常见肿瘤免疫标记

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1、常见肿瘤免疫标记的意义江苏省肿瘤医院 病理科 张静渊免疫组化的基本原理v抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的 原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧 光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组 织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位 、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技 术(immunohistochemistry) 。 常用方法vEPOS（一步法）vSP法-链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶连接法v二步EnVision（优点：敏感性大幅增强，不受内源性生物素 干扰）vSABC法 （三步法）结果判定v每项指标都有其抗体结合的对应位点，如果定位不准确，则 不能判为阳性。v结果中的“”有相当

2、一部分为背景与肿瘤表达均呈阳性，无法 区分，其原因大致有：孵育过长；抗原抗体交叉反应；冲洗 不足；血清封闭不足或错误；二抗与组织非特异性结合。v标本没有按规范程序固定。（固定液、固定时间）肠癌中P53的表达肠癌中的MDR表达肺癌中的Ki-67表达胃癌中的EGFR表达胃癌中的AFP表达消化道癌的标记v我科常用胃癌标记：VEGF,EGFR,P-gp,GST -,Topo-, Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2, C- erbB-3, C-erbB-4,TS,TP.v我科常用大肠癌标记： VEGF,EGFR,P- gp,GST-, Ki-67, P53,MSH2,P21,TS,TP.耐药相

3、关基因的标记P-糖蛋白 （P-gp） 谷胱甘肽转移酶 （GST-） DNA拓 扑异构酶（Topo-）肿瘤产生耐药的生物学基础取决 于肿瘤多药耐药基因的扩增，瘤组织生成GST- 、 TOPO-和P-gp的含量升高，则耐药性增强。影响化疗疗效的主要因素是细胞内耐药、抗肿瘤药的药 代动力学/药效学、肿瘤血供、药物扩散Pgp-MDR及肿瘤 细胞增殖能力等。其中MDR的关注点是mdri/Pgp、MDR 、LRP、拓扑异构酶-、谷胱甘肽代谢和凋亡，或肿瘤 细胞增殖活性介导细胞内多向耐药基因的扩增。 特别提醒v对应耐药关系： TOPO-阳性对应多柔比星、米托蒽醌、 鬼臼类； P-gp阳性对应长春新碱、VP-

4、6、蒽环类； GST- 阳性对应多种烷化剂耐药。v据某些学者统计，近一半的大肠癌对GST- 、TOPO-所 介导的抗癌药物顺铂和拓扑异构酶抑制剂产生耐药倾向，并 大多呈强耐药性，提示大肠癌联合化疗用药时，对顺铂和拓 扑异构酶抑制剂的选择应慎重考虑。P-gp阳性表达者对P-gp相关的主要抗癌药长春新碱、阿霉素等有耐药倾向。 表皮生长因子受体相关标记v表皮生长因子受体（EGFR）、人类表皮生长因子受体-2（ C-erbB-2）、血管内皮生长因子（VEGF）。v C-erbB-2为HER-2癌基因的表达产物，HER-2为原癌基因 ，广泛存在于各种组织中。通常处于非激活状态，被刺激激 活后具有肿瘤转化

5、活性，其表达越高，瘤株对化疗越不敏感 ，越易复发转移。vVEGF与消化道癌形成密切相关，并参与其侵袭和转移，可 作为预后判断指标。v三者在消化道癌中的表达具有一致性，它们的联合检测可作 为判断胃癌预后、筛选高危转移患者的有效指标 。酪氨酸激酶I型受体家族vI型表皮生长因子受体是广泛分布于人体各组织细胞膜上的 多功能糖蛋白，分享由细胞外结构域、跨膜结构域及胞浆结 构域构成的分子信号传导通道。v其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、 HER4四种同源受体。其受体及配体在多种实体瘤如NSCLC 、BC、CC、NPC、GC等中过表达，正常组织中低表达。v据报道，C-

6、erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌与胃肠 道肿瘤中有明显表达。p53v正常p53的生物功能好似“基因组卫士（guardian of the genome）”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整 性。如果修复失败，P53蛋白则引发细胞凋亡。 v如果p53基因突变，对细胞的增殖将失去控制(显性负调控) 。vp53基因突变与人类50%的肿瘤有关 。p21vp21可以和p53共同构成细胞周期G1检查站，减少受损DNA的复制 ，发挥抑癌作用. vP21作为一种负性调节因子,在依赖野生型p53的表达通路上 与肿瘤的表达、表达含量、表达位置,以及预后都密切相关.v当P21、Cyclin、CD

7、K、PCNA四聚体的功能受到抑制,则使增 殖信号大量活化,导致细胞异化和恶变. PCNA: Proliferating cell nuclear antigenp53是G1期能否进入S期的分子警察复制DNA损伤p53p21P21-cyclin-CDK复合物Rb-E2FRb-P+ E2F阻滞G1期修复无法修复凋亡诱导（P21 CIP1）（Cyclin-CDK活性抑制）启动增殖联合表达意义vP53、c-erbB-2、P21的表达与消化道癌的分化程度,浸润程 度,转移程度及临床分期呈正相关. v多基因联合表达检测对消化道癌预后判断明显优于单基因表 达检测. v据国外文献报道，分化差的大肠癌中，P53

8、、P21蛋白的过 表达常伴随着K ras、p53基因的高突变，所以该对应关系 很可能参与了大肠癌的形成及演进。Ki-67v增殖细胞核抗原(Ki-67)对于研究肿瘤细胞的生物化学特性 、恶性程度及预后判断等具有一定的价值。Ki-67是真核细 胞G1和S期合成的一种36kD的核蛋白，是DNA聚合酶辅助蛋白 ，直接参与细胞增殖过程中DNA的复制。在静止期的细胞内 含量很少，从G1晚期开始增加，S期达到高峰，G2期和M期呈 明显下降，其表达程度能客观反映瘤细胞增殖活性。 AFPvAFP（甲胎蛋白）是在体液中发现的70kD的癌胚抗原，正常 表达于胎肝，常态下成人组织中呈阴性。在部分生殖细胞肿 瘤（尤其卵

9、黄囊瘤）和多数肝细胞肝癌中高表达。v依据其病理组织形态学特点和癌细胞内AFP染色阳性表达， 并对比3个月胚胎胃肠组织学的改变，将组织学类型分为4个 亚型：肝样型（34.9），胎儿胃肠型（23.8）和肝样型 伴肠胚分化混合型（38.1）以及卵黄囊瘤样型（3.2） 。v结论：AFP阳性胃癌与普通型胃癌不同，是一组具有独特临床病理特征的高度恶性肿瘤。 MSH2vMSH2基因是错配修复基因的重要成员之一,其表达的蛋白参 与DNA的错配修复反应。MSH2等错配修复基因缺陷导致错 配修复蛋白的失表达及微卫星不稳定性(MSI+)进而引起基因 组的不稳定,诱发肿瘤,尤其是在遗传性非息肉性大肠癌(HNPCC)常

10、见有MSH2基因缺陷。 Muir-Torre 综合征、卵 巢癌也与该基因密切相关。v有文献称，若错配修复蛋白2在回肠与结肠中隐窝细胞有失 表达，隐窝细胞会快速更新，产生分化细胞迁移至隐窝腺腔 内，参与了肿瘤的形成。vHNPCC的遗传因素： (1) 家庭成员中有三人以上患有结直肠癌，其中两人以上为 同一代； (2) 至少相近的两代人均有发病； (3) 其中至少有一人是在50岁以前诊断为结直肠癌。 若满足上述因素中一条，一级亲属亦应进行HNPCC突变检 测。携带MLH1和MSH2突变者罹患结直肠癌的一生累计风险高达80 %。 v若免疫组化检测出肿瘤细胞核为阴性，提示该基因失活，发 生了hMLH1和

11、hMSH2的基因的胚系突变 。 TS & TPv5-FU代谢(DPD，TP，dUTPase)、DNA修复(ERCC2， XRCC1)，血管生成(COX-2，EGFR，IL-8，PLA2)以及药 物解毒(GST- )基因的mRNA水平影响着晚期消化道癌患者 的预后。vTS（胸苷酸合成酶）是DNA合成中的限速酶，在DNA合成 与修复中起重要作用，并与细胞分裂和增生关系密切。TS的 高表达预示着肿瘤的高侵袭性。TS与ERCC1（切除修复交 叉互补基因 ）分别为标志氟尿嘧啶(5-Fu)、奥沙利铂(L- OHP)耐药的指标。 vTP（胸苷磷酸化酶 ）基质TP表达对肿瘤微血管密度产生显 著影响 。TP表达

12、对预测5-FU化疗疗效、判断结肠癌预后有 一定的指导意义。肺癌的标记v我科常用肺癌标记：VEGF-C3,EGFR,P- gp,p53,Ki-67, PE,CD24,CA125,bcl-2,Tslc1.VEGF-C3v血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growthfactor,VEGF-C)是迄今发现的最重要的淋巴管生成因 子,VEGF-C诱导的淋巴管生成与肿瘤淋巴结转移密切相关。 因此,以VEGF-C为靶点抑制淋巴管生成已成为抗肿瘤转移的 重要策略之一。CA125vCA125（糖链抗原125）又称卵巢癌抗原（OCA）是由一组 糖基转移酶综合作用而产生，主要存在于癌

13、组织中。肺癌中 CA125敏感性56.43%、特异性84.72%。 vCA125的检测在对NSCLC的诊断、NSCLC与SCLC的鉴别诊断中 具有一定价值,对肺癌的疗效观察、转移、复发监测及预后 有较大的辅助诊断意义. bcl-2vBcl-2蛋白是bcl-2 原癌基因的编码产物 ，是一种定位于线粒体、内质网和连续的核周膜的 25kD膜蛋白，广泛分布。vBcl-2蛋白家族是一个特别的家族，成员中有些促进凋亡，如 Bad、Bid 、Bax，有些成员阻止细胞凋亡,如Bcl-2、 Bcl-x、 Bcl-w。Bcl-2能够阻止细胞色素c从线粒体释放到细胞质，从而抑制了细胞凋亡。 v有文献称，Bcl- 2

14、蛋白过度表达在肺癌发生中起重要作用 ,是 肺癌的早期表现 ,有可能成为肺癌早期诊断的重要参考指标。 Tslc1vTSLC1（肿瘤阻抑基因1 ）是一种新的抑癌基因,其失活与消 化系肿瘤的发生,浸润转移及预后有着重要的关系.vTSLC1的失活重要机制之一是基因甲基化.vTSLC1抑癌机制目前还不完全明确,认为与细胞黏附,细胞间 信号传导,参与肿瘤免疫,诱导细胞凋亡和抑制细胞生长周期 有关. CD24vCD24是一种低分子量高度糖基化的黏蛋白样的黏附分子 ， 通过糖基磷脂酰肌醇黏附在细胞膜上，最初被认为是一种B 细胞标志物，在B细胞分化早期阶段表达。 v最近国外一些研究发现，CD24在上皮细胞来源的肿瘤如非小 细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等肿瘤中呈 高表达，同时还发现CD24的表达和肿瘤的侵袭性有一定的关系，可能可以进一步提示预后。 PEv选择素(Selectins)是新近被发现的细胞粘附分子中的一个 家族,其中主要成分之一的 P-选择素(granular membrane protein 140,Gmp 140)在肺癌组织中表达 ，可能可用做肺癌 转移的指标。vP选择素不仅在血管的内皮细胞上有阳性表达，在部分肿瘤 细胞的细胞膜上亦可见阳性表达，提示P选择素可能在癌细 胞与血管内皮细胞间存在双重作用，P选择素阳性表达的肿 瘤细胞可能更利于浸润和转移。