《生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义 课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生猪重要疫病样品采集要求与实验室检测意义 课件（35页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、生猪重要疫病样品采集要求生猪重要疫病样品采集要求 与实验室检测意义与实验室检测意义李峰李峰 研究员研究员山东省滨州畜牧兽医研究院山东省滨州畜牧兽医研究院山东省生猪创新团队滨州综合试验站山东省生猪创新团队滨州综合试验站生猪重要疫病实验室检测技术研修班分享内容分享内容 实验室检测的重要意义 实验室检测的主要内容 生猪主要疫病样品采集要求与注意事项 其他样品采集要求实验室检测的重要意义明确所发生的疾病种类： 传染性因素：细菌、病毒、支原体、其它微生物； 非传染性因素 单纯感染 /混合感染 是否为人兽共患病病原分子生物学检测分析 区域优势毒株基因型分析 病原分子进化与演变 病原分子序列与疫苗比对细菌培
2、养与药物敏感性试验 细菌初步鉴定：毒力、血清型 药物敏感性试验：解决合理用药问题 自家疫苗试制：技术储备开展抗体检测 疫苗免疫抗体监测与评价 野毒感染状况调查与评价：PRV、传胸 免疫程序调整与优化：母源抗体检测 疫病净化评价类别免疫场非免疫场合计30头30头30头30头场 数18172643阳性场数1061320阳性场占比%55.5635.2950.050.046.51样品数187662228303阳性数431771077样品阳性率%22.9925.7631.8235.7125.41 猪伪狂犬gE抗体检测情况统计实验室检测的主要内容实验室检测的主要内容细菌的染色 形态学观察 培养基的制备 细
3、菌分离培养 纯化 细菌的生化试验 药物敏感试验病猪的剖检病猪病料的采集、保存总RNA的提取反转录 聚合酶链式反应 （PCR） 猪瘟病毒抗体 猪伪狂犬病病毒gPI抗体(野毒) 猪流感血凝抑制试验 猪细小病毒病乳胶凝集试验（LAT） 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体DNA 提取 PCR血清学检测分子诊断细菌分离结果分析生猪主要疫病样品采集要求采样原则1、适时采集适时采集 ：尽可能采集到新鲜样品。用于分离病原体 的，须在病初发热期或出现典型临诊症状时采集；若制备血 清，空腹时采血。尸体上采样，应在动物死后立即采集。2 2、典型采样、典型采样 ：样品具有代表性。选择典型动物，即未经 药物治疗、病状典型的动物
4、；选择典型材料，病原体含量最 高的材料；尸体采样，采集有病变组织、器官或病变最明显 、最典型的部位。3 3、合理采样、合理采样 ：群体发病时，至少采5头动物的病料。每一 种样品应有足够的数量。4 4、无菌采样、无菌采样 ：无菌操作，尤其是供微生物学检查和血清 学检查的样品5 5、安全采样、安全采样：注意人员安全，防止感染，防止病原扩散 造成环境污染。病理剖检腹部朝上平放切开四肢颈部淋巴结股内则淋巴结剖检颌、颈部皮下组织、颌下淋巴结观察横切胸骨柄，暴露胸腹腔观察胸腹腔器官变化纵切胸骨柄取出胸腔器官剖开颅腔暴露脑部器官症状/病变疑似疾病体表耳尖、屁股、腹部发紫微循环障碍：猪瘟、弓形体 背部发紫，规
5、则菱形，边缘 整体猪丹毒全身通红链球菌 鼻子流血和/泡沫胸膜肺炎 背部点状出血、毛孔出血、 皮肤发白附红细胞体、蓝耳病会阴、臀部、四肢出现周边 紫色，中间白色圆形、边缘 紫褐色纽扣状坏死圆环病毒依据剖检病变推导可能发生疫病淋巴结颌下淋巴结肿大，出血性坏死全身淋巴结有大理石样出血变化腹股沟浅淋巴结水肿、切口外翻，表面苍白，渗出透明液体咽、颈及肠系膜淋巴结黄白色干酪样坏死灶淋巴结充血、水肿、小点状出血支气管淋巴结、肠系膜淋巴结髓样肿胀猪炭疽、链球菌病猪瘟、蓝耳、猪肺疫 圆环病毒2型猪结核急性猪肺疫、猪丹毒、链球菌病猪气喘病、猪肺疫、传染性胸膜肺炎、副伤寒血液血液黑或发紫，不凝固中毒，内源性毒素：弓
6、形体、胸膜肺炎、链球菌、猪丹毒血液不凝固、稀薄贫血，蓝耳、附红细胞体呼 吸 道喉头出血猪瘟 扁桃体化脓、出血猪瘟、伪狂犬 喉头有泡沫蓝耳、副猪、传胸 气管有很多粘液细菌性疾病肺出血斑点 纤维素性肺炎 心叶、尖叶、中间叶肝样变 水肿，小点状坏死 粟粒性、干酪样结节 表面零星、边界清楚、湿润肉样变猪瘟 猪肺疫、传染性胸膜肺炎 气喘病 弓形体病 结核病 流感心 脏心包积液 心包炎、心外膜炎（绒毛心） 心外膜斑点状出血 心肌条纹状坏死带 心内膜出血 心瓣膜呈菜花样 心肌内有米粒大灰白色包囊泡副猪、传胸 副猪、传胸、气喘病 猪瘟、猪肺疫、链球菌病 口蹄疫 败血症 链球菌、慢性猪丹毒 猪囊尾蚴病肝淤血肿大
7、沙门氏菌表面灰白色或灰黄色纤维素沙门氏菌病、副猪、大肠杆菌白色坏死点，弥漫性坏死沙门氏菌、伪狂犬、霉菌毒素、 中毒脂肪肝传染性胃肠炎、流行性腹泻、仔 猪大肠杆菌胆囊肿大、胆汁粘稠沙门氏菌胆囊肿大，胆汁呈黄色泥状圆环病毒脾脾边缘有锯齿状出血、梗死弥漫性出血淤血肿大，坏死脾边缘有小点状出血猪瘟、仔猪副伤寒猪瘟、猪丹毒、弓形体、猪肺疫弓形体病，霉菌毒素中毒（全）仔猪红痢胃胃粘膜斑点状出血，溃疡胃粘膜充血、卡他性炎症， 呈大红布样/麦麸状假膜粘膜下水肿胃壁增厚猪瘟、胃溃疡猪丹毒、食物中毒副伤寒水肿病水肿、大肠杆菌、魏氏梭菌肠乳糜管内无脂肪、出血病毒性腹泻乳糜管内有脂肪细菌、球虫或营养性腹泻肠壁有白色绿
8、豆大肉芽肿、淋巴滤泡增生沙门氏菌、食道线虫（大肠）、球虫（结肠、盲肠）浆膜出血猪瘟回盲瓣出血、坏死，盲肠扣状肿猪瘟肠粘膜出血流感、梭菌性肠炎、增生性肠炎肾苍白，针尖状出血猪瘟、伪狂犬淤血、肿大猪丹毒、梭菌、链球菌（紫红色、红棕色）；蓝耳（紫黑色）；增生性肠炎（灰黑色，肾乳头淡黑色）灰白色、表面隆突不平圆环病毒 膀 胱粘膜层有出血斑点猪瘟睾丸1个或2个睾丸肿大、发 炎、坏死或萎缩乙型脑炎、布氏杆菌病关节肿大、积液副猪、链球菌依据病种确定主要采集病料病名病原主要临床症状特征病理变化主要病料采集实验室诊断猪瘟HCV体温41左右，脓 性结膜炎， 皮肤 红斑点，指压不退 色，先 便秘后腹 泻，公猪包皮囊
9、积 尿， 小猪多有神 经症状。实质器官多发 性出血性为特 征的败血症病 变，肾脏有出 血点或斑，尿 道、膀胱、喉 头均有出血点 ，脾脏边缘梗 死。扁桃体、淋 巴结、脾脏 、 肾脏和血清接种PK15 细胞、分 离病毒； ELISA、RT- PCR、GIA 检测病原猪繁殖 与呼吸 障碍综 合征（ 蓝耳病 ）PRRSV母猪流产，早产， 死胎，木乃伊胎。 胎儿大小比较一致 ，少数病猪双耳、 尾部等发生短暂性 皮肤紫绀。哺乳仔 猪呈结膜炎，呼吸 障碍及流鼻涕。青 年 猪见呼吸道症 状。间质性肺炎； 肺水肿；淋巴 结肿大呈褐色 。病猪的肺、 流产胎儿的 肠和腹水、 母猪血清、 鼻拭子、粪 便、扁桃体 、脾
10、、淋 巴 结 接种Marc- 145细胞分 离鉴定； ELISA方法 检测抗体 ；分子生 物学RT- PCR病名病原主要临床症状特征病理变化主要病料采集实验室诊断猪伪狂 犬病PRV引起怀孕母猪流产 ，以死胎为主。仔 猪也可出现体温升 高，呼吸困难，下 痢和特征性神经症 状，15日龄以内仔 猪易感， 病死率 可达100%。 木乃伊胎或死 胎重吸收。扁 桃体白色溃疡 或坏死灶，肝 脏表面白色坏 死点，脾脏白 色坏死灶。脑 部水肿等。扁桃体、脊 髓、淋巴结 、 脑组织动物试验 ；接种 vero细胞 分离病毒 ；PCR检 测病原。猪圆环 病毒病 PCV2被毛粗乱，喜挤堆 ，精神沉郁， 呼 吸急促，皮肤
11、苍白 ，腹泻，消瘦。淋巴结异常肿 大、切面为白 色。脾脏肿大 ，肾脏肿大呈 土黄 色，并有 散在的红色坏 死斑 点，肺脏 质地较硬似橡 皮。肺脏、淋巴 结、肾脏分子生物 学PCR病名病原主要临床症状特征病理 变化主要病料采集实验室诊断流行性 腹泻PEDV水样腹泻，或者在腹泻之 间有呕吐。呕吐多发生于 吃食或吃奶后。一周龄内 新生仔猪发生腹泻后34 天，呈现严重脱水而死亡 ，死亡率可达50%，最高的 死亡率达100%。小肠扩张 ，内充满 黄色液体 ，肠系膜 充血，肠 系膜淋巴 结水肿。粪便、肠内 容物接种Vero 细胞，分 离病原， RT-PCR检 测。传染性 胃肠炎TGEV一般2周龄以内的仔猪
12、感染 后12-24小时会出现呕吐， 继而出现严重的水样或糊 状腹泻，粪便呈黄色，常 夹有未消化的凝乳块，恶 臭，仔猪明显脱水，发病2- 7天死亡，死亡率达100%； 在2-3周龄的仔猪，死亡率 在0-10%。主要病变 在胃和小 肠，呈现 充血、出 血并含有 未消化的 小凝乳块 ，肠壁变 薄。肠、肠内容 物接种PK15 细胞分离 病毒，分 子生物学 RT-PCR病名病原主要临床症状特征病理变化主要病 料采集实验室 诊断口蹄疫FMDV猪口腔粘膜、鼻吻部、 蹄部以及乳房皮肤发生 水疱和溃烂为特征。不 同年龄的猪易感程度不 完全相同，一般是越年 幼的仔猪发病率越高， 病情越重，死亡率越高 。仔猪心肌炎
13、。水泡皮 、水泡 液、心 脏、血 清ELISA 检测抗 体猪流感SIV发病初期病猪体温突然 升高至40.341.5，厌 食或食欲废绝，极度虚 弱，常卧地。呼吸急促 、腹式呼吸、阵发性咳 嗽。从眼和鼻流出粘液 ，鼻分泌物有时带血。 病猪挤卧在一起，难以 移动，触摸肌肉僵硬、 疼痛，打嗝。剖检可见喉、气 管充满含有气泡 的黏液，黏膜充 血，肺间质增宽 ，淋巴结肿大、 充血，脾肿大， 胃肠黏膜有卡他 出血性炎症，胸 腹腔、心包积液 。肺、脾 、淋巴 结、血 清、鼻 拭子接种 vero细 胞、鸡 胚分离 病毒， 分子生 物学RT -PCR供病原学检查材料的采集、处理 1、血液。前腔静脉或耳静脉采血。2
14、、分泌物和渗出液：采集口腔、鼻腔、喉气管、泄殖腔和阴道分泌物时， 通常是将棉棒插入天然孔反复旋转后蘸上分泌物，然后将样品端剪下。3、淋巴结、内脏器官、肌肉：淋巴结连带周围脂肪整体采集；内脏器官和 肌肉，通常取病变最明显的部位。4、水疱皮：将病变部位清水清洗，剪取新鲜水疱皮35g放入灭菌小瓶内5、肠管：选取至少6cm肠管，两端结扎，从结扎线外端稍远端剪断。以上病料采集后，立即放入灭菌的玻璃容器，密封，外贴标签。做细菌学检 查的，尽快冷藏。做病毒学检查的，尽快冷冻或加入病毒保护液。常用的病 毒保护液：含抗生素的ph7.2-7.4磷酸盐缓冲液、50%甘油磷酸盐缓冲液。供血清学检查材料的采集、处理（1
15、）采血。用于制备血清的血液采出后不加抗凝剂，不进 行脱纤处理。大中动物每头不少于5ml。（2）制备血清。采血时使血液直接流入试管，加塞，立即 摆成斜面，待血液凝固后竖起试管，使血清自然析出。也 可将血液离心分离血清。作血清学检测的血液，在采集、运送、制备血清过程中 ，均应避免震动和冻结，防止溶血，影响检测结果。（3）血清保存。制备的血清若能在一周内检测，4冷藏 ，若需保存较长时间，应于30 冻结。猪的前腔静脉采血方法猪的前腔静脉采血方法 猪只的固定。公母猪用保定绳固定，要求尽可能吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈30度以上角度(如图1)，这样，即方便采血人员察看采血部位，又使前腔静脉向外突出，静
16、脉血充胀。20kg以上的中大猪，由1-2个饲养员用捉猪器(或保定绳)拉住，头昂起，偏向右侧(如图2、3)；20kg以下的小猪，可由1-2个饲养员抓起，倒立，后背紧靠在栏架上(如图4)。图1 公母猪保定图2 中猪固定和采血图3 大猪固定和采血 图4 小猪的保定与采血 选取合适的针筒和针头。根据经验，公母 猪宜选用16#50mm针头(这种针头猪场不 常用，但很多针头生产厂家都有生产，可 以找兽医药械销售店联系购买)；30kg以上 的中大猪，宜选用12#38mm针头；10- 30kg小猪，可选用9#25mm(一次性注射器 常配的针头)；10kg以下乳猪，应选择 9#20mm针头(一次性注射器所配的另一种 规格的针头) 找准下针部位。猪的前腔静脉，越往头部越浅，但也越细 ；越靠胸部越粗，但越深。所以，采血应选择适当的部位 。小猪取血的部位太靠前，血管太小，很难扎中，而且扎 中了也很难抽到血液，所以，小猪的采血部位应稍靠后。
