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1、 血清总胆固醇的测定 （胆固醇氧化酶法）主讲人：刘杰同组人（刘杰、杨宇光、陈琪、刘婷婷）我们为什么要做这个实验呢？化验介绍：血清胆固醇是血脂的成分之一 ，正常人体含胆固醇2g/kg体重。血清胆固 醇和甘油三脂升高与动脉硬化有一定的关 系，所以在防治冠心病时了解血酯的变化 水平，有一定的实际意义。临床意义（1）总胆固醇增高：常见于动脉粥样硬化，原发 性高血脂症（如家族性高胆固醇血症，混合型高 脂蛋白血症），糖尿病，肾病综合征，总胆管阻 塞，老年性白内障和牛皮藓 （2）总胆固醇降低：常见于低脂蛋白血症，贫血 ，败血症，甲状腺功能亢进，肝疾病，严重感染 ，癌症晚期等。动脉动脉 粥样粥样 硬化硬化原发
2、性高血脂症原发性高血脂症贫贫 血血败血症败血症甲状腺功能亢进甲状腺功能亢进实验目的掌握血清总胆固醇测定的方法（酶 法）与临床意义血清中总胆固醇游离胆固醇游离脂肪酸低密度脂蛋白高密度脂蛋白,极低密度脂蛋白乳糜微粒测定方法化学法:抽提,皂化,毛地黄皂苷沉淀纯化,显色与比色酶法:临床上常用胆固醇氧化酶法抽提法 直接测定法 前言 血清中总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯 两部分，其中低密度脂蛋白中含量最多，其次是 高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白，乳糜微粒中含 量最少。血清总胆固醇测定方法分化学法和酶法 。化学法一般包括抽提，皂化，毛地黄皂苷沉淀 纯化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的 是胆固醇氧化酶法
3、化学法的种类很多，由于显色反应的特异性不同，其结果有一定 的差异。 化学测定法 （公认）Abell-Kendall(L-B反应)法 三氯化铁-硫酸反应法（Zak法 ） 显色稳定 操作简便 灵敏度约5倍于L-B反应 法 胆固醇酯与游离胆固醇显 色程度比较接近 特异性差，干扰因素比L-B法多 。Zak法更适合于科研使用 。 胆固醇酯+H2O 胆固醇+脂肪酸胆固醇+1/2O2+H2O -胆甾烯-3-酮+H2O22H2O2+4-氨基安替比林+酚 醌亚胺+4H2O胆固醇酯酶胆固醇氧化酶过氧化物酶4实验原理 血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇 和游离脂肪酸，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下生成
4、和过氧化氢,过氧化氢在4-氨基安替比邻和酚存在时,经过 氧化物酶催化,反应生成红色醌类化合物,其颜色深浅与标 本中TC含量成正比。上述三种酶的催化作用成连锁反应， 实验中把三种酶按比例混合在一起，便于使用。本方法特 异性好，灵敏度高，既可以运用需手工操作，也可进行自 动化分析。实验试剂（1）基础液：100ml0.1mol/l磷酸缓冲液（pH=6.7）(含 胆酸钠129mg),4-氨基安替比林16mg，苯酚132mg，TritonX-100 0.2ml （2）酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固醇 酯酶，胆固醇氧化酶和过氧化物酶）合剂1ml,加基 础液30ml，混匀即得。 （3）胆固醇标准液（5
5、.17mmol/l）:精确称取胆固 醇200mg，用纯无水乙醇溶解，用乙醇定容至 100ml，分装，4摄氏度保存，临用时取出。实验操作取三支试管，按表7-7操作：表7-7血清总胆固醇的测定项目测定管标准管空白管 血清/L50 胆固醇标准 液/L50蒸馏水/L50 酶试剂/L1.501.501.50混匀后置于37摄氏度水浴中保温15分钟，用空白 管调零，在500nm波长处测吸光度。 计算公式： 血清总胆固醇=A测定/A标准 x5.17（ mmol/l） 参考值 3.0-5.20mmol/l。危险阈值：5.20-6.20mmol/l 。 高胆固醇血症：=6.20mmol/l注意事项（1）若需检测游离胆固醇的浓度，去掉酶试剂成 分中的胆固醇酯酶即可（2）血红蛋白高于2g/l时引起正干扰；胆红素高于 0.1g/l时有明显负干扰；血中维生素c与甲基多巴 浓度高于治疗水平时，会使结果偏低。思考题（1）血红蛋白，胆红素，维生素c对本实验结果 有干扰，原因是什么？ （2）试查文献说明胆固醇的定量测定还有哪些方 法？每种方法的原理是什么？ （3）基础液配置中胆酸钠的作用是什么?
