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1、主讲教师：张秋玉 实验二 凝集反应基础医学院免疫学院Zhang Qiuyu凝集反应（agglutination) 沉淀反应(precipitation) 补体结合实验 中和实验免疫酶标技术(eg. ELISA) 免疫荧光技术 放射免疫技术 发光免疫技术经典反应现代反应抗原抗体反应类型抗原或抗体的检测方法Zhang Qiuyu反应类应类 型抗原类类型及例子 凝集反应应颗颗粒性Ag， 如细细菌、RBC、表面结结合可 溶性Ag的乳胶颗颗粒等沉淀反应应可溶性Ag， 如血清中免疫球蛋白、补补体、 FP、HbsAg等补补体结结合 实验实验有补补体参与，SRBC和其溶血素组组成指示 系统统中和实验实验特殊作
2、用的Ag，如病毒、毒素、激素、酶n1.1 经典的血清学反应Zhang QiuyuZhang Qiuyu1.2 现代的抗原抗体反应： 现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见 反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定 量甚至定位；缺点是需特殊精密检测仪。 名称标记标记 物检测仪检测仪 器缺点免疫酶标标技 术术酶酶标仪标仪 免疫荧荧光技 术术荧荧光荧荧光显显微镜镜或流 式细细胞仪仪放射免疫技术术 同位素 液闪仪闪仪放射性污污染 ，有半衰期发发光免疫技 术术发发光 剂剂发发光现现微测测定 仪仪Zhang Qiuyu凝集反应的定义及基本类型1直接凝集试验颗粒性Ag与相应Ab的反应玻片法：如血型
3、的鉴定、细菌菌种的鉴定试管法：肥达氏反应2间接凝集试验（可溶性Ag+载体=致敏颗粒）与相应Ab的反应3间接凝集抑制试验可溶性Ag与相应Ab作用后，再与致敏颗粒反应4. 反相间接凝集试验（可溶性Ab+载体=致敏颗粒)与相应Ag的反应Zhang QiuyuZhang Qiuyu试管凝集反应示意图肥达氏反应-用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及 甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做 凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调 查的免疫凝集实验。 Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu人的红细胞表面有20几种血型抗原系统
4、 ABO血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统，由 Landsteiner于1901年提出：血型ABABO红细 胞上的凝集原（抗原 ）ABA和B无抗原血型鉴定的原理根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型：ABO血型系统中有两种抗原，分别称为A抗原和B抗原 ，均存在于红细胞膜的外表面。Zhang Qiuyu1. 抗原本质：血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂 ，ABO抗原特异性是在H抗原基础上形成的Zhang Qiuyu2. 抗体本质： 血浆中存在两种相应的抗体即抗A抗体和抗B抗体血型ABABO红细 胞上的凝集原（抗原 ）ABA和B无抗原血清中的凝集素（抗体）抗B抗A无抗体抗A和抗B
5、ABO血型系统的 抗体为天然抗体， 主要为IgM，不能通 过胎盘。Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu1. 如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，为配血 相合， 可以进行输血； 2. 如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血； 3. 如果主侧不引起凝集反应，而次侧有凝集反应，只 能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多（ 300ml），并密切观察，如发生输血反应，应立即 停止输注。 Zhang QiuyuZhang Qiuyu载玻片 1块/每人 *用完各自用水冲洗净置消毒缸 三棱针 1根/每人 用后弃垃圾斗 棉签 根/每人（先取再取1) 用后弃垃圾斗 牙签 1根/
6、每人（两端使用） 用后弃垃圾斗 碘伏 生理盐水试管 试管架 标记笔实验材料Zhang Qiuyu操作步骤 i 取血：搓揉左手无名指的指腹碘伏消 毒用三棱针刺1-2滴血将无名指的指 腹封住盛有盐水的试管管口，用倾倒法将血滴 洗入盐水中并混匀形成1%的血球悬液。 ii 鉴定：取洁净玻片一块，用标记笔在中央 划线分区，标明“A”、“B”区在“A”、“B”区分 别滴加抗A、抗B血清各1滴用毛细吸管吸 取待检的血球悬液滴入抗A、抗B血清中，用牙 签两端分别拌匀将玻片平持手中，前后左 右转动使之充分混匀，室温放置10-15分钟后 观察结果。 Zhang QiuyuZhang Qiuyu注意事项 取血时，注
7、意无菌操作，避免HBsAg的 交叉污染（*HBsAg携带者）； 刺血时，尽可能一次性成功，用力适当 ，让血自然流出或搓揉后流出为佳，勿 强行挤压。 鉴定时，滴1滴抗血清及血球悬液即可， 多则两边易混；牙签两头不可混用； O型血无凝集现象，无须反复检测。 Zhang Qiuyu血型抗B血清抗A血清 O_A_+B +_AB+结果判断 Zhang QiuyuABO血型的遗传规律 ？父母血型分别为A型、B型，他们子 女的血型可能是何种？ ？父母分别为A型和O型，子女有无可 能是B型 思考Zhang Qiuyu三、E-花结形成实验 原理人的外周血T淋巴细胞上特有能与绵羊 红细胞结合的受体，称E受体；在一定实验 条件下，绵羊红细胞与该受体结合形成以T 细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰 花团，故称E花结实验。E受体与CD2分子、LFA-2（淋巴细胞 功能相关抗原）为同一物质。 Zhang Qiuyu花结分类： Ea-RFC(效应T细胞)：正常值为15-35%。 E-RFC(总和)：正常值为60-80%。意义： 用于检测患者外周血中T细胞的比例及数目，间接反 映患者细胞免疫功能。 E-受体为T细胞所特有，是鉴定T细胞的重要标志之一 ，还用于T细胞的分离。Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu
