蛋白质的性质实验(2)

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1、实验2 蛋白质的性质实验（2）蛋白质等电点的测定和沉淀反应一、实验目的n1、了解蛋白质的两性解离性质。n2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。n3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。n4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。n5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。 二、 实验原理n蛋白质的两性解离性质n蛋白质等电点的概念n 测蛋白质溶解度最低时的溶液pH值为 其等电点n稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素n蛋白质沉淀反应的类型n蛋白质是由AA组成的高分子化合物，具有 许多游离的氨基、羧基、咪唑基、胍基、 巯基、酚基等，因此与AA一样，能象酸一 样解离，也能象碱一样解离，也是两性电 解质。蛋白质的两性电离性

2、质蛋白质的两性解离性质当溶液在某一 pH 值时，蛋白质所带正、负电荷 相等，即总净电荷为零，此时溶液的 pH 称该蛋 白质的等电点(isoelectric point)。蛋白质的等电点稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素蛋白质的变性蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素， 能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其 生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)(denaturation)。蛋白质的变性n变性

3、蛋白质通常都是固体状态物质，不溶于 水和其它溶剂，也不可能恢复原有蛋白质所 具有的性质。所以，蛋白质的变性通常都伴 随着不可逆沉淀。引起变性的主要因素是热 、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。三、实验操作 具体参见实验指导书n蛋白质的盐析 n重金属离子沉淀蛋白质n某些有机酸沉淀蛋白质n有机溶剂沉淀蛋白质 n乙醇引起的变性与沉淀 四、 结果处理用、+、+、+等符号表示各管的 混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电 点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的 等电点。五、 注意事项缓冲液的pH值必须准确。六、思考题n1、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素有哪些 ？n2、蛋白质变性与沉淀的关系。n3、解释蛋白质两性反应中颜色及沉淀变化 的原因。n4、该方法测定蛋白质等电点的原理是什么 ？