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1、第3章 卫生微生物学研究和检测方法 1四川大学华西公共卫生学院裴晓方裴晓方 主要内容p卫生微生物学检测特点及基本原则p卫生微生物研究和检测的方法 p卫生指示微生物 p卫生微生物研究和检测方法的前景 第一节 卫生微生物学检测特点及基本原则p卫生微生物学检测特点p卫生微生物检测基本原则卫生微生物检测的特点 p检测的对象多 病原微生物+非致病和条件致病微生物 特别是能反映环境、食品、健康相关产品等样品卫生质量的卫生指示微生物（学习后应能举例说明）4p检测的范围广标本的来源不仅局限于人体，也来源于空气、水、食品等环境Sampling5p检测的方法更敏感以检测环境标本中数量很低的致病微生物p定量测定和分
2、型检测以探明感染性疾病的 传染源 传播途径 流行情况6卫生微生物检测基本原则 p样品采集原则p样品运送原则p实验室检测原则7样品的采集原则 ?8现场调查的目的p查明突发公共卫生事件或疾病暴发流行的原因p进行卫生质量监测和评价9总原则p生物安全p代表性p针对性p及时性p防污染p防杀菌p细标记101.生物安全p防人员感染：个人防护（？） p防标本和环境的污染：无菌操作、恰当处理污染废弃物 112.注意采样的代表性影响采样代表性的因素包括采样量采样部位采样时间采样的随机性和均匀性以及按批号抽样 12采样方案的类型p二级采样方案：n、c、mp三级采样方案：n、c、m、M13ln：同一批次产品应采集的样
3、品件数lc：最大可允许超出m值样品数lm：微生物指标可接受水平的限量值lM：微生物指标的最高安全限量值注1：按照二级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许有c个样品其相应微生物指标检验值大于m值。注2：按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值；允许有c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。14Examplen=5，c=2，m=100CFU/g，M=1000CFU/g，含义是： 从一批产品中采集5个样品u若5个样品的检验结果均小于或小于等于m值（100CFU/g），则这种情况是允许的；u若2个样品
4、的结果（X）位于m值和M值之间（100CFU/gX1000CFU/g），则这种情况也是允许的；u若有3个及以上样品的检验结果位于m值和M值之间，则这种情况是不允许的；u若有任一样品的检验结果大于M值（1000CFU/g），则这种情况也是不允许的。15p在中等或严重危害的情况下使用二级抽样方案p对健康危害低的建议使用三级抽样方案1617183.注意采样的针对性p怎样注意？样品种类多样性恰当时间采样量19发热呼吸道患者样品种类p血液标本p呼吸道标本 鼻/咽拭子 痰液 鼻咽抽吸物 支气管肺泡灌洗液p胸腔穿刺液p尿液标本204.及时送检5.避免采样时外界微生物对样品的新污染采样用具、容器需严格灭菌无菌
5、操作采样216.避免采样时对微生物的杀灭作用使用刚烧灼未冷却的采样工具避免采样时引入新的抑菌物质容器消毒剂的残留227.注意对样品的详细标记样品名称编号采样时间采样者检测项目23pCOLLECTION OF SAMPLES A sample, consisting of a specified number of sample units (usually five) drawn at random from each lot, shall be taken. Each sample unit shall consist of at least 100 ml or g, unless stip
6、ulated in the method. Collect original unopened container wherever possible. 24p If the product is in bulk, several sample units can be collected from one container, while ensuring that the total number of sample units are not collected from one container.p More than one sample unit may also be coll
7、ected from large institutional or bulk containers when the total number of sample units required exceeds the number of containers in the lot. 25pPlace the collected sample units in sterile containers. A sample unit will consist of more than one container when the lot consists of containers smaller t
8、han 100 ml or g eg. four 25 ml or g containers in each sample unit.26p Employ aseptic techniques in collecting the sample units. p Keep the sample unit refrigerated (0 4) or frozen, depending on the nature of the product, during transport. pDo not allow sample units, that are usually frozen, to thaw
9、 during shipment27COLLECTION OF SAMPLESpdrawn at random psample units (usually five)pEach sample unit shall consist of at least 100 ml or gpCollect original unopened container , use sterile containers, employ aseptic techniquespKeep refrigerated (0 4oC) or frozen, avoid thawing 28样品的运送原则 ?29p尽快送检！多快
10、？为什么？30u应在规定的时间内（一般不超过34小时）送到实验室，尽快送检减少待测微生物的死亡防止繁殖对计数结果的影响 31怎样保护待检微生物?32保护待检微生物p温度调节p加入保护剂p去除其他不利于待测微生物生存的因素33p低温 34p血培养瓶须在24小时内送检，送检前置于常温环境（1530）保存p其他标本送检前应保存在48p如24小时内无法检测的标本则应置于-70或以下保存，但应避免反复冻融35ppHp蛋白质p抑制剂 抑制非目的微生物p渗透压p气体36遵循完善的样品交接制度 p有样品送检单p逐项核对送检单p检查样品是否符合检验要求p确证无误方可签收待检37实验室检验原则 38pp相应的相应
11、的-硬件条件和设备硬件条件和设备pp具有合格的检验具有合格的检验-人员人员pp标准标准/ /公认的公认的-检验方法检验方法pp实验室实验室-质量控制质量控制39环境p工作区与办公区分开p工作面积应满足检验工作的需要p温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作要求p整体布局应采用单方向工作流程，避免交叉污染p一般样品检验：洁净区（超净工作台或洁净实验室）p病原微生物分离鉴定： BSL-240实验室可以分为p基础实验室 一级生物安全水平（BSL-1)p基础实验室 二级生物安全水平（BSL-2)p防护实验室 三级生物安全水平（BSL-3)p最高防护实验室 四级生物安全水平（BSL-4)p根据操作不同
12、危险度等级微生物所需的实验室设计特点、建筑构造、防护设施、仪器、操作以及操作程序来决定实验室的生物安全水平。41pSalmonella - all serotypes except typhipShigella spp. pVibrionic enteritis (Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus) pFood organisms are mostly BSL-2 and are handled as any other BSL-242pBacillus anthracis pBiosafety Level 2 for activities using
13、clinical materials and diagnostic quantities of infectious cultures. pAnimal Biosafety Level 2 practices, containment equipment, and facilities are recommended for studies utilizing experimentally infected laboratory rodents. pBiosafety Level 3 practices, containment equipment, and facilities are re
14、commended for work involving production quantities or concentrations of cultures, and for activities with a high potential for aerosol production.43人员-食品微生物检验（GB要求）p具有微生物专业背景和相应资质p掌握生物安全知识和消毒知识，能够理解并正确实施检验（防止人为污染样品、保护环境、自身安全）p颜色视觉障碍 涉及到辨色的实验44p具有合格的检验人员必须经常接受专业技术培训掌握检验项目的基本原理及技术方法45考核评价的几种基本技术细菌计数p使
15、用分散性和稳定性好的枯草菌CMCC（B） 63501株制作芽孢悬液p请几名被试人员用直径9cm10cm的普通营养琼 脂平板，作表面涂沫接种计数，重复作5次p求平均数和标准差，以标准差小，和显微镜直 接计数折算值接近的为佳46生化试验重现性用铜绿色假单胞菌CMCC（B）1012株模拟样品检出考核选合适的基质如奶粉，加入指标菌指定检验方法，确定检出最小菌数以接近中位数的程度进行评定47采用标准/公认的检验方法进行检测p凡有国家标准、部颁标准或行业检查方法的均按标准方法检验p没有国家或部颁标准，按上级疾病预防控制中心的要求p共同协定的方法检验 48加强实验室质量控制内部质量控制仪器设备的质控： 培养
16、基、试剂的质量控制： 消毒灭菌效果的控制： 建立良好的实验记录制度： 建立良好的核查、校对制度 报告与核查制度 实验室间质量控制49根据卫生检验的特点采取特殊措施p做好应对突发事件的准备p如果一个样品需做多种分析，检测微生 物优先p样品处理 均质化、乳化后再行稀释 抑菌物质去除 目的菌浓缩p微生物的复苏50抑菌物质 去除方法p中和法p滤膜过滤法p稀释法 p吸附51避免微生物实验室感染 p气溶胶p避免微生物污染操作环境p作好培养废弃物、用具和样品等的处理p作好个人防护 52第二节卫生微生物研究和检测的方法5354无菌染色观察生化血清分离培养基本技术复习p样品处理p损伤菌的复苏p增菌与分离p定量计数方法p分型与鉴定方法 卫生微生物样品特点目的菌数量低细菌受损杂菌多p数
