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1、鱼类急性毒性实验王宁实验简介鱼类是水生食物链的顶级生物，也是水体中最为重要的经济动物。在污染水体中，当污染物达到一定浓度时，就会引起鱼类各种中毒反应，例如行为失常，组织器官病变，生理功能紊乱乃至死亡。在人为控制条件下，进行各种鱼类毒性实验，不仅用于化学品毒性强度测定、水体污染程度、废水及其处 理效果检查，而且也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供科学依据。因此，开展鱼类急性毒性实验的研究，对实验结果给出正确合理的评价，对于我国水资源保护具有重要意义。 实验原理 o在规定条件下，使鱼类接触含不同浓度受试物的水溶液，以96h为一实验周 期，在24h、48h、72h和96h时记录实验鱼的死
2、亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。 实验材料1.实验常用仪器设备o温度控制仪；o（溶氧仪）opH试纸o（分光光度计）o玻璃水槽o抄网：尼龙制，对照和实验容器分用。 实验溶液的制备o以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液由蒸馏水配制而成。母液最好每日配各1次，比较稳定的物质也可以两日配制1次，配好后， 最好低温保存。配制好的母液可以稀释为进行毒性实验的溶液，以等比或等对数 间距设置浓度系列，相临浓度比值不得超过2.2。 实验用鱼的选择o实验鱼类一般
3、选择对污染物敏感，在生态类群中具有 代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学背景资料丰 富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。o斑马鱼是国际上通用的鱼类急性毒性实验鱼种。建议的实验温度21-25， 建议实验鱼的全长2.0士1cm。试验方法与步骤 1.实验条件 o(1)实验用水 使用高质量的自然水或标准稀释水(见本节 附录)，也可以使用饮用水(必要时应除氯。水的总硬度为10- 250mg/L (以CaCO3计)， pH为 6.0-8.5。 o(2)实验周期 96h。 o(3)实验负荷 静态实验系统最大承载量为1.0 g鱼/L。o(4)光照每天 12-16h.o(5)
4、温度与实验鱼种相适宜，变化范围土2。 o(6)溶解氧不低于空气饱和值的60%。曝气时不能使受试 物明显受损。 2.实验方法 o正式实验前必须对实验用鱼进行驯养，然后根据预实验得出 的结果(以上部分内容可另行安排实验时间)，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和96h鱼类全部存活的最高浓度之间至少应设置5个浓度组。每个实验浓度组应至少设3个平行系列，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂验量对照，其浓度与试液中的最高溶剂浓度相同。每一浓度组及对照组至少使用7尾鱼。 o实验前鱼应驯养。用水需曝气。o实验分组：4组o浓度系列：每组分别取0，35，70，140，280ml母液加入鱼缸水中，充分混匀
5、，则得到实验浓度0，0.25，0.5，1，2g/L重铬酸钾（母液3L ，50g/L重铬酸钾，每组600mL）o高浓度用小鱼缸，7L水，8条鱼（大小均匀）。空白用大鱼缸，14L水，16条鱼o实验控制温度15C。缓慢曝气。2.实验方法 o实验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随机取出鱼并随机迅速放入各实验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一实验，所有实验用鱼应在30min 内分组完毕。实验期间，不要对溶液强烈充气，溶解氧含量应高于空气饱和值的 60%。同时避免产生对鱼类行为的干扰。实验期间不投饵。o在实验开始后3h或6h观察各处理组鱼的状况，并记录实验鱼的异常行为如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能
6、力和呼吸功能减弱，色素沉积等。o至少在24h、48h、72h和96h后检查受试鱼的状况，并做记录。如果受试鱼没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。o每天至少测定一次pH、溶解氧和温度。实验 开始和结束时亦要测定。至少在实验开始和结束 时，测定实验容器中实验液的受试物浓度。o pH：试纸o（溶解氧：溶氧仪）o温度：温度计o（六价铬：二苯碳酰二肼分光光度法）3.数据处理o(1)在对数-概率坐标纸上，绘制处理浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、96h的LC50值，并用标准方法计算95
7、%的 置信限。 o(2)如果实验数据不适于用标淮方法计算LC50，可用不引起死亡的最高浓度和引起100%死亡的最低死亡浓度估算LC50的近似值，即这两个浓度的几何平均值。结果与评价o目前，根据鱼类急性毒性实验的LCso值，评判毒物的危害等级，在国内还没有统一的规范化标准。1990年国家环保局的环境监测技术规范中给出了污 染物对鱼类急性毒性分级标准，见表5-4。1994年，针对新化学品管理，国家环保局又制定了新化学物质危害评估准则，其中给出了新化学品对鱼类急性毒性的危害分级标准，参见表5-5。根据下列标准，可以初步评判化学品或污染物 的环境危害性。附录标准稀释水的配制方法 用于配制标准稀释水的试
8、剂应为分析纯，去离子水或 蒸馏水的电导率应10S/cm。具体配制方法如下: o制备标准稀释水前先按照下列要求配制4种溶液 氯化钙溶液 将11.76g CaC12 2H2O溶解于水中，稀释至1L 。 硫酸镁溶液 将4.93g MgSO4 7H2O溶解于水中，稀释至1L。 碳酸氢钠溶液 将2. 59g NaHCO3溶解于水中，稀释至1L。 氯化钾溶液 将0.23g KCl溶解于水中，稀释至1L。 o将这4种溶液各25mL加以混合并用蒸馏水稀释至1L，即配成标 准稀释用水。 o溶液中钙离子和镁离子的总和是2.5mmol/L。 Ca: Mg的比例为 4: 1， Na : K 比为10:1。稀释用水需经曝气直到氧饱和为止，然 后储存备用，在使用前不必再曝气。
