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1、ABO和 RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和 RH（D）血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。二、适用范围：适用于血库ABO 和 RH（ D）血型鉴定三、所需材料和设备：1、材料：抗 -A、抗 -B、抗 -D 试剂、 A、B、 O 型反定型试剂红细胞，生理盐水，滴管，患者标本。2、设备：离心机，显微镜。四、操作规程1、试管法：（1）取洁净试管3 支，分别标明抗A、抗 B 及抗 D，分别加入抗A、抗 B 及 IgM 抗 D单克隆血清各1 滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5红细胞生理盐水悬液 1 滴，轻摇混匀。（2）另取洁净试管3 支，分别标明A、B 和 O，用滴管分别加入
2、受检者血浆1 滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B 和 O 型 5试剂红细胞悬液1 滴，轻摇混匀。（3）立即以 1000r/min离心 1 分钟后将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。（4）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于A、B 亚型，类B 或嵌合体血型的发现。2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗 B 及抗 D，分别加入抗A、抗 B 及抗 D 单克隆血清1 滴，再各加受检者5红细胞悬液1 滴，混匀。(2) 标明 A、B及 O 细胞，分别加入受检者血
3、浆1 滴，再各加入A、B 及 O 型试剂红细胞悬液1 滴，混匀。(3) 轻轻转动玻板， 使血清与红细胞充分混匀，连续 15 分钟以肉眼观察有无凝集（溶血）反应。有需要时也可用低倍显微镜观察结果。(4) Rh（ D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。3、结果判断：单克隆血清受检者红细胞 受检者血型受检者血浆试剂红细胞抗 A 抗 B 抗 D A 细胞B细胞O 细胞 /A 型 Rh（D） / / B型 Rh（D） / / O 型 Rh（D） / / AB 型 Rh（D） /4、凝集强度判断：4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块，
4、背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+- 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布。5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6.1、 单克隆抗体试剂好试剂细胞（除谱细胞外）每天使用前必须与相对应的红细胞好血清作阳性、阴性对照，以检测其活性。6.2、观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类 B 或顺式 AB 的发现。6.3、 人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中的抗体反应结果所决定， 因此正反定型的结果应该一致。正反定型起到一个相互验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判断ABO 血型。6.4、 反定型对ABO 亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者红细胞上A 或 B 抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。6.5、如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。【SOP 文件的更改】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
