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1、,临床细菌培养的正确采集方法以及相关注意事项,体液细菌培养的采集及注意事项,昆明医科大学第一附属医院重症医学科（SICU）胡仁政,细菌培养（Bacterial Culture）,血培养（Blood Culture）,痰培养（ Sputum Culture ）,尿培养（ Urine Culture ）,其他体液（脑脊液、胸腔积液等）,4,1,2,3,细菌培养是指用人工方法使细菌生长繁殖的技术，即将 其接种于培养基上，使其生长繁殖，用于研究、鉴定和应用。 一般细菌可在有氧条件下，37中放1824小时生长。厌氧 菌则需在无氧环境中放23天后生长。个别细菌如结核菌要 培养1个月之久。,血培养（Bloo
2、d Culture）,血培养的概念,血培养采集的指征,血培养采集的时机,4,1,2,3,血培养采集的套数及采血量,血培养采集的操作步骤,5,6,血培养采集的部位,血培养（Blood Culture）的概念,即采集患者的血液或无菌体液标本，送至微生物实验 室培养检测。检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存 在。如有细菌，则极有可能为致病的细菌。以便进一步进 行鉴定/药敏试验。,血培养的采集指征,1.寒战、发热（=38、低温10109/L ） 3.粒细胞减少（1109/L） 4.血小板减少、皮肤、粘膜出血 5. 低血压或高血压、呼吸频率加快,6.心率异常加快、昏迷、多器官衰竭 7.休克，寒颤，僵直
3、 8.严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染) 9.当怀疑血流感染或脓毒症时,血培养采集的时机,发热高峰前12-2.5小时,发热高峰前2.5-0.5小时,发热高峰期间,发热高峰 后1-12小时,9% +,14% +,9% +,11% +,166 人,105 人,99 人,258 人,在患者接受抗生素治疗前采血,如患者已经应用抗菌药物进行治 疗，应在下一次用药之前采血培养,尽可能在患者寒战或开始发热时采血,数据来源：Thomson et al. 1991. ASCP. Mayo Clinic Study,血培养的采集部位,（ % False Positive ）,3.8%
4、,1.7%,（ 细菌易聚集官腔部位）,血培养采集的套数及采血量,成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”。注意 ：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。,多个穿刺部位采血，因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断,初发患者，绝不能只采1套标本,对于每位患者来说每次采血最少2套，3套更好,血培养采集的套数及采血量,23套血培养，有助于污染的判断,表皮葡萄球菌的临床意义 Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333,采集1套无法判断是病原菌还是
5、污染菌。,Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many Blood Cultures Are Needed J Clin Microbiol. 2007; 45:3546-3548,结 论：1.绝对不能只用一瓶，寒颤-发热之间2.每位患者每次采血最少2套，采集3套更好3.初发患者，绝不能只采1套血培养标本4.采集23套血培养，有助于污染的判断,血培养采集的套数及采血量,结论2,结论1,血液与肉汤最佳比例,1:41:10,采血量,采血量(ml)与检出率的关系,血培养每增加一毫升，真性菌血症成年人微
6、生物的检出率增加3,但并非越多越好，超过一定数量采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。,血培养采集的套数及采血量,采血量是影响灵敏度最关键因素,1,2,儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血量下，一般为13ml。 采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染,成人一份标本2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶810ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。,血培养采集的操作步骤,洗手（可手消）、戴口罩 75%酒精消毒培养瓶的橡胶塞，待干60秒 （无菌纱布或棉签清洁表面残余酒精） 75%酒精消毒穿刺部位，由内向外划圈
7、，作用（待干）30s 以碘酊或碘伏消毒穿刺部位（碘酊作用30s，碘伏作用1.5-2min） 从穿刺点由内向外划圈，消毒范围为810cm 用75%酒精消毒作用60s，待干 持穿刺针按常规方法刺入静脉，另一头刺入相应血培养瓶内 成人采血量10-20ml，婴幼儿1-5ml （严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手接触静脉，除非带有无菌手套） 血液注入血培养瓶后颠倒轻摇瓶子混匀标本与肉汤，以避免血液凝集 用75%酒精重新消毒血培养瓶橡皮塞并盖好塑料盖 立即送检（切忌将培养瓶冷藏或冷冻） 洗手、摘口罩,血液采集的注意事项,1.理想的采集时间采集血标本的时间是早晨700800 。 2.禁止从输液三通管采血，
8、一般在输液结束30分钟以后再采 血。避免从正在输液的肢体上采血，输液时采血应当遵从“远端原则”：选择在输液的对侧肢体或无输液的其他肢体（如足部）静脉采血。在四肢静脉都输液时，可以选择在输液静脉的远心端（静脉血流的上游）采血。急诊、抢救过程中在输液的同时采血，应在检验申请单上注明。 3.采血顺序是：血培养、不含添加剂的采血管（血清标本管，红色、桔红色或黄色）、凝血标本管（浅蓝色）、其他标本管。如果同时作厌氧培养和 需氧培养，应先将血标本接种厌氧培养瓶，然后再接种需氧培养瓶。 4.采静脉血时止血带结扎不能过久，可引起误差。如以结扎1min的样品结果为基数，则结3min，可使血浆总蛋白增加5，胆固醇
9、增加5，铁增加6， 胆红素增加8，乳酸则不能使用止血带。,血液采集的注意事项,5.禁止拍打手臂或反复握拳屈肘及反复穿刺等，否则会使血钾上升0.8mmol/L。采血用针头过细会使血K+升高。 6.采集标本时患者坐位或卧位对检验结果无较大差异，但以静坐510分钟后坐位（从肘静脉）采血为最佳;站立时，血液中成分浓缩，蛋白、酶类、钙、 镁等结果偏高。 7.标本的送检时间血标本采集后应尽快送检，时间最好不超过2 h。血沉应于 2 h内测定完毕，否则血沉减慢。心肌损伤标志物检验要求总周转时间小于1 h。血气分析、细菌培养标本等应该在30 min内测定。血糖测定应于半小时内送检，采血后室温放置，由于糖酵解作
10、用，每小时可降解0.05mmol/L,夏季采血后血糖将以每小时7%10%的速度分解，标本留置时间过久易影响血糖的检验结果。,痰培养（ Sputum Culture ）,气道吸痰采样,经支气管镜采样,其他,咳痰标本的采集,经气管穿刺吸引（transtracheal aspiration,TTA） 经胸壁针刺吸引（transthoracic needle aspiration, TNA,经人工气道吸引分泌物（endotracheal aspirates，ETA）,支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage, BAL） 经支气管镜直接吸引 防污染样本毛刷（protective sp
11、ecimen brush, PSB）,自行咳痰采样,痰液采集的方法,咳痰标本的采集及注意事项,在抗生素应用前采集痰标本; 应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口深咳。 经气管吸痰时注意无菌。,无痰可用35NaCl 5ml雾吸约5min导痰也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰,4,1,2,3,标本采集后12h内必须立即进行实验室处理， 如不能及时送达，应将标本暂存于4冰箱内，但放置时间不可超过24h。,厌氧培养标本的最佳运送时间取决于标本量。 被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养,尿培养（ Urine Culture ）,清洁中段尿,导尿导管尿、留置尿管,经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内
12、尿液,（一）、新鲜晨尿（这时的尿标本较浓缩和酸化，不受运动及进餐等影响。适用于尿蛋白、 尿沉渣、尿亚硝酸盐检验及细菌培养）和随机尿 （尿液可能被稀释或受进餐、药物以及新陈代谢等影响，尿中成分检出情况不尽相同。餐后尿检测易出现糖尿）。 （二）、尿胆原检测以14：0016：00时间段内留取的尿液为好。 （三）、尿液定量检查需要留取12h或24h的混合尿液，留取时应按规定时间内排出之尿液装入含有合适防腐剂的洁净容器内，混匀后记录总量，取10ml送检。,SICU：尿路感染（15%）、创伤（10%）肺炎（8%）、交叉感染（8%） MICU：尿路感染（10%）、肺炎（10%）交叉感染（5%）,导致院内感染
13、的常见原因,尿液采集的注意事项,尿液培养采集注意,1.尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道 内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误的培养结果。 2.诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本就已足够，治疗48-72小时后再采集第二份标本。对于症状不明显的病人，需采集2-3份标本。怀疑肾结核时，应连续3天采集晨尿。标本以晨起第一次尿为佳。 3.多次收集或24小时尿不能用作培养。 4.申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。 5.室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此如果30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，可暂存
14、4冰 箱，但保存也不能超过8h。,清洁中段尿液,尿标本采集,操作步骤,一、女性病人 收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗尿道区域 分开阴唇，开始排尿，排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿。 二、男性病人 回缩包皮并清洗龟头，排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿。,1.尽量取早晨第一次尿液,2.详细告知病人操作步骤,3.弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿,导尿管尿液,集尿袋内的尿液不能用作培养；,导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。,留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。,耻骨上穿刺吸取尿
15、液,可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。,方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合2cm处进针刺入膀胱；取20ml尿液；置于无菌容器中并送往实验室。,可用于厌氧菌检测,常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。,1,2,3,4,厌氧标本的采集及注意事项,临床厌氧菌感染的指正,厌氧标本采集注意事项,1）肺分泌物和痰标本：在支气管镜下或环甲膜穿刺术取材。 2）脓胸或未溃破的脓肿：局部消毒后用无菌注射器抽取，立即排尽空气，将针头插入橡皮塞中送检。 3）尿：耻骨上缘行膀胱穿刺术下抽取尿液。 4）血液：直接抽取，尽量减少空气进入培养瓶内。 5）窦道，深部脓肿：可通特别采样器采取。,1）感染局部产生气体，肿胀，坏死，皮下有捻发音。 2）有恶臭，呈脓性并含有坏死组织的分泌物应考虑厌氧菌感染，但无恶臭的分泌物不能排除厌氧菌感染。 3）粘膜附近的感染(如口腔，鼻，咽腔，肠道，外阴和阴道)易发生厌氧菌感染。 4）伴有黑色或黄色硫磺样颗粒，在紫外灯下合并红色荧光的分泌物。 5）长期使用氨基糖甙类抗生素治疗无效如链霉素，庆大霉素，卡那霉素等的患者。 6）常规血培养阴性的细菌性心内膜炎，并发脓毒性血栓静脉炎或伴有黄疸的菌血症。,昆明医科大学第一附属医院重症医学科（SICU）胡仁政,
