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1、使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 美国疾病控制与预防中心(cdc)自 50 年代开始研究和推行血脂测定标准化。多年 来，他们的血脂测定参考方法和参考材料一 直作为美国和许多其他国家血脂测定的准确 性基础；他们的血脂标准化计划为美国和世 界上许多心血管病研究的血脂标准化和临床 实验室血脂分析质量的提高做出了突出贡献。 了解他们的血脂标准化工作有助于我国血脂 标准化的开展。 一、概述 血脂标准化的核心是准确性的可溯源性。 要开展标准化工作，首先要建立一个可靠的 参考系统作为准确性基础，然后再将准确性 转移到常规分析中去，或使常规分析的准确 性可溯源到参考系统所提供的准确性基础上。 完
2、整的参考系统包括决定性方法、一级参考 物质、参考方法和二级参考物质。目前美国 已有总胆固醇(tc)和甘油三酯(tg)决定性方法， 而高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)和低密度脂蛋 白胆固醇(ldl-c)由于被分析物存在形式的复 杂性和目前技术水平的限制，则只有参考方 法。tc、tg 决定性方法是由国家标准与技术使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ ，cdc 建立并维 持 tc、tg、hdl-c 和 ldl-c 参考方法3 ，其 中 tc 参考方法是国家临床实验室标准委员 会(nccls)的国家胆固醇参考系统(nrs/chol) 的组成部分，tg、hdl-c 和 ldl-c 参考方法也
3、已为国家胆固醇教育计划(ncep)所推荐 46 。决定性方法由于其技术和成本的 高要求，一般只用于参考方法的评价和监督， 而参考方法往往是日常标准化工作的主要角 色。目前 cdc 的 tc、tg、hdl-c 和 ldl-c 参考 方法和用参考方法准确定值的冰冻血清参考 物质实际上在为美国和世界上许多国家的血 脂分析提供准确性基础。 转移准确性需制定转移计划，亦即标准 化计划。cdc 与国家心肺血液研究所(nhlbi) 的血脂标准化计划是世界上最早的血脂标准 化计划。此计划主要通过经参考方法准确定 值的冰冻血清物质转移准确性。使用定值血 清转移准确性是最简便、最经济的标准化方 法，但适合大规模生
4、产、贮存和运输的血清 难免要经过一定的处理，如冰冻、冻干等， 而这些处理会在一定程度上改变血清性质，使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 生基质效应。为此，cdc 于 1988 年建立胆 固醇参考方法实验室网(crmln)，以便仪器、 试剂生产厂家和临床实验室直接用新鲜血清 与参考方法对比分析结果。 下面将分别对 cdc 参考方法、参考血清、 cdc-nhlbi 血脂标准化计划和 crmln 作简单 介绍。另外，质控调查计划在血脂标准化中 也起重要作用，它们与 cdc 参考系统的关系 也将作简单介绍。 二、cdc 血脂参考方法 1.tc：tc 参考方法为 abell-levy-bro
5、die- kendall(albk)法，包括皂化、提取、显色和 比色等步骤。此法移液步骤多，提取和显色 也需严格控制，一般情况下难以得到可靠结 果。cdc 能成功地用作参考方法是由于他们 在以下方面做了改进。(1)取样和各部移液 均用高性能自动稀释器操作，保证了移液精 密度。(2)在取样过程中使用了冲洗程序， 即用醇性氢氧化钾(皂化剂)将标准和样品冲 入试管中，避免了样品(血清)和标准(乙醇溶 液)由于基质不同而对取样准确度的影响。使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 不同，胆固醇在提取系统的两相间的分配速 度不同，故提取是 albk 法的关键步骤之一。 (4)用计算机将标准、样品和
6、质控的分析顺 序随机化，以便明察各分析步骤出现任何系 统性漂移。经此改进的 albk 法精密度能达 到变异系数(cv)小于 1%，一次最多可分析 120 个试管，与决定性方法之间的偏差约 +1.6%。此法用 nist 的胆固醇一级标准物质 srm 911b 作标准。此法除用于 tc 测定外， 也用于 hdl-c 和 ldl-c 参考方法中的各项胆固 醇测定。 2.tg：tg 不是单一化合物，其测定比胆 固醇复杂得多。目前 cdc 的 tg 参考方法分 两部分，一部分为“净”tg 的化学测定法，另 一部分为游离甘油的同位素稀释气相色谱质 谱法。tg 化学法中用二氯甲烷提取 tg，用 硅酸吸附各种
7、邻羟基化合物和磷脂，用醇性 氢氧化钾水解 tg 为甘油，用高碘酸氧化甘 油，使生成的甲醛与变色酸反应后用比色法 测定。取样、提取和皂化中的各步液体转移 用稀释器操作，氧化、还原、显色和比色在使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 射分析部分都包括一套甘露醇标准，以便结 果出现问题时判断问题的来源。此法用 supelco 的三油酸甘油酯和 nist 的三软脂酸 甘油酯 标准物质 srm1595 的 21 混合物 作标准。此法的精密度为 2%6%。与决 定性方法的初步对比结果显示，此法的测定 值不仅是 tg，还包括(或部分包括)甘油二酯 和甘油一酯。 游离甘油的测定用 1，3-13c2 甘
8、油作 内标，用甲醇沉淀蛋白并提取甘油，用正己 烷洗去甲醇提取液中的少量脂质，将甲醇提 取液挥发干，经衍生后用气相色谱分离、质 谱检测甘油衍生物。此法是 1992 年建立的， 建立此法的原因是目前绝大多数 tg 常规分 析用酶法测总甘油，测游离甘油的试剂尚不 十分可靠，单独一个测净 tg 的参考方法难 以满足 tg 标准化的需要。 3.hdl-c 和 ldl-c：血清不同脂蛋白之间 没有明确的界限，其理化性质存在一定重叠， 准确测定他们的胆固醇含量十分困难。hdl- c 和 ldl-c 标准化首先要定义 hdl 和 ldl，其使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 中 hdl 和 ldl
9、 的定义。目前 cdc 的 hdl-c 和 ldl-c 参考方法为超速离心-化学沉淀法( 定 量法)。用超速离心法去除血清中密度小于 1.006 的组分(顶部组分，主要为乳糜微粒和 极低密度脂蛋白)，测定底部组分(bf)胆固醇 (bfc)，用肝素-锰离子试剂沉淀 bf 中的 ldl， 测定上清液中的 hdl-c，从 bfc 中减去 hdl-c 得 ldl-c。bfc 和 hdl-c 的测定均采用 albk 法。 ldl-c 中包括脂蛋白(a)和中间密度脂蛋白。 4.血清参考物质：cdc 血清参考物质一 直是 cdc 血脂参考系统的重要组成部分，绝 大多数准确性转移都是通过这些物质实现的。 cd
10、c 血清参考物质是经参考方法准确定值的 冰冻混合血清。这些物质已有几十年的应用 历史，而且应用范围广，是目前性质明确、 质量好的血脂分析物质。它们以往的应用主 要是 tc、tg 和 hdl-c。ldl-c 的标准化工作刚 刚开始，初步研究证明 ldl-c 对冰冻比其它 血脂指标敏感，血清冰冻后 ldl-c 下降，但 在参考方法中 ldl-c 下降发生在冰冻初期， 在以后的贮存中不再下降，说明冰冻血清用使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ ldl-c 参考方法的标准化是可行的。cdc 血清参考物质的制备过程大致如下。取来自 不同个体的血清，测定血脂后冰冻(-70) 保存，按血脂水平需要
11、将适当水平的血清化 冻后混合。高胆固醇血清用添加血清脂蛋白 (乙醇沉淀法制备)的方法制备，高 tg 血清添 加蛋黄提取物。混合血清滤过 0.22m 的滤 膜后分装于玻璃小瓶中，冰冻保存。随机取 一定数量的小瓶，用参考方法分析血脂 12 次，每次分析两瓶，每瓶分析两份，用所得 48 个结果检验均匀性和计算参考值。 三、cdc-nhlbi 血脂标准化计划 此计划始于 1957 年。建立此计划的最 初原因是当时许多血脂水平与冠心病关系研 究要求血脂分析的可靠性和实验室间分析结 果的可比性。到目前为止己为 100 多个美 国和国际心血管病研究提供血脂分析标准化。 除此之外，它还为血脂分析方法学研究实验
12、 室、质控调查计划中的参考实验室和血脂分 析仪器试剂生产厂家实验室中血脂分析的质 量提高与保证做出了突出贡献。此计划的目 前版本如下。 使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 参加流行病学和临床研究的实验室、公共卫 生实验室、质控调查计划和标准化活动中的 参考实验室；国际上参加重要流行病学和临 床研究的实验室。 2.标准化程序：分三阶段。第一阶段为 初步评价阶段，评价申请者的分析质量及所 用分析系统有无基质效应。申请者分析 cdc 提供的 6 种冰冻血清 6 次，每次每种血清 分析 2 份；收集 6 个病人血清，将每个病 人血清一分为二，一组在分析 cdc 血清的同 时分析血脂一次，每
13、种血清分析 2 份，另一 组冰冻后送 crmln 实验室。若申请者分析结 果满足此计划的分析质量标准，且无基质效 应，进入第二阶段。第二阶段为主要评价阶 段，评价申请者血脂分析的精密度和准确度 及维持分析质量的能力。申请者分析 cdc 提 供的 9 种冰冻血清和 2 种自己血清 8 次， 每次每种血清分析 2 份。第三阶段评价申请 者长期维持分析质量的能力。申请者每季度 分析 9 种 cdc 冰冻血清和 2 种自己血清 4 次，每次每种血清分析 2 份。进入此阶段的使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 发给证书，申请者每通过一次 季度考核，cdc 发给胶签一个，贴在证书的 相应位置。
14、证书每年换发一次。 四、crmln 建立此网络的背景是有些血脂分析系统 对冻冷血清参考材料有基质效应，它们的分 析质量不能通过 cdc 冰冷材料溯源到参考方 法上来。1988 年 cdc 建立 了 crmln，以便 于生产厂家和临床实验室直接用新鲜血清与 参考方法对比分析结果。目前此网络有美国 实验室 6 家，国际实验室 6 家，其中的一 家亚洲实验室为日本大阪癌症与心血管病医 学中心。网络实验室均采用 albk 法测定 tc，tg 和 hdl-c 多采用专用对比法，tg 为酶 法(包括游离甘油和总甘油两部分)，hdl-c 为 硫酸葡聚糖(50k mw)-镁离子沉淀法。网络 与实验室间准确性转移方案如下。 1.生产厂家：收集新鲜血清 4050 份， 将每份血清一分为二，一组 4贮存，在两 天内开始分析血脂，在至少 5 次分析(89 份血/次)中完成。另一组冰冻保存，与分析 结果一起送网络实验室。质量合格后 cdc 发使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http:/ 现漂移时，需重新进行对比。 2.临床实验室：收集至少 6 份新鲜血清， 将每种血清一分为二，一组分析血脂 3 次， 每次每种血清分析两份。另一组在收集后的 当天，送往网络实验室，否则冰冻后送网络 实验室。合格后发证书，有效期半年。 应该指出，目前此计划的
