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1、CTAB 法提取槐树总DNA 分别精称 1.0g槐树新鲜叶片，去主脉，放入研钵。 用液氮将叶片组织研磨成细粉，然后将粉末分装于2mL 离心管中。 各离心管中加入65预热的 2CTAB 抽提液 1000 l 和- 巯基乙醇 4 l ，混和使之充分湿润，于65水浴锅中温育1.5h，不时混匀。 12000rpm 离心 10min，将上清液转移至新的离心管中，弃沉淀。 上清液中加入等体积的酚:氯仿:异戊醇（ 25：24：1） （v/v） ，抽提上清，颠倒混匀 7min，12000rmp 离心 10min。 将离心后所得的上清液体转移至新离心管；每管加入等体积的氯仿/ 异戊醇（24：1） （v/v） ，
2、再次抽提上清液， 12 000rpm 离心 10min，上层液体转移至新管。 每管加入 1/10 体积的 3mol/ LNaAc(pH8.0) 和等体积的异丙醇，轻轻翻转混匀，置 -20冰箱中冰浴 30min1h，沉淀 DNA 。 12000rpm 离心 10min，弃上清。 用 70酒精和无水乙醇各洗涤沉淀一次，分别离心2min 自然干燥。 加 50 l TE 缓冲液溶解 DNA ；保存于 -20 的冰箱中备用。 DNA浓度及质量检测：取 3L DNA 提取液，用 1% 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 浓度、质量。琼脂糖凝胶电泳 制备凝胶（ 1或 1.5 琼脂糖凝胶），将 1TAE电泳缓冲液和琼脂
3、糖在微波炉中经高温融化，混匀，冷却至55，倒入已封好的凝胶灌制平台上，插上样品梳。 待胶凝固后， 从制胶平台上拔出梳子， 放入加有足够 1TAE电泳缓冲液的电泳槽中，缓冲液高出凝胶表面1mm。 用适量加样缓冲液制备DNA 样品，然后用微量移液器将样品加入样品孔中。一定要包括合适的DNA 分子量标准物。 接通电源，进行电泳使DNA 向阳极移动。 当加样缓冲液中的溴酚篮迁移至足够分离DNA 片段的距离时（即：溴酚篮迁移至距凝胶底部约1cm ） ，关闭电泳。 将电泳完的凝胶放入含有溴化乙锭的溶液中染色1520min。 染色完的凝胶可以直接放在紫外呈像系统上照相。槐树 RAPD 反应体系和程序 反应体
4、系： 25 l/ 管ddH2O19. 05 l 10Buffer2. 5 l MgCl2(25mmol/ L) 1. 5 l dNTP(10mmol/ L) 0. 5 l 随机引物 (50 mol/ L) 0. 25 l Taq DNA 聚合酶 (5U/ l) 0. 2 l 模板 DNA 1. 0 l Total25. 0 l 反应程序：预变性945min 变性941min 退火361min 40个循环延伸722min 延伸7210min 药品配制1. 2CTAB 抽提液：2（W/V ）CTAB100mmol/L Tris cl，pH8.0 20mmol/L EDTA，pH8.0 1.4mol
5、/L Nacl2. 1mol/L Triscl，pH8.0 称取一定量的 Tris 溶于水中，用盐酸（ Hcl）调 pH 值至 8.0 ，定容。3. 0.5mol/L EDTA，pH8.0称取一定量的 EDTA-Na2溶于水中，用 NaOH 调 pH 值至 8.0 ，定容。4. 3mol/LNaAc(pH5.2 )：称取一定量的 NaAc 溶于水中，用冰醋酸（乙酸）调pH 值至 5.2 ，定容。5. 酚:氯仿:异戊醇（ 25：24：1） ，氯仿 /异戊醇（ 24：1） ：6. TE 缓冲液：10mmol/L Tris cl，pH8.0 1mmol/L EDTA，pH8.0 7. TAE 电泳缓冲液（ 50贮存液， pH约 8.0 ） ：242g Tris 碱57.1mL冰醋酸37.2g Na2EDTA 2H20 加 H20 至 1L （使用时稀释到 1工作液）8. 异丙醇， 70酒精，无水乙醇。
