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1、第十章抗生素类药物的分析1抗生素 是指由微生物所产生、极微量即具有选择性地抑制或杀灭其他微生物的一类有机化合物。一、抗生素药物的特点抗生素 在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。第一节 概述1. 生物合成（发酵）2. 化学合成或半合成细菌 放线菌 真菌2控制抗生素质量的复杂性*活性基团多不稳定*发酵条件不易控制生产工艺复杂稳定性差发酵液中含有的杂质各种异构体、降解产物、无机盐、脂肪、蛋白质、热原、毒性物质 *发酵过程易受污染*降解后 疗效 失效毒副作用3二、抗生素药物的质量分析方法（一）鉴别1. 理化法2. 生物学法（1）化学法（2）仪器法对照品法4（二）检查常增
2、加“安全性检查”【检查】异常毒性热原细菌内毒素降压物质无菌5例 盐酸四环素 ChP（2010）【检查】酸度 溶液的澄清度有关物质 干燥失重异常毒性 光吸收杂质吸收度 热原降压物质 无菌6（三）含量测定1. 生物学方法以生物学方法或生化方法测定生理活性物质，并按效价单位（IU）计算的测定方法抗生素微生物检定法7抗生素微生物检定法以抗生素抑制微生物生长或杀死微生物的能力作为衡量效价的标准管碟琼脂扩散法比浊法ChPUSP8管碟琼脂扩散法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。9管碟琼脂扩散法10
3、培养16小时后11微生物检定法优点*与临床效果一致*灵敏度高*干扰物质少*可用于未知药物缺点*操作繁琐*耗时*准确度、精密度差12ChP（2010 ）附录 A 抗生素微生物检定法培养基及其制备方法检定试验设计检定法两性霉素B、克拉霉素、杆菌肽、罗红霉素、硫酸链霉素、硫酸庆大霉素、磺苄西林钠、红霉素、盐酸去甲万古霉素等原料及其制剂13以理化方法测定主药含量，按有效物质的质量计算的测定方法优点*准确度高*简便快速缺点*不一定代表生物效价*易受杂质干扰*仅用于己知药物2. 理化方法14ChP（2010）【含量测定】 青霉素类 滴定法UVHPLC法微生物检定法头孢菌素类 HPLC法汞量法 碘量法15细
4、菌 枯草菌真菌 青霉素类、头孢类、 灰黄霉素放线菌 链霉素广谱 青霉素、头孢类G+ 红霉素（金葡菌） G- 卡那霉素、庆大霉素绿脓杆菌 阿莫西林三、抗生素的分类 4. 按化学结构和性质分类3. 按作用机制分类2. 按抗菌谱分类1. 按产生菌分类抑制转肽酶交联方式 青霉素抑制蛋白质合成过程 红霉素影响细胞膜通透性 多粘菌素内酰胺类 多烯大环类氨基糖苷类 多肽类四环素类 苯烃胺类大环内酯类 蒽环类等 16第二节 内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素钠（钾）氨苄西林（钠）阿莫西林（钠）普鲁卡因青霉素头孢菌素类头孢氨苄头孢羟氨苄头孢拉啶头孢噻吩钠17青霉素类头孢菌素类氢化 噻唑环氢化 噻嗪环一、结构与性质（
5、一）结构18青霉素类酰胺 侧链6-6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸 （6APA）酸性不稳定不稳定*手性C19青霉素G（苄青霉素）（K） （Na ）Benzylpenicillin potassium青霉素钾Benzylpenicillin sodium青霉素钠Benzylpenicillin procaine普鲁卡因青霉素 （普鲁卡因 ）20氨苄西林（氨苄青霉素）ampicillin21阿莫西林（羟氨苄青霉素）amoxicillin22普鲁卡因青霉素procaine benzylpenicillin23磺苄西林钠sulbenicillin sodium247-7-氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸 （7
6、ACA）头孢菌素类酰胺 侧链酸性*手性C不稳定不稳定25头孢氨苄cefalexin26头孢羟氨苄cefadroxil27头孢拉定cefradine28头孢噻吩钠cefalotin29（二）性质 *与碱金属成盐 易溶于水pKa=2.52.81. 羧基酸性*与有机碱成盐 难溶于水30K+难溶于水易溶于有机溶剂易溶于水难溶于有机溶剂青霉素青霉素钾青霉素钠溶解性312. 手性C（5%头孢唑啉钠溶液 1824）旋光性*323. 共轭体系 UV33青霉素钠UV7-2034354. 内酰胺环水溶液 不稳定、易开环干燥纯净 较稳定 易降解失效四元环张力大 酰胺键易水解 不稳定性因素36温度氧化剂（头孢噻吩钠水
7、溶液2524h失活8%）（青霉素钠水溶液3024h失活56%）Cu2+、Pb2+、Hg2+、Ag+37青霉素的降解反应青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉酸H2O pH2青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青 霉 素青霉胺 青霉醛HgCl2100H+H2O38温度对青霉素钠稳定性的影响pH2，30温度 5 26 37% 6 77 9739二、鉴别反应（一）呈色反应1. 羟肟酸铁反应OH-红、棕、褐色Fe3+/3H+40Fe3+/3H+OH-红、棕、褐 412. 类似肽键的反应42*双缩脲反应紫色43例 阿莫西林（2）氨苄西林钠 ChP（2010）【鉴别】（1）取本品约10mg，加水6ml溶
8、解后，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，即显紫色。ChP（2010） HPLC，IR，Na+44*茚三酮反应蓝紫色45例 阿莫西林 ChP（2010）【鉴别】（4）TLC法 对照品法显色剂 0.3%茚三酮的乙醇溶液（90加热15分钟）463. 其他呈色反应酚羟基偶合橙黄*与重氮苯磺酸盐反应头孢哌酮47偶合48例 头孢哌酮 ChP（2010）【鉴别】 取本品约10mg，加水20ml使溶解，取4ml，加1%碳酸钠溶液与重氮苯磺酸试液各1ml，摇匀，溶液显橙黄色。ChP（2010） 羟肟酸铁，HPLC491. K+、Na+的火焰反应 K+Na+附录火焰 紫色火焰 鲜黄色+ 0.1%四苯硼钠 + HAc白
9、+ 醋酸氧铀锌黄（三）各种盐的反应50例 青霉素钠 ChP（2010）【鉴别】（4）本品显钠盐的火焰反应（附录 ）。 例 青霉素钾 ChP（2010）【鉴别】（3）本品显钾盐的火焰反应（附录 ）。 512. 重氮化-偶合反应芳香第一胺类反应芳伯氨基红色重氮化 碱性 -萘酚偶合52普鲁卡因青霉素普鲁卡因53HClOH橙黄猩红重氮盐偶氮化合物54例 普鲁卡因青霉素 ChP（2010）【鉴别】（3）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）55（三）光谱法1. IR药品红外光谱集对照图谱对照法USP 对照品对照法56例 青霉素钠 ChP（2010）【鉴别】（3）本品的红外光吸收图谱应与对照图谱（光谱集22
10、2图）一致。57青霉素钠58阿莫西林592. UV样品或 分解产物60青霉素V钾 268、274 1.201.25头孢唑林钠 272 264292苯唑西林钠 339 A=0.6头孢氨苄 262 220245头孢噻肟钠 262 40044061Cu2+pH3.8Cu2+6263三、特殊杂质的检查*高分子聚合物*吸收度杂质*有关物质*异构体64头孢他啶 头孢他啶聚合物头孢曲松钠 头孢曲松聚合物头孢哌酮钠 头孢哌酮聚合物（葡聚糖凝胶柱色谱法）6566例 头孢氨苄中有关物质的检查其他杂质（高低浓度对比法）7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(对照品法)-苯甘氨酸（对照品法）1%1%1%67例 青霉素钠的吸收度检
11、查A264nm 0.80 0.88（1.80mg/ml）A280nm 0.106895：139. 属于-内酰胺类的抗生素药 物有A. 青霉素 B. 红霉素 C. 头孢菌素D. 庆大霉素 E. 四环素6999：89. 下列哪个药物会发生羟肟酸铁反应A. 青霉素B. 庆大霉素 C. 红霉素D. 链霉素 E. 维生素C 70例1. 能发生重氮化一偶合反应的抗 生素类药物是A. 青毒素 B. 庆大霉素 C. 苄星青霉素 D. 盐酸四环素E. 普鲁卡因青霉素71例2. 可与茚三酮产生颜色反应的药物为A. 维生素EB. 醋酸液尼松C. 磺胺嘧啶D. 司可巴比妥E. 氨苄西林 72第三节 氨基糖苷类抗生素一
12、、结构与性质（一）结构碱性环己多元醇73链霉素碱性环己多元醇氨基糖 链霉双糖胺streptomycin链霉胍链霉糖N-甲基葡萄糖胺74（二）性质（-NH2）1. 碱性 可与酸成盐溶解性 水溶性（多羟基、氨基）75链霉素762. 旋光性 手性C3. 稳定性链霉素pH57.5稳定OH-N-甲基葡 萄糖胺坂口 反应OH-麦芽酚 反应链霉糖77坂口反应麦芽酚反应 链霉素 78链霉素巴龙霉素、庆大霉素、奈替米星 无UV特征链霉素 max 230nm4. UV79（一）茚三酮反应 -氨基醇蓝紫色二、鉴别试验80茚三酮反应链霉素 - -氨基醇氨基醇81（二） N-甲基葡萄糖胺反应乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物对
13、二甲氨基苯甲醛 H+樱桃红色（Elson-Morgan反应）水解82(缩合)83对二甲氨基苯甲醛 H+樱桃红色84（三）麦芽酚反应链霉素特征反应H+紫红色（Maltol反应）85麦芽酚反应紫红色麦芽酚 86例 硫酸链霉素 ChP（2000）【鉴别】（2）取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液0.5ml，即显紫红色。87（四）坂口反应链霉素特征反应水解（Sakaguchi反应）橙红色次溴酸钠 8-羟基喹啉 （或- 萘酚）88坂口反应8 - 羟基喹啉- 萘酚898 - 羟基喹啉+橙红色90例 硫酸链霉素 ChP（2000）【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至约15，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色。91（五） 反应例 硫酸链霉素 ChP（2000）【鉴别】（3）本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录）。92HNO3例 附录 一般鉴别试验 ChP（2000）硫酸盐（1）取供试品溶液，加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。A.93NH4AcNaOHB.94例 附录 一般鉴别试验
