农药残留检测方法

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1、蔬菜,水果中农药多中残留的快速测定方法,安捷伦科技亚太地区北京实验室,Agilent 公司亚太地区北京环境分析实验室,一. 实验室成立于2000年8月，是Agilent公司亚太地区三大实验室之一，侧重于环境分析领域 二. 实验室的目标：1. 为Agilent 用户提供服务2. 开展国家热点环境分析项目的研究 三. 实验室仪器设备及人员1. 目前实验室仪器有6890N气相色谱，5973N气质联用仪，1100高效液相色谱，1100系列液质联用仪（四极杆和离子阱), 7500 ICP-MS，同时还新建有样品前处理间2. 配备有多名应用工程师为用户服务,Agilent 北京实验室,农药残留物的分析方法

2、,国内外常用的标准或法定的分析方法 美国的EPA方法, EPA 608, 614,617, 622,701和1618 美国的AOAC方法 美国的CDFA方法 中国国家标准方法 FAO(联合国粮农组织)/WHO(世界卫生组织)法规 日本及欧盟方法,农残分析流程,样品/分析的类型 样品的制备方法 样品的净化和浓缩 分析仪器的选型 数据分析 质量控制(quality control) 结果报告,样品和农残的类型,样品的类型 高含水量的样品 低含水量的样品 含糖量高的样品 含脂肪高的样品 环境样品 特殊样品,分析农残物的类型 含卤素的样品 有机磷化合物 氨基甲酸盐类 有机氮化合物 有机硫化合物 除虫菊

3、酯及拟除虫菊酯,样品的制备方法,样品的粉碎及均质 溶剂萃取 样品量: 10g, 20g, 50g, or 100g 混合及Omni-mixer 溶剂 - 加水或无水硫酸钠 丙酮 -US FAD Acetonitrile - CDFA Ethyl acetate - Sweden,提取方法,可根据待测农药的性质，样本种类和实验室条件选择适当的提取方法。常用方法有以下几种： 浸渍，漂洗法：对附着在样本表面的农药有很好的提取效果。 振荡法：样本+提取剂，振荡数小时，普遍采用。 匀浆，捣碎法：样本放在匀浆杯（捣碎杯）中，加提取剂，快速匀浆几分钟。简便，快速，效果好，普遍采用。 索氏提取法：经典提取法，

4、也叫完全提取法，效果好，但时间过长，干扰物质较多。 消化法：样本先消化，再用提取液提取，用于不易匀浆，不易捣碎的动物组织样本。 其他方法：超声波提取法，吹扫蒸馏法，SFE等。为提取充分，往往要经三次或多次提取。提取含水量高的样本中时,有时需加无水硫酸钠；提取含糖量高的样本中农药时，或干燥土壤中农药时，需加适量水，能提高提取效果。,样本的净化,将样本中待测农药与干扰杂质分离的处理步骤。液-液分配法：通常采用极性溶剂与非极性溶剂配成溶剂对进行多次分配，使干扰杂质和待测农药分离，达到净化目的。常用的溶剂对有：乙晴-正己烷（石油醚），二甲基甲酰胺（DMF）-正己烷（石油醚），二甲基亚砜（DMSO）-正

5、己烷（石油醚），丙酮-正己烷，丙酮-二氯甲烷（石油醚），丙酮层需加10倍的2%或4%硫酸钠或氯化钠水溶液。吸附柱层析法：常用的吸附剂有：弗罗里硅土，三氧化二铝（酸性，中性，碱性），硅胶，活性碳，硅燥土。通常吸附剂在用前需经高温烘烤3小时以上活化。70年代后期，微型柱被应用于农药残留检测工作，提高了净化效果。,样本的净化（续）,凝结沉淀法：待净化溶液中加入一定的凝结剂（如氯化铵+磷酸），能使溶液中的蛋白质，脂肪，腊质等干扰物沉淀析出，再经离心，可达到净化目的。冷冻法：低温处理样本提取液，将使溶液中的蛋白质，脂肪，腊质等干扰物沉淀析出，过滤除掉杂质。其它方法：吹扫蒸馏法，薄层层析法，磺化法，凝胶渗

6、透层析法，离子交换层析法，高压液谱柱净化法。,样品的制备方法(续),样品净化 水相分离 加NaCl 加无水硫酸钠 冷冻或吸附 溶剂分配 所有以上的组合 净化 - 前或后 - 水相分离 反相SPE - C18 或活性炭,样品的制备方法(续),样品净化 凝胶过滤色谱(gel permeation Chromatography) LH20 or Dibenzyl Co-polymer Hexane, cyclohexane, CH2Cl2, EtOAc SPE Florisil - Hexane/Acetone for Halogenated Aminopropyl - CH2Cl2/CH3OH f

7、or carbamate Reversed Phase SPE - C18 or Activated Carbon pH adjustment of solvent extracts Phosphate Buffer (2M, limit volume added),样品的制备方法(续),样品的浓缩 K-D样品浓缩器 氮气蒸发器 开口烧杯(水浴) 真空旋转蒸发仪,样品分析方法,分析仪器的选择 GC/FPD(6890 GC) - 适合有机磷和有机硫农残化合物 GC/ECD (6890 GC) - 适合有机氯农残化合物 GC/NPD (6890 GC) - 适合有机氮和有机磷化合物 GC/MSD

8、(5973N GC/MSD) 通用的分析方法 结合NIST98 标准谱库和农药谱库可以进行农残化合物的鉴定 高灵敏度, 高选择性 HPLC - 柱后衍生用荧光检测 (1100 HPLC Series) 适合氨基甲酸盐类化合物的分析 LC/MS - 高灵敏度, 高选择性的检测方法,CDFA-MRSM检测技术介绍,一、CDFA-MRSM方法简介 二、CDFA-MRSM方法优点 三、实验分析仪器配置及标准操作条件 四、分析实验标准操作程序（SOP）1. 样品前处理2. 样品检测原则3. 实验室管理,五、实验内容及结果1. 工作内容 2001.9-12 实验准备阶段1） 起草SOP，制定实验方案2）

9、定购仪器(前处理,测试仪器)3） 配制标样,作标准曲线,建立RT扫描表2002.1-2 添加回收率实验2002.3 数据分析、修改补充SOP,2. 完成工作量OP、CH、CARB共60种农药在韭菜、 黄瓜、苹果三种蔬菜水果中各两个添加水平（其中有机磷农药为0.5ppm和0.05ppm水平，有机氯农药为0.1ppm和0.01ppm水平)每个水平三次重复。实验次数 255次 实验数据 2403个3. 实验结果1）添加回收率及变异系数图2）MDL表3）典型谱图4) 达到的技术指标,4. 实验方法改进,将27种有机磷农药混合，使用保留时间锁定软件建立分析方法，随后将A，B两通道各个农药的保留时间输入到

10、RTL 表中。在样品分析完成后，使用RTL 命令当中Autosearch 功能，色谱工作站自动将所做样品A，B两通道的数据与RTL表中锁定农药的保留时间进行对比，并列出扫描到的农药。据此可对样品当中农残进行定性。 RTL数据表可完全替代扫描表，实现自动检索。,Next,A通道27种有机磷农药色谱图,B通道27种有机磷农药色谱图,Back,农残快速检测技术化学法（MRSM）与生物法（酶法）比较,Next,蔬菜、水果中MRSM技术样品前处理流程,称 样,溶剂提取,蒸发浓缩,溶 解（己烷）,固相萃取柱 （FL，1g）,定 容 GC-ECD,溶 解（丙酮）,定 容,混 匀,确 证 GC-MS,溶解（甲

11、醇/二氯甲烷）,固相萃取柱 （NH2，0.5g）,微孔滤膜 LC-FLD,定 容，混 匀,技术关键:1.前处理采用固相萃取2.气相色谱配置双柱双检定器液相色谱配置荧光检定器和柱后衍生系统 3.用气质确证,Back,微孔滤膜 GC-FPD,过滤，静止分层，取3份,高速匀浆,样品初加工,将样品切碎后，放入普通食品加工机中进行简单加工,Back,在天平上准确称25克样品,Back,用量杯量取50ml乙腈倒入称好的样品当中,Back,用高速匀浆机匀浆2分钟,Back,将过滤液静置10分钟，待水相和乙腈相分层,将乙腈提取液过滤至盛有NaCl的具塞量筒中，然后剧烈震荡1分钟,Back,分别移取10ml乙腈

12、溶液（OP, CH)或者20ml溶液（MS）至烧杯中，将烧杯置于80水浴上，用氮气缓缓吹扫,Back,将定容好的溶液在旋涡混合器上混合均匀,Back,Back,使用Agilent公司AccuBONDTM固相萃取柱分离纯化提取液，使用离心管接收淋洗液,如检测有机氯农药，采用Florisil(1g)固相萃取柱.如检测氨基甲酸酯类农药,使用Aminopropyl(0.5g)柱,将离心管中收集的淋洗液放在水浴温度为55的氮吹仪上，用氮气缓慢吹扫并定容到5ml，随后用气相色谱检测,Back,FDA-MRM与CDFA-MRSM比较,FDA-MRM,CDFA-MRSM,样 品,过 滤,取定量样品液,固相萃取

13、（SPE：C18）,加丙酮、CH2Cl2,固相萃取 （SPE：SAX，PSA）,GC,溶剂 （丙酮）,样 品,溶剂 （乙腈）,静止分离,取定量样品液,固相萃取 （SPE：Florisil，NH2）,Back,HPLC,GC-MS,GC,HPLC,GC-MS,蔬菜、水果中农药残留检测MRSM与传统方法比较 Next,MRSM技术对仪器配制的要求,Next,Agilent 1100系列液相色谱与Pickering 5200型柱后衍生系统,DB-1与DB-17毛细管色谱柱,Agilent 5973N 气相色谱-质谱联用仪,Next,配备双进样塔，双ECD，双FPD检测器的6890N气相色谱仪,有机磷

14、农药检测气相色谱操作条件： 进样口温度：220，检测器：320,载气：氮气，10ml/min 柱温：150，保持2min,以8/min升温至250，保持12min 进样量：1ul, 数据处理系统:Agilent 气相色谱工作站有机氯农药检测气相色谱操作条件： 进样口温度：200，检测器：320,载气：氮气，1ml/min 柱温：150，保持2min,以6/min升温至270，保持8min(菊酯类农药相应延长) 进样量：1ul, 数据处理系统:Agilent 气相色谱工作站,Back,OPM-韭菜 A通道,Next,Back,0.5 ppm,0.05 ppm,OPM-韭菜 B通道,Next,Ba

15、ck,0.5 ppm,0.05 ppm,OPM-苹果 A通道,Next,Back ,0.5 ppm,0.05 ppm,OPM-苹果 B通道,Next,Back ,0.5 ppm,0.05 ppm,OPM-黄瓜 A通道,Next,Back ,0.5 ppm,0.05 ppm,OPM-黄瓜 B通道,Next,Back ,0.5 ppm,0.05 ppm,CHM-韭菜 A通道,Next,Back ,0.1 ppm,0.01 ppm,CHM-韭菜 B通道,Next,Back ,0.1 ppm,0.01 ppm,CHM-苹果 A通道,Next,Back ,0.1 ppm,0.01 ppm,CHM-苹果

16、B通道,Next,Back ,0.1 ppm,0.01 ppm,CHM-黄瓜 A通道,Next,Back ,0.1 ppm,0.01 ppm,CHM-黄瓜 B通道,Next,Back ,0.1 ppm,0.01 ppm,CARB-韭菜,Next,Back ,0.5 ppm,0.05ppm,CARB-苹果,Next,Back ,0.5 ppm,0.05ppm,CARB-黄瓜,Back,0.5 ppm,0.05ppm,有机磷农药快速扫描表,Back,Next,有机氯农药快速扫描表,Back ,Next,氨基甲酸酯农药快速扫描表,Back ,Next,有机磷方法最低检出限,Back ,Next,有机氯农药方法检出限,Back ,Next,氨基甲酸酯方法检出限,Back,Agilent实验室、天津农环总站、CDFA技术指标比较,Back,韭菜本底 A通道 谱图,