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1、实 验 二鸡 胚 的 壳 外 培 养鸡 胚 作 为 生 物 学 的 实 验 材 料 ， 其 历 史 已 经 相 当 悠 久 。 鸡 蛋 取 材 方 便 ， 孵 育条 件 简 单 ， 且 一 年 四 季 都 有 新 鲜 材 料 可 取 ， 是 胚 胎 学 、 发 育 生 物 学 教 学 、 科 研的 良 好 材 料 。 近 代 ， 鸡 胚 已 被 大 量 地 用 于 发 育 的 研 究 。 但 鸡 胚 在 壳 内 发 育 ， 观察 、 实 验 又 有 其 不 便 之 处 ， 鸡 胚 的 壳 外 培 养 可 以 克 服 这 些 困 难 。鸡 胚 的 壳 外 培 养 方 法 ， 最 早 见 于Sch
2、lesinger（ 1966 ） 的 报 道 。 当 时 只 能 使鸡 胚 存 活10-12天 。 经 过 近 二 十 年 来 许 多 学 者 的 努 力 ， 现 在 已 能 使 鸡 胚 在 无 壳情 况 下 存 活 和 正 常 分 化 至 第15 天 左 右 。 目 前 鸡 胚 无 壳 培 养 方 法 大 体 上 有 聚 乙 烯小 袋 法 、 塑 料 皿 培 养 法 及 玻 璃 小 杯 法 和 玻 璃 皿 培 养 法 等 。 其 基 本 原 理 及 方 法 大同 小 异 。 其 中 用 玻 璃 皿 培 养 ， 器 材 简 单 ， 便 于 观 察 。通 过 壳 外 培 养 ， 可 以 直 接
3、观 察 鸡 胚 发 育 过 程 ， 观 察 胚 胎 与 胎 膜 的 关 系 、 胚 胎的 行 为 及 循 环 模 式 等 。 另 一 方 面 ， 易 于 进 行 各 种 鸡 胚 的 外 科 手 术 ， 如 切 除 肢 芽 ，破 坏 神 经 管 及 尿 囊 绒 毛 膜 移 植 等 。 对 于 发 育 的 行 为 学 、 畸 胎 学 、 生 理 学 研 究 ，也 是 一 种 良 好 方 法 。 近 年 也 有 学 者 将 鸡 胚 壳 外 培 养 方 法 应 用 于 肿 瘤 诱 导 的 血 管形 成 ， 中 枢 神 经 系 统 的 培 养 ， 哺 乳 类 早 期 胚 胎 培 养 、 尿 囊 绒 毛
4、膜 壁 对 钙 离 子 的吸 收 和 转 运 ， 以 及Ca2+对 鸡 胚 各 器 官 发 育 的 影 响 等 研 究 。实 验 技 术一 、 实 验 材 料 的 准 备1. 取 新 鲜 的 受 精 鸡 蛋 ，置 于 温 度 为37-39 ，相 对 湿 度 为60-70% 的 孵 育 箱 中孵 育 。2.取 孵 育3 天 （ 72 小 时 ） 的 鸡 蛋 ， 用 浸 有 75%酒 精 的 棉 花 擦 拭 鸡 蛋 外 壳 ， 晾干 备 用 。3.取 消 毒 过 的1.5 9.5cm培 养 皿 及 2.5 12cm 培 养 皿（ 带 盖 ）数 付 ，在 小 的培 养 皿 内 加 10ml的 Haw
5、ard氏 生 理 盐 水 。 为 了 防 止 污 染 ， 也 可 同 时 加 入100 单位 /m l的 庆 大 霉 素 和 制 霉 菌 素 。二 、 破 壳 与 培 养 （ 图11.1）1. 将 鸡 蛋 置 于 蛋 座（ 小 培 养 皿 内 放 一 些 棉 花 ）上 ，先 用 小 挫 刀 或 刀 片 沿 蛋 的横 轴 挫 出 和 割 出 五 分 之 四 的 小 裂 缝 ， 在 无 裂 缝 处 沿 蛋 的 纵 轴 贴 上 一 块 宽1-2cm ，长 3- 4cm 的 胶 布 ， 在 其 对 面 ， 裂 缝 的 两 旁 各 沿 纵 轴 贴 上 一 块 宽1-2cm ， 长 6-7cm的 胶 布
6、（ 胶 布 的 一 端 与 裂 缝 边 缘 齐 ， 另 一 端 留 下 一 段 ） ， 将 无 裂 缝 处 朝 上 ， 静置 数 分 钟 ， 待 胚 盘 转 向 上 方 。2.用 大 姆 指 按 住 无 裂 缝 处 ， 两 手 的 食 指 和 中 指 各 夹 一 边 的 一 段 胶 布 ， 平 移 至盛 有 生 理 盐 水 的 培 养 皿 上 方 ， 轻 轻 把 胶 布 往 两 旁 一 拉 ， 蛋 的 内 容 物 即 可 完 整 地流 入 培 养 皿 中 。3. 将 盛 有 鸡 胚 的 培 养 皿 放 入 大 培 养 皿 内 ，在 大 培 养 皿 内 加 入 一 层 薄 薄 的 蒸 馏水 ，
7、以 保 持 湿 度 。 盖 上 大 培 养 皿 的 盖 子 ， 置 于 37-39 恒 温 箱 中 培 养 。 如 果 有 二2 氧 化 碳 培 养 箱 则 更 好 （ 二 氧 化 碳 浓 度 调 到 5%左 右 ） ， 鸡 胚 存 活 率 会 更 高 ， 存 活时 间 更 长 。实 验 观 察1.从 培 养 日 起 ， 便 可 逐 日 观 察 。 注 意 观 察 并 记 录 鸡 胚 的 脑 、 眼 睛 、 血 管 、 肢芽 、 啄 、 胚 胎 外 膜 （ 包 括 羊 膜 、 浆 膜 和 尿 囊 ） 、 羽 毛 等 的 形 成 和 发 育 ， 血 液 循环 方 式 ， 鸡 胚 运 动 等 。2
8、. 鸡 胚 若 不 能 粗 略 运 动 ， 血 液 停 止 流 动 ， 即 为 死 亡 ， 记 录 死 亡 时 间 。实 验 注 意 事 项1. 生 理 盐 水 最 好 先 置 于 温 箱 中 ，使 其 温 度 与 鸡 胚 孵 育 的 温 度 相 同 ，有 利 于 鸡胚 的 存 活 。2. 每 次 观 察 和 实 验 时 间 不 宜 太 长 ， 亦 不 能 使 温 度 下 降 过 多 ， 并 要 防 止 污 染 。3. 经 孵 育 3 天 的 鸡 胚 ，卵 黄 囊 已 经 开 始 液 化 ，破 壳 时 需 注 意 ，不 能 用 力 过 大 ，否 则 极 易 损 伤 卵 黄 囊 。 卵 黄 囊
9、一 旦 受 损 ， 则 无 法 继 续 存 活 。4. 实 验 时 若 卵 黄 流 出 鸡 胚 ，弃 之 不 用 ，在 培 养 皿 中 若 胚 胎 朝 下 ，也 不 能 存 活 。5. 在 培 养 过 程 中 ，若 发 现 有 卵 黄 流 出 的 鸡 胚 ，或 发 生 污 染 的 鸡 胚 ，将 其 取 出弃 之 。6. 在 培 养 过 程 中 注 意 给 大 培 养 皿 内 添 蒸 馏 水 ， 小 培 养 皿 中 添 加 消 毒 过 的 生理 盐 水 ， 以 免 水 份 蒸 发 影 响 湿 度 。实 验 材 料1. 实 验 材 料 ：受 精 鸡 蛋 。2. 实 验 仪 器 ：恒 温 箱 、 小
10、 挫 刀 、 单 面 刀 片 、 1.5 9. 5cm 培 养 皿 、 2.5 12 cm 小 培 养 皿 、 胶布 、 棉 花 、 剪 刀 。3. 实 验 药 品 ：75%酒 精 、 庆 大 霉 素 、 制 霉 菌 素 、 蒸 馏 水Hawar d Rin ge r 氏 液 ：NaCl 7.3gCaCl(2H2O)2 0.17gKCl 0.37g蒸 馏 水 1000ml3 实 验2鸡 胚 的 壳 外 培 养班 级姓名得分实 验 作 业1. 从 培 养 日 起 ， 逐 日 观 察 记 录 鸡 胚 的 脑 、 眼 睛 、 血 管 、 肢 芽 、 啄 、胚 胎 外 膜 （ 包 括 羊 膜 、 浆 膜 和 尿 囊 ） 形 成 和 发 育 的 时 间 ， 观 察 血 液 循 环方 式 ， 鸡 胚 运 动 等 。2. 鸡 胚 若 不 能 粗 略 运 动 ， 血 液 停 止 流 动 ， 即 为 死 亡 ， 记 录 死 亡 时 间 。
