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1、 第五章 食用菌菌种生产第一节 食用菌菌种概述 第二节 食用菌制种的条件 第三节 食用菌菌种分离 第四节 食用菌菌种制作 第五节 菌种质量的鉴定 第六节 菌种保藏与复壮孢子孢子菇体组织菇体组织菌丝体菌丝体菌菌 种种培养基质培养基质子实体子实体萌发萌发分离分离食用菌栽培一般包含几个步骤：第一节 食用菌菌种概述一、菌种概念 二、菌种类型 三、优良菌种的标准返回本 章一、菌种的概念菌种（广义）：是指以保藏、试验、栽培和其 它用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相 对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或 非营养性的载体。菌种（狭义）：是指以适宜的培养基为载体进 行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝 体
2、的联合体。或者说是指人工培养，并供进 一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。返回二、菌种类型二、菌种类型使用目的的不同使用目的的不同 保藏用菌种保藏用菌种实验用菌种实验用菌种生产用菌种生产用菌种培养对象和培养料的不同培养对象和培养料的不同 木质菌种木质菌种草质菌种草质菌种外外观观观观形形 态态态态 颗粒状菌种颗粒状菌种 片状菌种片状菌种 砖砖砖砖状菌种状菌种 物理性状物理性状 固化菌种固化菌种 固体菌种固体菌种 液体菌种液体菌种 培养培养 容器容器 袋装菌种袋装菌种 瓶装菌种瓶装菌种 菌种类型菌种类型培养基的主料培养基的主料 粪草菌种粪草菌种 谷粒菌种谷粒菌种 木木块块块块菌种菌种 木屑菌种木屑菌种 菌
3、种类型菌种类型颗粒菌种颗粒菌种 枝条菌种枝条菌种 菌种按生产程序菌种按生产程序 一级种一级种( (母种）母种）二级种二级种（原种）（原种） 三级种三级种( (栽培种栽培种）菌种类型菌种类型返回本 节用固体基质培养的菌种固体菌种概念特点设备、工艺简单 菌龄长而不一 发酵率较低用液体基质培养的菌种 液体菌种概念特点设备、工艺较复杂 菌龄短而一致 发酵率高 易老化和自溶生 长 势 的 区 别液体菌种固体菌种返回本节三、优良菌种的标准1、无杂菌污染 2、菌种内有足够的菌丝量 3、菌种的菌丝体状态正常 4、菌龄适中返回本 节第二节 食用菌制种的条件一、食用菌制种程序 二、制种的设备和条件返回本 章一、制
4、种程序一、制种程序返回本 节二、制种的设备和条件1、配料设备2、灭菌消毒条件3、接种条件4、培养条件5、菌种保藏设备6、菌种厂的布局返回本 节切片机切片机 切片机是将本 材切成规格木片 的专用机械，是 食用菌培养基质 粉碎处理的预前 工序设备。 粉碎机是将木片 、秸秆等原料粉碎 成一定粗细度碎屑 的专用机械。 粉碎机 切片粉碎两用机搅拌机 是将培养料 通过搅拌使 其分布充分 均匀的专业 机械。自动上料加水原料搅拌机 搅拌机搅拌机 装袋机装袋机 装瓶机装瓶机 菌种袋颈圈菌种瓶返回2、灭菌和消毒条件 （1）灭菌设备高压蒸汽灭菌锅常压蒸汽灭菌灶 （2）消毒条件返回手提式高压灭菌锅手提式高压灭菌锅 的
5、容积小，适用于试管 培养基、三角瓶或平皿 、无菌水、少量菌种瓶 及一些器皿的灭菌。 立式高压灭菌锅立式高压灭菌锅 容量大，可用于菌容量大，可用于菌 种瓶、罐头瓶及塑种瓶、罐头瓶及塑 料袋装培养基的灭料袋装培养基的灭 菌。菌。 立式高压灭菌锅卧式高压灭 菌锅容量大、盛 物多，灭菌彻底 ，效果好。 卧式高压灭菌锅卧式高压灭菌锅返回常压蒸汽灭菌灶返回植物细胞培养及产业化应用 无菌室（接种室）接种室超净工作台 双人单 人接种箱接种箱接种箱是用木材与玻璃 制成密闭箱。有单人式或双 人对接式。接种箱前后斜面 为玻璃窗，便于操作时观察 ，可开启，以便取放物品。 玻璃窗下的木板有一对椭圆 形开孔，操作孔装有白
6、布袖 套，一端固定在圆孔上，另 一端套口用松紧带箍住操作 者的手腕，以防杂菌进入 。箱内可安装20W日光灯和 30W紫外线灯管。 观察窗紫外灯 操作孔接种箱返回本节A、接种针B、接种钩C、接种环D、接种铲E、接种锄F、接种耙G、接种刀H、接种勺I、接种镊接种工具固体 菌种接 种 枪液体菌种接种枪返回培养室培养架在制作一级 种和少量二级种时 ，可采用电热恒温 箱或隔水式电热恒 温箱，目的是控制 温度，适温培养。 恒温培养箱返回贮藏室远离污染源 低温（48） 干燥、通风、遮光 用前要严格消毒杀虫 地面常撒石灰粉保藏原种、栽培种：五、菌种保藏设备 保藏母种：冰箱（4）左右返回六、菌种厂的布局 根据菌
7、种生产流程合理设置仓库配料室灭菌室接种室培养室办公室栽培棚门口晒料场返回一、菌种分离概念 二、菌种分离方法 三、菌种分离提纯 四、出菇试验第三节 食用菌菌种分离返回本 章概念：将子实体的局部组织或孢子移接在斜面 试管培养基上，获得纯培养菌丝的操作称为菌 种分离。菌种分离主要指一级种(母种)的分离 。 有些与高等植物共生的菌根菌，如红菇、 松菇以及有些要在动物（如白蚁）存在下才产 生子实体的菌类，因营养条件复杂，在目前实 验条件下，较难在简单的培养基上获得纯菌种 。 一、菌种分离概念返回菌 种 分 离菇木分离法 二、菌种分离的方法组织分离法 子实体分离法 菌核分离法 菌索分离法 孢子分离法 菌褶
8、涂抹法 孢子印分离法 孢子弹射分离法 整菇插种法 钩悬法 贴附法 单孢子分离法 平板稀释法 连续稀释法 返回空中孢子捕捉法（一）孢子分离法无菌操作条件下使孢子在适宜的培养基上 萌发，长成菌丝体而获得纯菌种的方法称为孢 子分离法。 特特 点点菌丝菌龄短，因是有性 繁殖产物，其菌丝生命力强 。 侵染病毒的菌类可用孢 子分离法脱毒。 种菇的选择 在生产中必 须选择优良品系 中的优良个体作 分离材料。 选取八、九 分成熟的，健壮 无杂的第一或第 二茬的子实体。（一）孢子分离法返回1、孢子弹射分离法它是利用孢子能自动 弹射出子实体层的特 性来收集孢子。 （1 1）整菇插种法）整菇插种法 孢子收集器 来收
9、集孢子 2-3天后孢子散 落在培养皿中，加入 无菌水，用针筒吸取 孢子液，接种在斜面 培养基中央，置于22 -26恒温箱中培养 即可。 （1）整菇插种法在生产上，采集木耳、银 耳孢子常用此法，伞菌也可采 用此法。 先将新鲜成熟的耳片用无 菌水冲洗，然后用无菌纱布将 水吸干，取一小片挂在灭菌的 钩子上(伞菌消毒后挂上）， 钩子的另一端挂在三角瓶口。 （2）钩悬法瓶内装有培养基，在25下，培养24h。孢子落到 培养基上后，取出耳片，塞上棉塞继续培养，然后再 转入试管中培养。 （2）钩悬法取一小块成熟的菌 褶或小块菌盖，用溶 化的琼脂或胶水、浆 糊(需先灭菌)贴附在 试管斜面的上方或培 养皿皿盖上，
10、经6 12h，待孢子落下后， 立即将试管或培养皿 中的培养基移到另一 消毒过的空试管或培 养皿中进行培养。（3）贴附法返回2、菌褶涂抹法将伞菌子实体用75酒精表面消毒，按无菌操作 用接种环直接插入两片菌褶之间，轻轻地抹过褶片表 面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。 3、孢子印分离法取成熟子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌褶 向下放置于灭过菌的有色纸上，在20-24静置一天 ，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在试管 培养基上培养。 返回4、单孢子分离法进行单孢子分离后，在人工控制的条件下，使两个优良品 系的单孢子进行杂交，从而培育出新品种。 挑取少许孢子在无菌水中形成孢子悬浮液，取几 滴涂
11、于培养基上，用无菌玻璃三角架推平。经48-72h 后，镜检孢子萌发情况。在单个孢子旁做好标记，然 后将其转接到斜面培养基上，待菌落长到lcm左右时进 行镜检，观察有无锁状联合；初步确定是否是单核菌 丝。 （1）平 板 稀 释 法 （2）连 续 稀 释 法 返回o 伞菌的孢子（如平菇、香菇、金针 菇等）大量弹射时，子实体周围可以看 到“孢子云”，可在“孢子云”飘去的 上方倒放琼脂平板，使孢子附在其上， 再盖上皿盖，用塑料胶水纸封好培养， 整个过程动作要尽可能迅速敏捷。 5、空中孢子捕捉法返回（二） 组织分离法组织分离组织分离法法 是利用子实体内部菌肉组织 来获得菌种的一种最简便的方法，是生产上常
12、 用的一种分离菌种的方法。 组织分离是一种无性繁殖过程，所得到的 菌种是营养后代，后代不易变异，菌株可保持 原品种的优良品质。但如采用感染病毒的子实 体进行组织分离时，常得到带病毒的菌丝体。返回1、子实体分离法分离的方法和步骤 ：种菇的选择 种菇的消毒切 块接种培养纯 化出菇试验 母种1、子实体分离法返回o 它是从食用菌菌核分离培养获得纯菌丝的一种方法。 如猪苓、茯苓、雷丸等食用兼药用菌的子实体不易采集到 ，而其营养贮藏器官菌核则较易获得。o 菌核分离与子实体组织分离的方法很相似。即把菌核 表面洗净，放入经灭菌消毒的接种箱中或超净工作台上， 用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡0.51min，用
13、无菌 水冲洗数次，再用无菌解剖刀把菌核从中切成两半，在中 心位置挑取黄豆大一小块组织，接在斜面培养基中央，在 25下培养。当接种块萌发出菌丝后，挑取无杂菌、长 势旺的菌丝体转管培养后即作母种。由于菌核是食用菌的 营养贮藏器官，其中大部分是多糖物质，有少部分的菌丝 ，因此接种块应挑取得大些，否则有时就长不出菌丝体来 。 2、菌核分离法返回o 它是从食用菌菌索种分离培养得到纯菌丝的方法。如 蜜环菌、假蜜环菌等食用菌在人工培养条件下不易形成 子实体，也不产生菌核，它们是以特殊结构的菌索来进 行繁殖的，因此这类菌可用菌索分离菌种。o 将风干的菌索放入灭菌消毒过的接种箱中或超净工 作台上，挑取生命力旺盛
14、的菌索尖端部分，用75%酒精 棉球擦洗表面，以无菌的解剖刀除去菌索的黑色的外皮 层（即菌鞘），抽出其白色菌髓部分，将其剪成小段， 移接到培养基中央。在25左右的条件下培养，菌丝生 长出来后，经几次提纯转管后即可制成母种。菌索是生 长在枯木或埋在土中的，为了预防杂菌污染，在配制培 养基时，常加入青霉素或链霉素，浓度为40mg/kg左 右，以抑制细菌的生长繁殖，从而提高分离的成功率。 3、菌索分离法返回第四节 食用菌菌种制作菌种分母种、原种和栽培种。通常也称一 级种、二级种、三级种。一、母种制作二、原种与栽培种制作返回本 章一、母种制作1、培养基制备 2、接菌 3、培养检验返回本 节接 种母 种返
15、回母种培养基配制方法配方马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）马铃薯 200克 葡萄糖 20克琼脂 20克 水 1000毫升pH5.561、称量配制方法2、土豆加热煮沸3、添加其它营养物质，调节pH值4、分装试管5、塞棉塞6、灭菌7、摆斜面返回土豆削 皮切 块切 块称量土豆返回添加土豆煮沸过 滤过 滤 返回称量葡萄糖称量琼脂添加琼脂 返回加 热分装试管分装好的试管 返回塞 棉 塞 返回包 扎装 锅放 气返回摆 斜 面摆 斜 面 返回返回母种 培养 及时挑拣污染管 分离的母种要纯化出菇试验 使用 控制菌龄（即将长满斜面）培养时间510天母种培养细菌污染返回木霉污染二、原种与栽培种制作（一）培养基制备1、配制原则2、配制方法配方-配料-拌料-装袋（瓶）-灭菌 （二）接菌 （三）培养、检验返回本 节培养基常用的配方 1木屑培养基：阔叶树木屑78%，麸皮( 或米糠)20%，石膏2%。这是常见的木屑培养 基配方。适于制作香菇、平菇、黑木耳、金 针菇、滑菇、灵芝、猴头菇等多种木腐型菌 种。2棉籽壳培养基：棉籽壳78%，麸皮( 或米糠) 20%，石膏2%。适用于制作金针菇 、平菇、凤尾菇、草菇、银耳、黑木耳、猴 头菇等菌种。 3、谷粒培养基：玉米粒或小麦粒100% 。麦粒种原种及栽培种培养基原料装袋（瓶）原料装袋（瓶）栽培种的装袋原种
