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1、辐射诱发的染色体畸变 黄 波目的o掌握辐射对染色体损伤的原理o掌握染色体样品的制作程序o熟悉染色体样品的分析1.染色体是DNA和蛋白质的复 合体，对电离辐射十分敏 感；2.基因组DNA是辐射作用最基 本的靶分子；3. 染色体畸变是反应辐射损 伤的良好指标，它既能察 觉辐射损伤和评价损伤程 度，又能估算受照剂量。 Chromosome原 理人类染色体：染色体（chromosome）：有丝分裂中期 核内易被碱性染料着色的丝状或棒状小体; 染色体功能：因为有能自我复制的基因， 因而有存储、传递遗传信息，调控细胞分化 、发育的功能。染色体是DNA和蛋白质的复合体，对电离 辐射十分敏感； 男：46，XY
2、女：46，XX人类正常男性染色体组型诱发畸变 （induced aberration）人为产生 物理 化学 生物染色单体型 多倍体 、非整倍 体 、核内复制 单体断裂 、单体互 换 结构畸变数量畸变染色体型染色体畸变自发畸变 （spontaneous aberration）随机发生 f:0.5%, dic: 0.05% 辐射诱导的染色体畸变电离辐射（X、r、中子） 细胞内产生次级电离离子 能量沉积 细胞原子非特异性电离 自由基或间接引起继发反应 分子改变 靶细胞DNA损伤 修复/未修复、误修复 点突变（point mutation） CA步骤o1 用经肝素湿润的 2 毫升注射器，自静脉或耳垂、
3、手指取血 0.5- 1.0 毫升。 o2 每 5 毫升培养基中加全血 0.3-0.4 毫升，塞紧瓶塞后置 37 箱中培养 72 小时。 o3 秋水仙素处理：培养至 68 小时左右，在火焰保护下加适量秋水 仙素 ( 用 1 毫升注射器， 5 号针头 ) ，每毫升培养基中加一滴 4 微 克毫升的秋水仙素溶液，使终浓度为 0.05 微克 / 毫升培养基，以 使细胞抑止在分裂中期。摇匀后，继续培养 4 小时即可进行染色体制 片。适量的秋水仙素，适宜的处理时间，是获得良好分裂相的先决条 件。这将影响分裂相的多少和染色体的长短。 o4 低渗处理：用吸管温和吹打细胞悬液，移入 10 毫升离心管中， 1000
4、rpm 离心 10 分钟 ( 或 3500rpm 离心 1 分钟 ) ，弃上清液 。加入少量预热 ( 37 ) 的 0.075MKCl ，吹打成细胞悬液后，加 入预热的低渗液 6 8 毫升， 37 低渗处理 25 分钟。 o在整个操作过程中，要注意不要将细胞吸到吸管上部，也不要接触离 心管的上部，否则将会丢失许多细胞。 o5 固定： o预固定：低渗处理后，向低渗液中加入新鲜配制的 1 2 毫升固定 液 (3 ： 1 甲醉：冰醋酸 ) 进行预固定，以防上低渗处理后的细 胞在离心时结团。固定液要沿管壁缓缓加入，然后用吹气的方法混匀 。 o第一次固定：预固定 1-2 分钟后，离心去上清液 ( 离心速
5、度同上 ) 。然后向离心管加入 0.5 毫升左右的固液，将细胞轻轻吹打成细胞 悬液后，加固定液 3-5 毫升。混匀后固定 15-30 分钟。 o第二次固定：离心后去上清液，加固定液 3-5 毫升，混匀后固定 15 30 分钟。 o第三次固定：操作同前。第三次固定后，经离心后去掉大部上清液， 只留 0.1-0.2 毫升固定液，混匀后即可滴片制作染色体。第二次固 定后也可静置至第二天，吸去部分上清液后，即可进行制片。 o固定液要新鲜配制，否则将会形成酯类，从而影响固定的效果。 o6 滴片：使用以高纯水制备的冰水片进行滴片。用吸管吸取 细胞悬液，距玻片 5 厘米左右的距离滴片。每张载片滴 1-3 滴
6、 ( 根据细胞悬液的浓度 ) 。滴片后斜放，室温中空气干燥 。 o亦可滴片后立刻用嘴轻轻吹片，可帮助细胞和染色体分散。 o滴片是制备染色体的最后一步，也是非常关键的一步，首先载 片要非常于净，否则将含影响染色体的分散和分带的效果。其 次，滴片的距离、滴加量的多少，制片的方式都会影响到染色 体分散的效果。 o7 Giemsa 染色：取 1-2 张片 ( 多数制片留下来做分带 ) 用约 3 毫升 Giemsa 染液进行扣 o染。染液为 1 10 的 Giemsa 染液。染色 30 分钟后，自来 水冲洗，凉干。DicFChromosome AberrationBDic EFChromosome AberrationmFChromosome Aberration思考题o染色体畸变的类型有哪些
