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1、实验五青贮饲料氨态氮含量的测 定准备工作： 两种试剂的配制：试剂A:称取9.976克苯酚 ，50.65mg亚硝基铁氰化钠，用去离子水定 容至1000ml。试剂B:称取5.0克氢氧化钠溶于去离子水， 再加13.5ml次氯酸钠，最后定容至1000ml 。一、实验仪器及试剂 仪器: 分光光度计，水浴锅，移液枪（1ul) 及移液管(10ml,5ml),容量瓶，烧杯，试管 若干。 试剂A,B，0.2mol/l的盐酸溶液（取12ml盐酸定容至 1000ml），氯化铵 二、实验步骤 取待测液2.0ml（空白加蒸馏水）放入试管 中，每个样3个重复，加入8ml0.2mol/l的盐 酸溶液混匀。 取混合液0.4m
2、l于另一试管中，以次加入 A,B液各5.0ml。 60恒温水浴10min，反应结束后于冷水中 冷却。 在560nm处测溶液的吸光度值。三、标准曲线的绘制 称取1.00克NH4Cl用去离子水溶解后定容 至100ml，配制成浓度为10mg/ml的标准 母液。 分别取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0， 6.0，7.0ml母液于100ml容量瓶中，配成 一个系列的标准液。 。 取各标准液2.0ml于试管中，每个标准3 个重复，加入8.0ml,0.2mol/l盐酸混匀再 取0.4ml混合液于另一试管中，依次加入 A液5.0ml和B液5.0ml，60恒温水浴箱 中反应10min。 反应结束后，立即取出于冷水中冷却， 在560nm波长处测OD值。 以NH4Cl浓度为横坐标，OD为纵坐标， 绘制NH4Cl标准曲线。四、计算方法 将待测液所得的吸光度值带入标准曲线中 ，得出氯化铵的浓度，将其转化为氨态氮 的浓度，然后根据浸出液所取得样品重量 以及加入水的重量，计算出青贮料单位干 物质中含的氨态氮量。 氨态氮含量(g/kg DM)=所得的氯化铵的浓 度17/53.5/1ml待测液对应青贮料干物质的 量五、注意事项 每一步加完溶液都要摇匀，使其反应完全 。 水浴后冷却摇匀再比色。 计算结果注意单位。
