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1、药物分析方法学验证中各项指标的深度剖析一、线性试验主成分含量测定 以测定浓度为100% ，50%120%之间选取5个点即可。溶出（释放）度测定 以释放量的10%120%间选取5个点即可。杂质含量用杂质对照品准确测定 以杂质限度为100% ，50%120%之间选取5个点即可。测定结果： 1）阐述如何看待截距和斜率、如何应用。 2）误差在哪里，应用时的注意事项。 3）为什么没有不成线性的？通常C、H、O 、N结构，紫外监测器决定。个别化学键所致。梯度洗脱时，有时会出现不成线性。 4）都成线性、为何还要做？最小二乘法的原理知晓。唑 来 磷 酸 结 构 式引申使用： 1）有关物质测定 归一化法和自身对
2、照法的相互妙用。 2）缓释制剂溶出度测定，对照品浓度设定为中间浓度。举例说明。 3）回收率试验为何做80%120%即可？亦及样品浓度与对照品浓度接近到何等程度的理解。 4）国内只注重相关系数，不注重截距。二、精密度试验重复性试验：连续进样6次。中间精密度试验和重现性试验通过“耐用性试验中的溶液稳定性试验”来体现。浓度极低时才会不理想，加大进样量。色谱峰形极为重要，对称性、柱效等参数。加大柱温、增加流动相中有机相比例，使被测物质峰尽快出峰。三、准确度试验 用回收率来衡量作法：在80%120%间选择3点或5点，原因是由外标一点法决定的。已知杂质、且有杂质对照品的，可采用加入法，即加样回收率来评价。
3、一般情况下，只要空白辅料无干扰，回收率均是良好的！四、专属性有关物质为主，其他检测项目（含量）基本上均参照有关物质。有关物质的验证，采用中间体和降解产物（确认结构后人工合成）来验证与主成分的分离。系统适用性试验的配制方法：在100浓度的主成分溶液中加入1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。介绍配制方法 先配制杂质贮备液，再用供试品溶液（或浓的对照品溶液）来稀释，简便、易行！专属性试验验证图谱存在问题 配制相同浓度，测定样品时，主成分峰骤然加大，将杂质峰覆盖。强破坏试验的目的：验证药品在遭遇了极端的气候环境条件下产生的杂质，在所建立的色谱条件下是否能够分离、测定。 检测波长的确定涉
4、及到各被检测物质在该波长下的响应因子是否 相同，即所谓重量校正因子的问题。（f=A杂质/A被测成分）选取主成分与各杂质具有相同紫外吸收的波长（ f=1.0）。选取各杂质紫外吸收大于主成分紫外吸收的波长 （f1.0），这样可更加严格控制杂质的限度。如选取各杂质紫外吸收小于主成分紫外吸收的波 长，应必须加入重量校正因子（f99.5%）考察方法精密度，平行试 验5个样本的RSD0.2%；准确度：以测定原 料精制品的回收率计算，应在99.7%100.3% 之间（n5,RSD0.1%）；滴定终点确定的 依据：包括滴定曲线的绘制，如用指示剂法确 定终点，应用电位法校准终点颜色，提供指示 剂颜色与电位变化情
5、况的对比结果； 耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、 样品提取次数、时间等）有微小变动时，测定 结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛 刻时则应在方法中注明。 HPLC法的验证：精密度：RSD2%（n5） ；准确度：用于制剂时，要考察辅料的影 响，将一定量药物加到按处方比例配制的辅料 中（为标示量的80%120%）制成高、中、低 三个剂量，混合均匀后，每个剂量取三份样品 ，按拟定方法测定回收率，应在98%102%之 间（n9, RSD2%）。 线性范围：用已知含量的精制品配制一系列 浓度的溶液（n57），用浓度C对峰面积A或 峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，线 性方程的相关系数r0.
6、9990，截距越小越好，并 提供线性关系图； 专属性：辅料、有关物质或降解产物峰对主 药峰应无干扰； 耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、流 动相组成和pH值、不同品牌或批号的同类色谱 柱、柱温、流速、样品提取次数、时间等）有微 小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测 试条件要求苛刻时则应在方法中注明； 灵敏度：作为常量分析法，此项可不作主要 要求。 UV法的验证：精密度：RSD1%（n5）； 准确度：方法同HPLC法，回收率应在98% 102%之间（n9, RSD2%），同时要求辅料、有 关物质或降解产物在测定波长处无吸收。 线性范围：用已知含量的精制品配制一系列 浓度的溶液（n57，吸收度A在0.30.7间） ，用浓度C对A进行回归处理，线性方程的相关系 数r应0.9990，截距应趋于零，并提供线性关系 图； 耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、样 品提取次数、时间、比色法中显色剂用量、反应 温度、时间、pH值等）有微小变动时，测定结 果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时 则应在方法中注明。
