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1、培养基制备技术南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心n教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生n实验课时：4学时n课程类型：专业实验课n课程要求：必修n每组人数：2人实验目的和要求n掌握常用培养基制备的基本过程。n熟悉常用培养基的种类及用途。n熟悉高压蒸汽灭菌的使用。实验内容n常用培养基（液体培养基、半固体培养基及固体培养基）制备。n高压蒸汽灭菌器使用。一、培养基的种类（按用途分类）n基础培养基n营养培养基n鉴别培养基n选择培养基n增菌培养基n厌氧培养基培养基的种类（按物理性状分类）n液体培养基：n不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。n半固体培养基：n含0.30.5琼脂。n用于观察细菌动力、保存
2、菌种。n固体培养基：平板、斜面。n含22.5琼脂。n平板：用于细菌的分离培养。n斜面：用于纯培养、保存菌种。二、培养基制备的一般程序调配溶化矫正pH过滤澄清分装灭菌检定保存二、培养基制备的一般程序n调配：按照培养基配方正确称取各种原料放于 搪瓷杯中。另用量筒量取所需蒸馏水量。n溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀， 加热溶解。n加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当 补水。n调pH值：用1N NaOH或1N HCl调至培养基规定的 pH值，用pH试纸对照。二、培养基制备的一般程序n分装加塞：注意不要污染棉塞。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。n灭菌：不同培养基采取不同灭菌
3、方法。n检定：培养基灭菌后必须在37下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。n保存：一般至4保存备用。 分装量的要求n液体培养基n分装量约为试管高度的1/41/3，加塞后灭菌直立；n半固体培养基n分装量为试管高度的1/41/3，加塞后灭菌趁热直立凝固；n斜面培养基n分装量约为试管高度的1/41/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面；灭菌后斜面摆放n斜面长度约为试管长度的2/3，且下端有1cm柱高；分装量的要求n琼脂平板：n先将灭菌琼脂融化后冷却至50左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4保存备用。分装包扎培养基灭菌n耐热培养基（如普通营养琼脂平板）：n常用高压蒸
4、汽灭菌，条件为103.43kPa，15-20min；含糖 培养基以68.95kPa，10-15min；n不耐热培养基：如糖类、明胶和牛乳等。n常用间歇蒸汽灭菌；n富含蛋白质的培养基：n用血清凝固器灭菌；n对含高营养不耐热培养基：如血清,细胞培养液等。n用滤过除菌。 三、高压蒸汽灭菌器的使用 n灭菌器内加入适量的水，将包扎好的拟灭菌物品放入其中。n盖好盖子，接通电源，进行加热。n排除高压锅内的冷空气：可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。三、高压蒸汽灭菌器的使用 n当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌
5、器内的温度为121，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。 n灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。高压蒸汽灭菌器使用注意事项n无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。高压蒸汽灭菌器使用注意事项n布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。n定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。
