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1、,洁净区微生物 基础知识培训2011年 赵灵芝,微生物学,药品生产质量管理规范附录中明确规定：洁净区内的人员数量应严格控制，其工作人员（包括维修、辅助人员）应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训及考核；对进入洁净室的临时人员进行指导和监督。,医药工业洁净室必须以尘粒和微生物为环境控制对象 二者相比，微生物更难以控制。 1、存在范围广 2、生长速度快 3、生存能力强,什么是微生物？,微生物（Microorganism）通常是描述一切不借助显微镜用肉眼看不见的微小生物，包括病毒、细菌、真菌、原生动物、和某些藻类。,微生物的种类,具有细胞结 构的微生物,没有细胞结构的 微生物：病毒,
2、原核生物： （由原核细胞构成的）,真核微生物 （由真核细胞构成的）,真菌显微藻类原生动物,细菌,草履虫,水绵,放线菌,微生物的共同特点 （小、多、快、强、广）,（1）体积小，面积大 （细胞以微米、纳米来计算） （2）吸收多，转化快 （3）生长旺，繁殖快 如大肠杆菌 （4）适应强，易变异 如感冒病毒 （5）分布广，种类多,分解者 微生物,消费者 动物,环境 土壤、空气、水,生产者 植物（包括部分微生物）,微生物在生态系统中的地位：,消费者，部分生产者,微生物对环境的有害影响,植物病原菌：稻瘟病烟草花叶病烟草野火病 动物病原菌：鸡霍乱猪瘟(口涕疫) 人类的疾病：非典型肺炎(SARS）爱滋病流感伤寒
3、,常见污染药品制剂的微生物,1、葡萄球菌 可引起局部感染 2、大肠杆菌 胆道和尿道感染 3、绿脓杆菌 化脓性感染、中耳炎、肺炎 4、枯草杆菌 结膜炎 5、酵母菌 使糖分解，药液产生有机酸 6、霉菌 使制剂霉坏，酸败变质,洁净室内微生物在哪里,空气 水 人员 器具,空气中的微生物,灰尘微生物的飞行器 微生物不是凭空存在，99%的微生物都附在颗粒上。控制空气中的微粒数，就是控制了微生物数量。 灰尘、微粒具有沉降和粘附在趋势，所以同一区域内，地面是微粒相对集中在地方，也是微生物相对较多的地方，墙壁也容易粘附灰尘。,98版GMP,Air lock两扇门不能同时打开,Air Lock,仓库or外包间,洁
4、净区走廊 Or DISP,高效过滤器,高效过滤器,气流,Air lock（缓冲间）的作用,控制空气对流，减少外界脏空气中的微粒、灰尘进入车间。必须保持缓冲间门的关闭，不得同时开启。,空气自净和微粒的沉降与粘附,空气自净有死角 顶送顶回（洁净走廊），地面 顶送侧回（清洗间，操作间），对面的墙角，顶棚。 微粒沉降和粘附 不能用脚踏在垫仓板和料桶上。 不得跑跳、大声喧哗。 不靠在墙上或其他物体上。,水微生物的乐园 水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。 水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。,药品生产质量管理规范第四章设备第三十四条中明确规定：纯化水、注射用水的制备、储存和分配应能防止
5、微生物的滋生和污染。储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀。管道的设计和安装应避免死角、盲管。储罐和管道要规定清洗、灭菌周期,制药工业对水质的要求,药厂的水源：城市自来水、井水等达到饮用水标准的水源。 口服制剂：片剂、颗粒剂、糖浆 容器清洗：饮用水 容器最终淋洗：纯化水 小容量注射剂：15ml 配制容器清洗：纯化水 容器最终淋洗：注射用水,人 洁净室中最大的微生物污染源,1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。 2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。 3、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。,人体内外微生物的分布,1、皮肤：表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆菌、金黄色葡
6、萄球菌等 2、口腔：唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆菌等 3、上呼吸道：包括喉、鼻道和鼻咽。甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等。 4、下呼吸道：包括气管、支气管和肺 。健康人的下呼吸道是无菌的。 5、胃肠道：大肠埃希氏菌、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中的一些种 6、泌尿生殖道：常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌、葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌,如何阻断人体污染源,药品生产质量管理规范中明确规定：进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。
7、药品生产质量管理规范中明确规定：无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。,国外实验资料，可以认为人员的发菌量有以下数据可供参考。 洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量一般为10300 个(min人)，躯体一般活动时的发菌量为1501000 个(min人)，快步行走时的发菌量为9002500 个(min人)。 咳嗽一次的发菌量一般为70700 个(min人)，喷嚏一次的发菌量一般为400060000 个(min人)。 穿平常衣服时发菌量为330062000 个(min人)。 无口罩发菌量：有口罩发菌量为(1：7)(1：14)。 发菌量：发尘量为(1 ： 500)(1：
8、1000)。 可知洁净室内穿无菌衣人员的静态发菌量一般不超过300 个(min人)，动态发菌量一般不超过1000 个(min人)。,我们的更衣流程,一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而言，脚底是最脏的部分。 脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。 一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。洗手一定要用洗手液和充足的流水。 二更 带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱下口罩 带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的包裹头发。 穿连体服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开连体服 手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。75%
9、的酒精能杀灭99%的微生物。 二次更鞋：阻断一更、二更内沉降在地板上的颗粒和微生物。洁净区工作鞋不能穿出二更的鞋箱外。,平时的卫生习惯,勤洗澡、洗头，勤换内衣 去除皮屑、头屑等人体脱落物，保持体表洁净。 勤剪头发 工作时，头皮不容易出汗，易被纸发套全部包裹。 勤剪手指甲 指甲内能够藏污纳垢，有很多的致病微生物。 勤换鞋 准备两双鞋每天交替穿着，保证鞋内干燥无异味。,器具,清洗：最后淋洗用水:纯化水。 清洗后按要求包装并有清洁标签，注明清洁日期、有效期至和清洗人 储存有效期， 混合器，7天； 部件，包括不锈钢桶、Bar、筛网等，30天,消毒（disinfection）：杀死物体上病原微生物的方法
10、，并不一定杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。 灭菌（sterilization）：杀死物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。 防腐（antisepsis）： 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。 无菌（asepsis）：不存在活的细菌。,消毒注意事项,消毒剂浓度合适，针对特定范围内的细菌选择相应的消毒剂 消毒剂在一定周期内轮换使用，以防细菌耐药。我公司常用消毒剂为：0.2%新洁尔灭、75%酒精溶液 紫外灯消毒时记录使用时间，紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70
11、%额定功率的时间）一般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。我公司规定紫外灯使用时间为1000h。,热原与内毒素,许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某些药物（类固醇）等。 1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要是脂多糖。 2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一是保护性反应。 3、其他理化特性耐热性：120加热4h，可破坏98%。180加热2h或250加热30min，才可彻底破坏。滤过性：其体积小，约在15nm之间，
12、故能通过滤器进入滤液中。具有水溶性及不挥发性。能被强酸、强碱和氧化剂破坏,热原与内毒素,4、热源引入的途径从溶剂中带进从原料中带进从容器、用具、管道和装置等带进制备过程中的污染从输液器带入,热原与内毒素,5、消除细菌内毒素的方法高温破坏法：可用180干烤34h或250干烤30min。吸附法：一般选用活性炭。蒸馏法：此法仅限于制备蒸馏水。化学酸碱和氧化法。离子交换法。反渗透法。凝胶过滤法。超滤法,药品的微生物污染,药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品及生产环境带来不良影响。药品的微生物污染也称染菌。 污染药品的细菌：常见污染药物制剂的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓
13、杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。 药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫和其它啮齿动物、生产操作人员,消毒与灭菌,下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度
14、时常为防腐剂。 无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。,芽孢,芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞； 一般的芽孢在普通的条件下可保存几年至几十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5亿年； 其对热力、干燥、辐射、化学消毒等理化因素有强大的抵抗力； 杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。,消毒与灭菌,一、物理灭菌方法 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法,消毒与灭菌,热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。 1、干热灭菌法采用灼烧或干热空气灭菌 ，使用方便，适用于玻璃器皿
15、和瓷器等耐高温的固体物的灭菌 。 2、湿热灭菌法利用热蒸汽杀死微生物。高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体 。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。,消毒与灭菌,辐射灭菌法1、紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀 菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯距离照射物不超过1.0米为宜 2、电离辐射高速电子、X射线、射线3、微波波长1mm1m,消毒与灭菌,滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。 滤菌器含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌
16、等颗粒不能通过 。 适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。,消毒与灭菌,二、化学灭菌方法 许多化学药物能影响微生物的化学组成、物理结构和生理活性，从而发挥防腐、消毒及灭菌的作用。 洁净室(区)应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。,消毒与灭菌 常用消毒剂种类和用途,卫生管理,1.了解污染源对药品生产全过程可能造成污染的来源，进行深入的了解研究，从而设计一个完好的生产工艺，制定规章制度和标准操作规程，从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包括稳定性及各种微生物参数。 2.进行微生物监测在药品生产过程中，应按GMP要求不断进行各项微生物卫生学监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备清洁灭菌的验证；对非无菌药品进行细菌和活菌数测定和病原菌的限制性检查等。,
