺链,（四）抗原构造 、荚膜多糖抗原： 据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。 -型引起大叶性肺炎。 、菌体多糖抗原： 可与CRP反应，产生沉淀。 3、M蛋白抗原： 型特
14、异性。,（五）抵抗力 较弱，加热56 ，20min即死亡。 对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。,荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。,（六）变异性,二、致病性和免疫性,（一）致病物质 1、荚膜： 肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。 2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O等 溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。,（二）所致疾病 存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。 可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。,三、微生物学检验,（一）
15、标本采集 痰液，脓液，血液，脑脊液等。 （二）检验程序 （三）检验方法,检验程序,痰、脓,脑脊液,血液,直接涂片 分离培养,革兰染色、美兰染色 荚膜肿胀试验,增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）,（血平板）,挑选可疑菌落,纯培养,初报,兔血清肉汤,小白鼠毒力试验,涂片 荚膜肿胀试验,胆汁溶菌试验 菊糖发酵 Optochin试验,药敏试验,报 告,检验方法,1、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液标本。 报告：“找到肺炎链球菌” 2、分离培养 硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。 血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,3、鉴定试验 （1）荚膜肿胀试验 （2）胆汁溶菌试验：+ （3）Optochin试验：+ （4）菊糖发酵试验：+ （5）小鼠毒力试验： 有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。,
