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1、啤酒废酵母中生产SOD工艺啤酒废酵母中生产SOD工艺流程v 酵母泥 洗涤酵母培养基 灭菌 酵母菌复壮SOD纯化 SOD提取实验过程v一：废酵母的预处理v二：酵母的复壮培养v三：酵母中SOD的提取异丙醇法v四：SOD纯化酵母的预处理 (目的：得到较纯的酵母菌种）混匀v废酵母泥+等量无菌冰水 80100目筛 离心分离 摇匀静置34h沉淀并注入无菌冰水冰水漂洗12次 倾去上层悬浮液 直得上层清液无色无味,酵母呈纯白色酵母的复壮 指在菌种的生产性能尚未衰退前，进行纯种分离和生产性能的工作，以期菌种的生产性能逐步有所提高。 121灭菌20minv酵母培养基 恒温摇床培养（ 28140r/min2h) v
2、目的：扩大培养以得到含SOD湿菌体30%接种量接入经 过洗涤后的酵母酵母中SOD的提取异丙醇法v1g酵母湿细胞 浸泡120min， 加入9ml异丙醇 抽滤除去溶剂SOD 搅拌120min 加入3倍体积的50 粗提液 离心除去菌体 mol/l磷酸钾缓冲液 （PH7.0） 目的：利用异丙醇法酵母内SOD，并初步除去 细胞壁、细胞器等。 SOD纯化过程用2mol/l HCLvSOD粗液 调节PH至5.0 加入丙酮搅拌摇匀 离心（5000r/min) 上清液 调PH4.0 加入丙酮 二次沉淀离心（5000r/min) SOD纯化产品v目的：利用丙酮在不同PH之下对其他蛋白质和SOD的沉淀作用不同，得到SOD纯化产品注意事项v丙酮分级沉淀操作时，宜在410条件下进行，有 利于提高蛋白质的沉淀效果，保护酶活性。v提取SOD后酵母残渣及杂蛋白可考虑加工为饲料或 饲料蛋白添加剂，真正达到清洁生产的目的。v为降低成本，异丙醇均可考虑回收浓缩循环使用。vSOD活性测定采用改进的微量邻苯酚自氧化法。工艺优点v采用异丙醇破壁、丙酮二次纯化提取SOD生 产工艺，可得到SOD产品，且酶比活达 3050.2u/mg.胞内SOD纯化提取的老工艺一般 要经过细胞破碎、离心、盐析、透析、离子 交换层析、凝胶层析五至六个步骤，才能达 到酶比活大于3000u/mg的水平。因此该工艺 步骤少，设备少，操作简单，成本低。
