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1、使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ p75 受体受体 表达表达浅谈 【摘要】 目的 研究感觉神 经和运动神经来源的雪旺细胞(sc)表达低亲 和力受体(p75)的情况。方法 结合酶消化、 阿糖胞苷处理和 s-100 免疫荧光鉴定，从 5d 龄 sd 乳鼠背根神经和股神经得到感觉和 运动神经来源的 sc。2 种细胞分别进行普通 培养基和添加高浓度白细胞介素(il)-1 培养 基的培养，检测不同时间 sc 表面神经生长 因子 p75 的表达情况。结果 感觉和运动 sc 普通培养基组 p75 受体表达方式明显不 同，前者在第 5d 迅速达到峰值 (1086.39535.16)，而后者在同期
2、呈低水平 (410.50326.55，p0.05)；而添加 il-1 组 2 种细胞的表达基本一致，均在第 5d 达到 峰值 (891.50406.10、922.32520.25，p0.0 5)后均迅速下降。结论 2 种神经来源的 sc 表达 p75 受体存在差异，提示 sc 在再生过 程中存在感觉性和运动性的差异。 【abstract】 objective to study the p75 expression of schwann cells (sc) derived 使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ sensory and motor nerves.methods sc d
3、erived from dorsal root nerve or femoral nerve were taken in 5 day old sd rats and cultured in dmem/f12, 10% fcs media with or without high-dosage interteukin (il)-1 added. the expression of p75 was detected by using immunofluorescent method at indicated time points.results without il-1 in media, th
4、e expression patterns of two groups of sc were different. sensory sc displayed a peak expression at 5th day, and at the same time, the expression of motor sc was relatively lower (p0.05). in the prese nce of il-1 in media, the curves of p75 expression tended to be alike, and it reached the peak at 5
5、th day (p0.05) and went downwards.conclusion there is a biological difference between sensory and motor sc, indicating a difference in sensory and motor exists in specific regeneration of peripheral nerves. 使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ words】 schwann cell; motor; sensory; interleukin-1; p75 receptor 在神经损
6、伤后雪旺细胞(sc)重新增殖、 分化，重新包裹轴突的过程中，sc 是否有 感觉性雪旺细胞(ssc)和运动性雪旺细胞 (msc)之分如果这样，则有助于我们理解神 经特异性再生。由于 sc 及神经元表面均有 低亲和力(p75)受体表达1 ，那么在再生 过程中，sc 和神经元可能同时受到来源于 末端靶器官和自身分泌的神经生长因子(ngf) 的作用，研究 p75 的表达可以反映二者之 间的作用关系。我们通过添加明显高于病理 水平的高浓度白细胞介素(il)-1 (10000u/l)公 司观察 ssc 和 msc 的 p75 表达的反应性， 旨在探索 2 种 sc 的 p75 受体表达的规律， 为解释特异
7、性再生提供依据。 材料和方法 1.细胞培养2：无菌取 5d 龄 sd 乳 鼠的背根神经和股神经运动支，解剖显微镜 下剔除结缔组织和神经外膜，剪碎后加入质 量分数为 0.25%胰蛋白酶(sigma 公司)和质 量分数为 0.25%胶原酶(sigma 公司)，37使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 40min，细胞悬液接种于预先包被浓度 为 1g/l 的多聚赖氨酸(sigma 公司)的 petri 培养皿，孵育箱中培养(37，体积分数为 5%co2)。培养基含有体积分数为90%dmem/f12(11)(gibco 公司)、体积分 数 10%小牛血清、25mmol/l hepes(sig
8、ma 公司)及青、链霉素。48h 后加入 10-5g/l 的 阿糖胞苷(ara-c)处理 2d。 2.细胞免疫荧光、碘化丙啶双重染色： 细胞鉴定及受体检测使用免疫荧光染色技术， 用碘化丙啶双重标记目的是确定细胞轮廊， 便于计算每个细胞的荧光值。以检测 p75 受体步骤为例：倾去 petri 培养皿中的培养 基，磷酸盐缓冲溶液(pbs)洗涤，体积分数 为 1%多聚甲醛固定 15min，pbs 洗涤，150 羊抗鼠 p75 受体抗体(武汉博士德) 50l,90min(37)，pbs 洗涤，150 兔抗 羊异硫氰酸荧光素标记抗体(igg-fitc，武汉 博士德) 50l，30min(37)，pbs
9、洗涤， 5mg/l 碘化丙啶 50l，室温 20min，pbs 洗 涤后进行扫描。 3.受体检测：按上述方法培养的 2 种使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 8 个 petri 培养皿，按随机 的方法记号为 18 号，将每组的 4 对培养 皿规定单号加入常规培养基，双号为添加 10000u/l il-1(北京邦定公司)的培养基。在 培养的第 3、5、7、9d 按顺序各取 1 对进 行 p75 受体免疫荧光和碘化丙啶双重染色， 方法如上说明。 结 果 1.雪旺细胞培养：光镜下根据 sc 的典 型形态判断，ssc 的纯度达到 79%，msc 则 达到 90%；s-100 是 sc 膜表
10、面表达的特异 性蛋白，通过荧光标记的抗 s-100 单克隆抗 体，利用抗原抗体特异性结合的原理，可以 识别出 sc。操作方法类似以上 p75 的检测， 只需调整为相应的一抗和二抗。用该法计算 ssc 的纯度可达 87%，msc 可达 95%。混 杂的细胞一般是成纤维细胞。 2.受体表达：普通培养条件下，ssc 与 msc 第 3d p75 表达的平均水平是接近的， 分别为 217.63235.95、252.54263.91(p0.05)， 第 5d ssc 的 p75 表达出现峰值，达使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ msc 410.51326.55 2 倍以上(p0.05)，其
11、后在 第 7d(964.46441.70)、第 9d(330.71205.14)呈下降趋势，而 msc 的 p75 表达曲线则表现较低水平的平直趋势， 在第 9d(511.31757.23)超过 ssc。 在添加高浓度 il-1 的培养条件下，2 种 细胞 p75 表达呈现较一致的趋向，即在第 3d 均处于较低水平 ssc:228.18222.13、msc：355.09312.72 ，在第 5d 出现峰值 (891.54406.10、922.32520.25，p0.0 5)，其后表达下降，ssc 下降较慢，观察期 内降至 625.75453.53，msc 则又降至 253.80254.81，p
12、0.05。 讨 论 本实验取自股神经运动支和背根神经组 织，通过培养过程中观察细胞形态，抗 s- 100 免疫荧光标记均确定为 sc，因此可以 确定我们得到的细胞是感觉神经源和运动神 经源性 sc。为探讨二者是否存在差异性， 我们进一步从生物学方面进行了研究。在再使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ sc 的作用是交互的。 有研究表明，神经离断后 3h 近端即有轴芽 长出，其生长不需要任何基质成分，但延伸 速度处于慢相期，方向随机，2d 之后，sc 增殖迁出，沿已有的轴突迅速延伸，并超过 轴突，此时轴突的生长度进入快相期，而且 其生长方向趋向一致3 。sc 表面的 ngf 受体主要是
13、 p75，这种受体的效应与 trk 不 同，它主要是促进细胞的分化和迁移1 。 本实验结果显示，离体培养时，ssc 与 msc 在常规培养基中 p75 受体表达的区别 提示 ssc 在较低 il-1 浓度时即表现对损伤较 高的反应性。nikam 等4的研究表明， sc 的 p75 受体的表达与锌指转录因子 zif268 的关系密切，而该转录因子则参与了 使静止的、形成髓鞘的 sc 转化成易化神经 修复的增殖状态的 sc。结合 kojun 等3 的研究，可以推测感觉性神经纤维在再生时 会较早接触同性质的胶质细胞，这也与临床 病人的感觉恢复较早、较好现象相符；我们 在本实验使用含有远高于生理浓度的
14、 il-1 的 培养基5 ，2 种细胞的表面曲线近乎一致，使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 2 种细胞存在共性，也说明对于 msc，可能另有因素影响其 p75 的表达。本 实验的结果初步说明 2 种来源的 sc 在神经 再生过程中存在区别，为进一步研究 sc 促 进神经特异性再生的分子机制打下基础。 参考文献 1，anton es, weskamp g, reichardt lf, et al. nerve growth factor and its low- affinity receptor promote schwann cell migration. proc natl
15、acad sci usa, 1994,91:2795-2799. 2，严恒林，沈馨亚，刘才栋，等.脊神 经来源的人胎儿雪旺氏细胞的体外研究培养.解 剖学杂志，1995，18：203-206. 3，kojun t, tanaka hf, takahashi a, et al. basic behavior of migratory schwann cells in peripheral nerve regeneration. exp neur, 1996,137:3 01-308. 4，nikam ss, tennekoon gi, christy ba, et al. the zinc finger transcription factor zif2
