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1、Bt抗虫基因载体构建流程Bt基因简介Bt基因的合成Ti质粒简介Ti质粒改造(酶切、连接和检验)出不I11,t嘉瞎一、Bt抗虫基因载体构建流程一NLyNCB|宇询获取B基因序列以B基因为模板设计引物。Bt抗虫基因的合成PCR、切胶回收DH5a、PMD-18克隆LB、Amp筛选壁因酷切一一一一连接一一检验T颗粒永7=.emmmt“Bt綦即是苏云金芽胞杆菌基因。苏云金芽胞杆菌在外界条件苛刻或营荞体老孰时,将进入产胞循环,包裴在芽胞与晶体外侧的细菌壁在后期破裂,释放出自由的芽胞和伴胞晶体;伴胞晶体对鳞辖目和鞘翅目昆虫(比如小菜蛾有很强的杀伤作用。R三、Bt基因的合成“通过Nc田数据库获得田基因序列,并
2、以此为模板设计引物。*引物的设计通过软件primer5来完成。t7丁瞎引物设计的一般原则.峻刊法卵应在基因的保守区段。避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构。*引物的3“端避克使用碱基A,引物的3“端避克出现3个或3个以上连续相同的碱基。t2“引物需要足够长,保证序列独特性,些降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是较长的序列可能会与错误配对序列杂交,降低了特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低了产量。Tm值在55-65“C(因为60“C核酸外切酶活性最高)tT质粒的基因结构转移到植物基因组中的DNA序列。与肿瘤形相关。激活T-DNA的转移,使植物致瘙,是毒性区。调控Ti质粒在根癌农杆菌之间的转移,是接合转移编码区。调控Ti质粒的自我复制,为复制起始区。五、Ti质粒改造木个5酮pw一。野生型的Ti质粒作载体时,影响植株再生的直接原因是T-DNA中Onc基因的致瘤作用。因此,为了使野生型的Ti质粒成为基因转化的载体,必须切除T-DNA上的Onc基因一1人-嘴
