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1、 动物细胞工程动物细胞培养和核移植技术动物组织块动物组织块剪碎剪碎制成细胞悬浮液制成细胞悬浮液将动物组织消化后的初次培养将动物组织消化后的初次培养原代培养原代培养 回顾动物细胞培养的过程胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 处理分散成单个细胞处理分散成单个细胞将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶 处理，分瓶继续培养的过程处理，分瓶继续培养的过程传代培养传代培养接触抑制现象： 当贴壁细胞分裂 生长到表面相互 接触时，细胞就 会停止分裂增殖 。体验高考(2008宁夏理综) (1)(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分 裂生长到细胞表面
2、裂生长到细胞表面 时，细胞会时，细胞会 停止分裂增增殖，这种现象称为细胞的停止分裂增增殖，这种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的细胞层数。此时，瓶壁上形成的细胞层数 是是 。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来 ，需要使用的酶是，需要使用的酶是 。 相互接触相互接触 接触抑制接触抑制 单层单层 胰蛋白酶胰蛋白酶 体验高考(2008宁夏理综) (2)(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细随着细胞传代次数的增多，绝大部分细 胞分裂停止，进而出现胞分裂停止，进而出现 的的 现象；但极少数可以连续增殖，其中有些现象；但极少数可以连续增殖，其中有些 会因遗传物质发生改变变成会因遗
3、传物质发生改变变成 细胞细胞 ，该种细胞的黏着性，该种细胞的黏着性 ，细胞膜表面蛋，细胞膜表面蛋 白质（糖蛋白）的量白质（糖蛋白）的量 。衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性 降低降低 减少减少 动物细胞培养动物细胞培养左图显示了创面愈合 过程中一个十分有趣 的现象。当周边的上 皮向创面中央爬行时, 一旦上皮细胞互相接 触,就停止分化和增殖 。该现象就叫“接触抑 制“。因此,创面上不 会出现多余的皮赘。 这是一种十分巧妙和“ 神秘“的调控现象。 动物细胞培养动物细胞培养 原理l细胞增殖 条件 无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境 营养营养 温度和温度和pHpH 气体环境气体环境糖、氨基酸、促生长因
4、子、无机盐、微量元素等植物组织培养： 固体培养基：无机营养成分、 有机营养成分、激素、琼脂动物体细胞核移植技术和克隆动物1、试着列举你所知道的克隆动物。克隆 动物的方法与植物组织培养一样吗？ 2、请简述多利克隆的过程？阅读核移植技术发展简史卵细胞苏格兰黑面母羊芬兰白面母羊 乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植 早期胚胎另一头母绵羊子宫胚胎移植多利羊多利羊的培育过程重组细胞动物体细胞核移植技术和克隆动物体细胞体细胞 核移植核移植 的过程的过程 （以克（以克 隆高产隆高产 奶牛为奶牛为 例）例）以概念图的形式表示体细 胞核移植过程？取供体细胞取卵母细胞供体细胞培养培养到 M中期卵母细胞去核供体细胞注入去
5、核的卵母细胞供体核进入受体卵母细胞重组胚胎代孕母牛生出与供体遗传物质基本相同的个体:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经 去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育 成一个新的胚胎，这个新胚胎最终发育成动 物个体。用核移植的方法得到的动物称为克 隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植（ 难度高）受体细胞：M 期的卵母细胞请同学们归纳动物体细胞核移植概念思考题思考题1、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉 受体卵母细胞的核？卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性 得以表达； 卵母细胞体积比较大，容易操作； 卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早 期胚胎的形成提供营养。 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体
6、细胞？为使核移植动物的遗传物质全部来自有 利用价值的动物提供的体细胞。思考题思考题 体细胞核移植技术为什么要选择MII 期的卵母细胞做受体细胞？ 细胞核移植技术中能用作受体细胞的通常有 MII期卵母细胞和受精卵（合子）。 早期核移植技术中常用受精卵，后来基本上用 MII期卵母细胞取代了受精卵，主要因为两者 的细胞质环境不同。有人认为重组需要的因子 存在于MII期卵母细胞的胞质中，而在原核形 成时这些因子已被降解或用光，因此，原核扩 张后受精卵去核可引起胞质中重组因子缺乏。 成熟促进因子（MPF）是卵母细胞细胞质中重要 的胞质影响因子，MPF的活性在卵母细胞减数分 裂的MI期和MII期达到最高，
7、受精或激活后， MPF迅速灭活，因此，MII期卵母细胞中MPF活 性高，而受精卵中MPF活性低。MPF水平的高 低可影响供体核染色质的状态和复制。MII期卵 母细胞细胞核、细胞质已成熟，而MI卵母细胞细 胞核、细胞质尚未成熟，其细胞质不能支持胚胎 的全程发育，因此，尽管MI期卵母细胞MPF活 性也高，但不能用作受体卵母细胞。 3.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内 的细胞，为什么？ 10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型 ，未突变. 二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂中期的 表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和 4.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供 体动物进行了100
8、%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核， 但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受 体卵母细胞.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景1 1）改良动物品种）改良动物品种 2 2）保护濒危动物）保护濒危动物 3 3）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4 4）异种移植的供体，用于组织器官的移植）异种移植的供体，用于组织器官的移植 5 5）深入了解胚胎发育及衰老过程）深入了解胚胎发育及衰老过程 6 6）追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病）追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在
9、的问题 成功率非常低成功率非常低 绝大多数克隆动物存在健康问题绝大多数克隆动物存在健康问题 对克隆动物食品的安全性问题也存在争议对克隆动物食品的安全性问题也存在争议P50 P50 思考与探究思考与探究1 1 幼龄与老龄动物的组织细胞相比较，分化 程度低的与分化程度高的组织细胞比较， 哪一种更易于培养？思考一下，这是什么 道理？ 提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切 的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关， 幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老 龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组 织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样 ，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强 ，所以更容易培养。
10、 2.2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗动物细胞培养要经过脱分化的过程吗 ？为什么？为什么？提示：脱分化又称去分化，是指分化细胞失去特有的 结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。植物的 任何一部分，甚至单个细胞都具有长成完整植株的能 力。但要发育成完整植株，必须先脱分化，脱分化的 细胞具有发育成任何组织的能力，然后进行再分化， 形成完整植株。植物细胞培养主要用于农林生产中的 作物、苗木育种，快速繁育种苗、培育无病毒植株等 ，这就要求植物的组织或细胞先进行脱分化。动物细 胞的培养有各种用途，一般而言，动物细胞培养不需 经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变 窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞 也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了 。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱 导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。olens 美瞳 http:/olens.jd.hk/ smf553ljs
