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1、免疫学实验室检查免疫学实验室检查内容介绍1.HIV实验室检查2.梅毒实验室检查3.丙肝实验室检查简介简介艾滋病，医学全名为“获得性免疫缺陷综合征”（ Acquired Immune Deficiency Syndrome - AIDS）,是人体 感染了人类免疫缺陷病毒（HIV human immunodeficiency virus, ），又称艾滋病病毒所导 致的传染病。值得一提的是，HIV本身并不会引发任何疾病，而 是当免疫系统被HIV破坏后，人体由于失去抵抗能力而感染其他 的疾病导致死亡！通俗地讲，艾滋病就是人体的免疫系统被艾滋 病病毒破坏，使人体对威胁生命的各种病原体丧失了抵抗能力， 从
2、而发生多种感染或肿瘤，最后导致死亡的一种严重传染病。这 种病毒终生传染，破坏人的免疫系统，使人体丧失抵抗各种疾病 的能力。当艾滋病病毒感染者的免疫功能受到病毒的严重破坏、 以至不能维持最低的抗病能力时，感染者便发展为艾滋病病人。 随着人体免疫力的降低，人会越来越频繁地感染上各种致病微生 物，而且感染的程度也会变得越来越严重，最终会因各种复合感 染而导致死亡。艾滋病主要通过血液、不正当的性行为、吸毒和 母婴遗传四种途径传播。国际医学界至今尚无防治艾滋病的有效 药物和疗法。因此，艾滋病也被称为“超级癌症”和“世纪杀手 ”u 目前流行趋势u 从1981年发现第一例病例起， 至2011年，已有超过25
3、00W人 死于HIV感染，3400W人携带/ 感染HIV，年新增感染HIV人数 超过250W，年死亡170W。约 97%的发病出现在中低收入国家 ，其中15-24岁感染者约占总数 的39%。u我国概况u从1985年中国发现第一例HIV病例 起,截止2013年8月份，发现HIV及 其携带者超过60W人，死亡超12W 人，近年15至24岁所占感染者比例 逐年增加，同性恋之间感染所占比 例也逐年上升，尤以男男性行为增 加最为迅速，50岁以上异性传播比 例也有增长趋势。uHIV传播途径 HIV主要存在于感染者和病人的血 液、精液、阴道分泌物、乳汁和 伤口渗出液中。故性接触（包括 同性、异性和双性性接触
4、）、血 液及血制品（包括共用针具、介 入性医疗操作等）和母婴垂直传 播（包括产前、产中和产后）为 其主要传播途径，正常的人际间 交往如拥抱，共同用餐等不会传 播HIVHIVHIV构造及其抗原构造及其抗原u人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致呈 球形。病毒外膜是类脂包膜，来自宿主细胞 ，并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41；gp41 是跨膜蛋白，gp120位于表面，并与gp41 通过非共价作用结合。向内是由蛋白p17形 成的球形基质（Matrix），以及蛋白p24形 成的半锥形衣壳（Capsid），衣壳在电镜下 呈高电子密度。衣壳内含有病毒的RNA基因 组、酶（逆转录酶、整合酶、蛋白酶）以及
5、其他来自宿主细胞的成分（如tRNAlys3， 作为逆转录的引物）。ugp120和gp41构成感染因子主要结构。uHIV-1型与HIV-2型区别在于含有VPU基因 ， VPU基因为HIV-1所特有，对HIV的有效 复制及病毒体的装配与成熟不可少。艾滋病窗口期艾滋病窗口期u从感染艾滋病病毒到血液中能够检测出艾滋病病毒抗体这段时 间称为“窗口期”。u一般为2周3个月，有极少数人可 长达6个月。u在“窗口期”作艾滋病病毒抗体检测 ，结果呈“阴性”，但是体内有病毒 。u有较强的传染性，可以将病毒传播给 他人。艾滋病潜伏期艾滋病潜伏期u潜伏期：从艾滋病病毒侵入人体到出现临床症状之前这段时间。艾滋病平均潜伏
6、期为7-10年。u处于潜伏期的感染者没有症状，体表外观等一般状况正常，与常人无异。对早期发现及预防造成很大困难。u潜伏期不是静止期，更不是安全期，病毒在持续繁殖，具有强烈的破坏作用。u有传染性，可以将病毒传播给他人。HIVHIV抗体检测抗体检测1.酶联免疫法（ELISA)可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。 2.化学发光或免疫荧光试验这类
7、试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。 3.快速检测（RT）及其它抗体检测试验 免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固 相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。其他还有免疫渗滤实验和凝胶凝集实验等。HIVHIV抗原检测抗原检测u 病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或
8、病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录PCR)可用于临床诊断。u HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂u HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）
9、以及实时荧光定量PCR技术。 HIVHIV实验室生物安全防护实验室生物安全防护u菌种的分类根据其危险性决定(包括实验室感染的可能性，感染后发病的可能性，症状 轻重及愈后情况，有无致命危险及有效的防止实验室感染方法，用一般的微生物操作 方法能否防止实验室感染、我国有否此种菌种及曾否引起流行、人群免疫力等情况)。 依其危险程度的大小，我国的菌种分为四类。u致病性病原微生物可根据其易感程度分为四类，第一类、第二类病原微生物统称为高 致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病 原微生物。uHIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合级 生物
10、安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。u HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其它需要应用活病毒的研究 工作，应在级生物安全实验室（BSL-3）中进行。u HIV核酸提取和检测均应在符合级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实 验室中进行。u HIV病毒株应保存在符合级生物安全实验室（BSL-3）要求的艾滋病实验室；HIV 阳性样品，包括全血、血清、血桨和其他组织（液）、核酸提取物应保存在符合BSL- 2要求的艾滋病实验室。二类生物安全实验室u定义u生物安全实验室（biosafety laboratory ），也称生物安全防护实验室 (biosafety
11、 containment for laboratories)，是通过防护屏障和管理措施，能够避免或控制被操作的有害生物因子危害，达到生物 安全要求的生物实验室和动物实验室u二级实验室要求：u对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动物和环境不会造成严 重危害。有有效的预防和治疗措施。u实验设施u二级生物安全柜u高压消毒锅u普通冰箱u恒温培养箱u定时器u冰冻离心机u试管 试管架 移液管 无菌吸管 痰盒等等u实验室安全制度u准入制度u个人防护制度u标本接收制度u废弃物处理制度uu准入制度要点准入制度要点l实验室应进行全员安全培训并强化“普遍性防护原则”安全意识，所有的
12、血液、未固定的组织和组织液样 品，均应视为有潜在的传染性，都应以安全的方式进行操作。所有管理和检测人员都应接受省级以上艾 滋病检测实验室主持的安全培训，包括上岗前培训和复训，并接受管理人员的监督。l必须对新上岗人员进行安全教育和培训，使他们清楚实验室工作的潜在危险，通过考核等方式确认他们 具备安全操作的能力后方可单独工作。l必须对新调入人员、外来合作、进修和学习的人员进行生物安全培训，经实验室主任批准后，方可进入 实验室。l生物安全培训和监督应有客观详实的记录。l实验室主任应详细了解所有工作人员的教育和培训背景、特长、性格特点等。要根据人员特点、工作种 类、所涉及的生物材料合理安排工作区域，要
13、定期对实验室环境进行安全检查。u个人防护制度要点l 鉴于我国性病/结核病实验室的基本情况,实验工作内容,感染控制的原理,个人防护为是最重要的,也是最 后一道防护屏障,必须给予足够重视.l 穿戴顺序:口罩,帽子,防护服,护目镜,鞋套,双层手套； l 脱下顺序:外层手套,护目镜,防护服,内层手套,帽子,鞋套,口罩罩l l防护用品使用后应进行无害化处理后再做废弃处置防护用品使用后应进行无害化处理后再做废弃处置l遇有手部皮肤有开放性伤口及其他不适于工作的情况，应暂停工作。l 皮肤的微小伤口、擦伤、皲裂等，应用防水敷料严密覆盖。l工作人员上岗前必须进行HIV抗体和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒标志
14、物检测，应接种乙肝 疫苗。应每年对工作人员采血检测HIV抗体，血清应长期保留。l进实验室工作前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。l严禁在实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。l操作过程中，如发现防护服被污染应立即更换，如手套破损，应立即丢弃、洗手并换上新手套。不能用 戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。实验室应设置应急冲洗眼睛装置。u 意外事故处理l发生意外事故时，应针对事故的类型立即进行紧急处理，主要包括：l皮肤针刺伤或切割伤，应立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其它 消毒剂消毒伤口。l 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸
15、泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。l 粘膜污染：用大量流水或生理盐水冲洗污染部位。l 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。l 污染物泼溅：小范围污染物泼溅，应立即进行消毒处理和清洗。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场，查清情况，确定消毒的程序。l 发生空气污染时，可采用低温蒸汽甲醛气体对空气进行消毒，但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消毒。l 如果发生重大泼溅事故，应采取以下措施进行：l 从污染处疏散人员，但要防止污染扩散；l 控制污染扩散，锁门并禁止人员进入；l通知实验室主管领导、安全负责人等，查清情况，确定消毒处理的程序
16、。u标本接受制度要点l检测方法不同，要求的标本不同全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测。 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。 血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。 全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS（干血斑样品）样品可用于HIV核 酸的定性检测。 PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于HIV-1分离培养。l样品的编码和记录 应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编 号），保证其唯一性。采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在试管的侧面，最好使用预 先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存。l样品保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于28， 一周以上应存 放于-20以下。 用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测的可存放于4
