动物繁殖学实验

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1、动物繁殖学实验 山东农业大学动物科技学院动物繁殖学教研室1实习目的o动物繁殖学实验是动物繁殖学实践教学的重要组成部分；o为毕业后从事动物生产科学研究和应用、生产服务管理打下基础。 2实习要求o主要学习掌握精液品质分析、人工授精、发情鉴定、直肠检查等繁殖基本技术；o掌握动物超数排卵、胚胎采集、胚胎移植等技术的基本方法。3实习内容o1、生殖器官标本观察；o2、人工授精器械、胚胎移植器械的识别和使用；o3、理化因素对精液品质的影响；o4、精液冷冻、解冻与精液品质评价；o5、直肠检查；o6、超数排卵、胚胎采集、胚胎移植；o7、畜牧场畜群繁殖力调查与评价。 4实习过程安排o与理论课在同学期，集中实习，分

2、组进行。o根据实践操作、考勤、实习报告（实习时间、内容、操作技术、体会等）等综合评定成绩。 5实验一 公、母畜生殖器官观察 o一、目的要求o认识各种公母畜生殖器官的位置、形态、大小及解剖结构特点；o了解生殖器官的结构与生理功能的关系。o为学习家畜繁殖学及更好地掌握和应用繁殖技术奠定解剖学基础。 6二、材料和方法o（一）材料n1各种公、母畜生殖器官标本、模型及挂图（ 或投影）。n2大磁方盘、解剖刀、剪刀、镊子、金属探 针、投影仪。o（二）方法n用投影与标本观察相结合；比较各种家畜生殖 器官的异同。7三、内容o（一）雄性动物生殖器官o1、观察各种动物睾丸和附睾的形状、相对位置 和大体构造。o2、副

3、性腺：比较各种动物副性腺的大小、形状 、位置及内部构造。n精囊腺：n前列腺：n尿道球腺：o3、阴茎和龟头 8o（二）雌性动物生殖器官o雌性动物可以观察生殖器官的标本、模型及挂图，也可以采 用腹腔镜法进行活体观察。o1、生殖器官的组成及位置o2、卵巢o3、输卵管o4、子宫o5、阴道o6、外生殖器官 9四、作业o1通过观察和比较，说明各种公、母畜生殖器官的形态、大小、相互关系和大体构造以及在活体上的位置有何特点。o2绘出任一种公、母畜生殖器官的标本图。10实验二 睾丸、卵巢组织学及精子发生、卵泡发育过程的观察 o一、目的和要求o通过家畜睾丸、卵巢组织切片观察，了解家畜睾丸、卵巢的组织结构及其形态。

4、o了解精子的发生和卵子的发生、卵泡的发育过程及其形态。11二、材料和方法o（一）材料、仪器n1、睾丸、卵巢组织切片；睾丸、卵巢组织学及精 子发生、卵泡发育过程的幻灯片、多媒体投影仪 或胶片投影仪。n2显微镜、幻灯机或投影仪。o（二）方法n先结合投影或挂图进行讲解，对睾丸、卵巢组织 学结构及精子发生、卵泡发育过程有了初步的了 解。然后再用显微镜进行睾丸、卵巢组织切片的 观察。12三、内容、观察步骤o（一）公畜睾丸的组织学观察n1低倍镜观察o（1）被膜o（2）睾丸纵隔和中隔o（3）睾丸小叶： 13o2高倍镜观察：n（1）睾丸小叶的结构n（2）间质细胞n（3）曲精细管的结构n（4）足细胞n（5）生精

5、细胞（生殖细胞）14o3精子发生过程（spermatogenesis）可分为两个明显的时期。o第一时期：精细胞生成：精原细胞经一系列分裂形成精子细胞。o第二时期：精子形成（spermiogenesis）：精子细胞变形成为精子。 15（二）母畜卵巢的组织学观察o1低倍镜观察n在低倍镜下找出卵巢表面上皮和白膜，区分卵 巢的皮质部和髓质部。o（1）表面上皮o（2）白膜o（3）皮质部o（4）髓质部16o2高倍镜观察o（1）卵泡发育的观察o每个卵泡都由位于中央的卵母细胞和围绕在卵母细胞周围的 卵泡细胞所组成。有的卵泡在发育过程中可能退化而形成闭 锁卵泡。卵泡可根据发育程度不同而分成下列各期。 o1）原始

6、卵泡o2）初级卵泡o3）次级卵泡o4）三级卵泡o5）成熟卵泡o6）闭锁卵泡 17o（2）黄体o是排卵后的卵泡转变成的富于血管的内分泌器官。o牛、羊、猪的黄体位于卵巢皮质浅层突出于表面。o马的黄体则完全埋藏在卵巢深部。o根据黄体发育阶段而分成下列各期。o1）血体期o2）血管增生期o3）成熟期o4）白体期183输卵管组织学o输卵管从外向内由浆膜、肌层和粘膜三层不同细胞层构成。o（1）粘膜n上皮n固有膜o（2）肌层o（3）浆膜 19o 4子宫组织学o内膜o肌层o外膜20o四、作业：o 1绘出并注明睾丸曲精细管及其所含细胞的构造图。o 2绘出并注明卵巢组织结构及卵泡发育各阶段示意图。21实验三 兔的超

7、数排卵、胚胎移植及早期胚胎观察o一、目的和要求o通过实验了解促卵泡素（FSH），孕马血清促性腺激素（PMSG），人绒毛膜促性腺激素(hCG)的作用。o了解卵子的正常和异常形态结构，认识受精卵和未受精卵之区别。o初步掌握冲卵、检卵技术，为掌握胚胎移植技术打下基础。22二、材料和仪器设备o1动物：n选择健康的成年未孕母兔。n分组后，用作超排处理的供体。n另外，准备两只母兔，作胚胎移植受体。n实验母兔最好用产过仔的母兔，效果较好。n需公兔23只。o2药品：nFSH、PMSG、hCG、0.9NaCl、75酒精、碘酒、新洁而 灭、冲卵液、846麻醉药。o3器材：n玻璃注射器（20ml、10ml、1ml）

8、，兔用手术台、创巾、 止血纱布、药棉、缝针、缝线、消炎粉、青霉素、链霉素 、剪毛剪、止血钳、镊子、手术刀、剪、塑料细管（冲卵 管）、表面皿、移卵管、连续变倍实体显微镜。23三、供体兔超排分组及操作步骤oFSH处理组：n先用碘酒棉球消毒母兔颈部皮肤，每只颈部皮下注射FSH10 15IU或0.15mg（动物所产品）。连续注射6次，每次相隔 1014h。总量为0.9mg/只。最后一次注射FSH后12h，从耳 静脉注射hCG75IU（先用酒精棉球消毒耳朵边缘）。n随即放置于公兔笼中，观察是否配种。n超排处理后，母兔阴部表现出发情症状，能成功地配种。oPMSG处理组：n母兔颈部皮肤消毒同上。于颈部皮下一

9、次注射PMSG150IU。 之后4872h时，同上述方法注射同量hCG。即同公兔交配。o对照组：n颈部皮下注射生理盐水。其它处理同上。 24四、手术冲胚方法o于注射hCG并与公兔交配后24、36或48h，进行冲胚。o1应用乙醚、乌拉糖、846麻醉药（耳静脉注射 0.3ml/只）等麻醉后，再按外科手术要求打开腹腔。o2将母兔背朝下方固定于兔手术台上。o3在兔腹部最后两对乳头的腹中线部剪毛，用沾满肥 皂液的纱布清洗局部，再用剃须刀片刮毛，先后用碘 酒和酒精棉球由内向外进行消毒。然后盖上创巾并固 定。o4用手术刀在腹部正中线处皮肤切开23cm长的术口 ，再在腹壁肌白线上切一小口，用中指垫着以手术剪

10、来扩大剪口。o5.冲卵时，注意止血，随时用温生理盐水纱布保温术 部。25o6.打开腹腔后，沿着子宫轻轻引出输卵管及卵巢。与 卵巢下脂肪组织处，用长夹夹住以固定卵巢。仔细观 察卵巢的变化。记录排卵点（卵巢排过卵后的小红点 ）。o7.先在卵巢附近找到输卵管伞，从伞部插入冲卵管并 用手指或夹子固定，另一端接表面皿。另一人用10ml 注射器配上9号针头，吸一管冲卵液（也可用生理盐 水代替）。o8.从子宫向输卵管方向，于子宫角末端和输卵管交界 的无血管处插入针头，使针头伸入输卵管内并用手指 固定。然后慢慢的推动注射器，将冲卵液注入输卵管 ，使冲卵液由伞部收集到表面皿内。一般每次5ml即 可。注意冲卵液不

11、得流失。 26五、胚胎观察o将接有冲卵液的表面皿置于实体显微镜下，检查胚胎 的数量和发育形态。o正常兔受精卵为卵圆形，直径约140m，在透明带外 围有一厚层粘蛋白层（为兔胚胎特有结构）。卵黄颗 粒很细，分布很均匀。容易看到核的变化。在卵黄周 隙内可见两个极体。o未受精的卵母细胞中，粗细不一的卵黄颗粒清楚可见 ，且分布不均。不能看到细胞核。在卵黄周隙内只有 一个极体。o一般在交配后24h，受精卵已发育成2-细胞胚胎。48h 即发育成16-细胞胚胎（早期桑椹胚）。27六、胚胎移植o1受体的选择：n选择与供体发情时间一致（相差不超过一天）的受体（自然发 情或超排处理诱发发情）。 o2麻醉、保定及开腹

12、手术：n参照供体处理方法。o3胚胎分装：n先向移卵管内吸进少量PBS，接着吸入一点空气，然后再将胚胎 连同少量PBS吸入，接着再吸入一点空气和PBS, 在移卵管尖端 需保留一端空隙。这样就可防止胚胎丢失。o4移植部位：n将胚胎移入排卵侧的生长道内。凡从供体输卵管内得到的胚胎 应移植到受体输卵管内。从输卵管伞部插入23cm深，轻轻地 注入胚胎，然后慢慢地抽出移卵管。一般一侧输卵管可移植5 10枚胚胎。如从供体子宫内收集的胚胎也应移植到受体母兔相 应的部位。o5按外科手术要求分别缝合肌层和皮肤。并进行消毒。注 意术后护理。28七、作业o简述实验过程和结果，根据结果进行分析。29实验四 小鼠超数排卵

13、及早期胚胎的质量鉴定o一、目的和要求o通过实验及操作，使学生了解孕马血清促性腺激素（PMSG）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）对卵巢机能的生理作用，掌握超数排卵方法和早期胚胎的质量鉴定。o充分认识正常与异常胚胎的形态结构及等级划分标准，为大家畜超数排卵和胚胎移植打下良好的基础。30二、材料o1实验动物：n56周龄昆明白系雌性小鼠为超数排卵的供体，成年 同系公鼠与之1:1配比。o2药物与试剂：nPMSG、hCG、75酒精、冲胚液（mPBS）、矿物 油。o3器材：n一次性1ml注射器、镊子、剪刀、表面皿、巴氏吸管、 直径35mm培养皿、实体显微镜等。31三、超数排卵方法及胚胎采集o取56周龄昆明白系

14、雌性小鼠，间隔48h分别腹腔注射10IU PMSG和hCG，hCG注射后与性成熟公鼠合笼，次日检查阴道栓。o有栓雌鼠在注射hCG后7884h处死、摘取子宫。o在实体显微镜下，用含有mPBS液的1ml注射器将子宫置于表面皿中冲洗3遍，以回收桑椹胚及早期囊胚。o操作液和胚胎置于37恒温台上保存。32四、胚胎质量鉴定o将回收的胚胎用mPBS洗净后，移入新鲜的覆盖有矿物 油的100l mPBS液滴中，在410倍以上实体显微镜 下进行胚胎质量鉴定。o（一）胚胎的级别划分o目前对胚胎的质量鉴定基本上采用形态学的方法o将胚胎分为A级（1级）、B级（2级）、C级（3级）和 D级（4级）四个级别。o其中A级和B

15、级胚胎为可移植胚胎。33o（二）异常胚胎o异常胚胎指胚胎体积过小、过大、呈椭圆形、扁形、带有大型极体，细胞内有大空泡，透明带破裂、收缩，卵裂球色泽发暗、界限不清、个别萎缩、边缘变得粗糙，空透明带，在透明带内无一定结构的变性胚胎等。 34o（三）未受精卵o呈圆球形，外周有一圈折光性强且发亮的透明带，中央为质地均匀色泽较暗的细胞质，透明带和卵黄膜之间的空隙很小甚至看不到。35五、作业o将观察到的不同发育阶段的正常胚胎、异常胚胎或未受精卵绘图并加以说明。36实验五 人工授精器材的认识和假阴道的安装o一、目的和要求o 1熟悉人工授精所用的采精和输精器材,了解其用途及使用方法。o 2练习假阴道的安装方法

16、。37二、材料和仪器设备o1采精器材：n各种公畜采精用假阴道，牛、羊电刺激采精棒，猪手握法采精用的橡胶手套等。o2输精器材：n各种母畜输精器、阴道开张器、额灯和手电筒。o3辅助器材及药品：n高压灭菌器、酒精灯、长柄钳、镊子、玻璃棒、棒状温度计、漏斗、量杯、灭菌凡士林、70和95酒精棉球、滑石粉、来苏儿、洗衣粉等。38三、方法和步骤o先讲解人工授精器材的构造、各部名称和用途，并作假阴道安 装的示范。然后学生分组观察并作假阴道的安装练习。o（一）人工授精器材的认识：o1假阴道：n长筒状，由外壳、内胎和集精杯（管）三个主要部分组成。o外壳o内胎o集精杯（管）o2输精器：n苏式牛、羊输精器为一长颈玻璃注射器。n目前常用的为金属或塑料制成的输精管，其后连接一个橡皮球 。冷冻细管精液输精则使用特制的卡苏枪或输精器。o对一些家畜的输精需借助阴道开张器和额灯或手电筒照明进行 。开张器的种类和大小因畜种而异。39（二）假阴道的准备要点o1假阴道外壳及内胎的检查