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1、实验七 酶促反应动力学 pH、温度、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响 生物化学实验之山东师范大学生命科学学院【实验目的】1. 了解pH、温度、激活剂、抑制剂对酶活力的影响。2. 学习测定酶最适pH值的方法。【实验原理】 对环境酸碱度敏感是酶的特点之一。酶 表现最大活力时的pH值称为酶的最适pH值。 一般酶的最适pH值在48之间。酶的催化作用受温度的影响很大，反应速度达到最大值时的温度称为酶的最适温度 。大多数动物酶的最适温度为3740，大 多数植物酶的最适温度为5060。激活剂能增加酶的活力，抑制剂会 降低酶的活力。如 Cl-: 唾液淀粉酶的激活剂，Cu2+则是该酶的抑制剂。 在不同pH、温
2、度以及激活剂、抑制剂存在下，唾液淀粉酶对淀粉水解活力 的高低可通过水解混合物遇碘呈现颜色 的不同来判断。 淀粉及其水解产物遇碘呈现不同的 颜色： 淀粉呈兰色；大分子糊精（紫色糊精）呈紫色 ；其次的糊精（红色糊精）呈红色；小分子糊精及麦芽精为无色。【器材与试剂】 （一）器材1.恒温水浴锅 2.试管 3.试管架 4.锥形瓶（50 ml或100ml） 5.吸量管（1、2、5、10ml）6.秒表 7.白瓷板 8. pH试纸（二）试剂1.含有0.3NaCl的0.5淀粉溶液 2. 0.2molL Na2HPO4溶液3. 0.1molL柠檬酸溶液4. KII2溶液5. 新鲜唾液【实验步骤】 1. pH值对酶
3、活力的影响(1)取干燥试管6支, 编号，按下表制备 pH 5.0 8.0的5种缓冲溶液。编编号试剂试剂0.2mol/L Na2HPO4（ ml）0.1mol/L 柠柠檬酸（ml ）缓缓冲液pH11.551.455.021.91.16.032.30.76.842.80.27.652.90.18.062.30.76.8(3) 测定淀粉完全水解所需的时间：先向第6号试管中加稀释50200倍的唾液2ml，摇匀后放入37恒温水浴中保温,检测淀粉水解程度,并测定淀粉完全水解所需的时间。(2) 向每支试管中加入0.5%淀粉溶液 2ml 。第6号试管与第3号试管内容物相 同。按照第6号试管的保温时间，依次将各
4、 管迅速取出，并立即加入KII2溶液2滴，充 分摇匀。观察各管呈现的颜色， 观察pH对 唾液淀粉酶活力的影响，并确定其最适pH。(4) 测定淀粉酶的最适pH：每隔1分钟依次向第1至第5号试管中加入 上述稀释的唾液2ml，摇匀，依次将5支试管 放入37恒温水浴锅中保温。2. 温度对酶活力的影响取试管3支，编号后按下表加入试剂： 试试管编编 号 试剂处试剂处 理123淀粉溶液/mL1.51.51.5煮沸10min的唾液/mL_1新鲜鲜的稀释释唾液/mL11_第1、 3号试试管放入37，第2 号试试管放入冰水中，各10 min 。取出后，2号管分为为两份，一份放入37 。 碘化钾钾碘溶液/滴222记
5、录观记录观 察结结果3. 激活剂和抑制剂对酶活力的影响 （1）取试管3支，按下表编号加入相应试剂： 试试管 编编号试试 剂剂0.1淀粉 (ml)1NaCl (ml)1%CuSO4 (ml)H2O (ml)1:20唾液 (ml)12112211321 1(2)摇匀，置37水浴中保温，用稀碘液检测淀粉水解程度。【注意事项】 pH值对酶活力的影响实验：1.掌握第6号试管的水解程度是本实验成败的关键之一。2.严格控制温度。在保温期间，水浴温度不能波动，否则影响结果。3.严格控制反应时间, 保证每管反应时间相同。 激活剂、抑制剂对酶活力的影响：每管中加入的底物应是不含NaCl的1淀粉 溶液。【思考题】1. 高温导致酶活性丧失的分子机理是什么？如何在酶的分离纯化中克服这种影响？2. 什么是酶的最适温度？有何实践意义？3.什么是酶的最适pH？它是否是一个常数？它与哪些因素有关？这种性质对于选择测定酶活 力的条件有什么意义？4. 酶反应的抑制作用有哪些类型？各根据什么划分的？它们各有什么特点？
