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1、 临床PCR实验室的设计 及质量管理体系的建广西区人民医院检验科覃桂芳临床基因扩增检验实验室设计n依据：卫卫生部颁发颁发 的临临床基因 扩扩增检验实验检验实验 室管理暂暂行办办法（卫卫医发发200210号）n医疗机构临床基因扩增管理法(卫办医政发2010194号)临床标本的接收 n通常的工作流程：标本采集 血清分离 编号 保存或检测n应在四个测定区域之外的地方或区域内 接收 n接收的标本应收集在原始容器中n在核酸提取时带入至标本制备区理想的PCR实验室设置A产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区产物分析区空气流向空气流向空气流向空
2、气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区理想的PCR实验室设置B门试剂准备区标本制备区扩增区产物分析区外走廊门门门门试剂准备区标本制备区扩增及产物 分析区外走廊门门门门AB临床PCR实验 室设计 的一般原则n各区独立n注意风向n因地制宜n方便工作“十六字口诀”产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区传递窗传递窗传递窗对“实验室质量管理”的理解n经验管理n质量检验管理n统计质量管理n全面质量管理： ISO9000、 ISO/IEC 15189-2007、 ISO/IEC17025-2005n标准化+全面质量管
3、理管理 “外部检查”、通过“认证”和“认可”“管理”的定义含 义义具 体 理 解管理的目的是有效实现目标，所有的管理行为，都是为实现 目标服务 的实现目标的手段是计划、组织、领导和控制管理的本质是协调管理的对象是以人为中心的组织资 源与职能活动管理就是通过计划、组织、领导和控制，协调以人为中 心的组织资源与职能，以有效实现目标的社会活动。 “理念”的转变n“质量管理是质量部门的职责” “质量改进是每个员工的职责”n“培训是一种负担” “培训是一种未来投资”n“尽量减少测量数据” “重要数据越多越好”“理念”的转变n“人是错误的来源” 操作中的错误追根寻源往往是管 理上的问题n“一些缺陷是主要的
4、，一些是次要的” “所有缺陷都是不允许的”n“质量改进是消耗时间” “质量改进是节省时间”实验室质量管理体系的建立n质量手册n质量体系程序文件n标准操作程序(相关记录表格)质量管理的内涵n写你所做的n做你所写的n记录你已做的n分析你已做的细节决定成败n看得见的n看不见的习惯决定成败n好习惯是生产力n习惯即命运n思维习惯与行为习惯n罗马不是一天建成的 (Rome was not built in a day )质量体系文件的编写 n实验室“质量体系”:是指实验室实施质量管理所需的组织结构、程序和资源 。n设计质量体系和编写质量体系文件的 基本原则:就是“最有效和符合实际”质量体系文件的三大特性
5、法规性、唯一性和适用性n法规性:是指文件一旦制定完成并批准实施，就必须认真执 行，按照相应的文件去完成日常检验工作，也就是前面所说 的做你所写的。并且文件的修改不能随意，只能按规定的程 序进行。n适用性:是指质量体系文件无统一格式；无标准文本；怎么 做怎么写，切合实际，具有可操作性，不拘一格。所有文件 的规定均应保证在临床实际检测工作中能完全做到。当发现 文件有不适合情况时，则应立即按规定程序对文件进行修改 。质量体系文件的三大特性n唯一性: （1）一个实验室只能有一个质量体系文件系统; （2）一项检验活动只能有唯一的操作程序； （3）一项规定只能有唯一的理解，不产生歧义; （4）只能使用文件
6、的有效版本，无效版本在实验室 的任何地方都不能使用。质量体系文件的三大特性n适用性:是指质量体系文件无统一格式；无标准文 本；怎么做怎么写，切合实际，具有可操作性，不 拘一格。所有文件的规定均应保证在临床实际检测 工作中能完全做到。当发现文件有不适合情况时， 则应立即按规定程序对文件进行修改。怎样编样编 写SOP ？XXX单位 XXX实验室XXX 标准操作程序编号： 启用日期： 版本： 第 页 共 页一目的： 二适用范围： 三职责或责任人： 四（方法原理） 五（检测设备和试剂） 六（所需的环境条件） 七操作步骤：123五、本操作程序变动程序： 六、相关的文件 七、相关的记录表格和报告编写人审核
7、人批准人SOP （5W和1H）n谁来做(Who)： 责任人n做什么(What)：适用范围n何时（When）：适用范围n何地（Where）：适用范围n为什么做（Why）：目的n如何做（How）：操作步骤实验室清洁SOP要点 n目的:为了使实验 室台面、地面和仪器设备 在使用后，处于洁净 和无感染性状态，以防 止出现因仪器设备 不洁影响检测 或仪器使用 寿命；防止因实验 室台面、地面和仪器设备 的生物传染危险性造成实验 室人员感染，以 及防止实验 室交叉污染而出现假阳性结果 等。 适用范围应 包括实验 室地面、台面和仪 器设备 等的清洁。 实验室清洁SOP要点n按实验 室台面、地面和仪器设备 分开
8、来 写各自的具体清洁方法，要具体而又有可 操作性 应规 定工作人员在清洁时 ，必须按 试剂 准备区标本制备区扩增(及产物分 析)区方向进行，不得逆行 规定每一工作区 域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得 混用 规定有潜在生物传染危险性材料溅出 时的消毒清洁方法生物安全防护护SOP要点n明确规定实验室工作人员在进行哪一类接触到有 潜在生物传染危险性的物品和材料时，应使用哪 类个体生物安全防护设备和用具 n制定实验室内锐器物品的使用规则 n制定发生意外如手指划破、血清溅入眼内等情况 下的处理程序 n明确有潜在生物传染危险性的废弃物（包括废弃 临床标本）拿出实验室前的消毒方法如高压或化 学消毒 仪仪
9、器设备设备 的维护维护 和校准SOP n责任人n维护和校准的基本方面：光路、滤光片 、波长、加热模块的清洁、具体的校准 点选择（如加样器的校准体积点选择、 温度计的校准温度点选择等）、维护和 校准的具体方法包括用具 n校准合格的判断标准 n维护和校准的间隔时间 仪仪器设备设备 的操作 SOPn按照每台仪器设备的使用说明书，将其 详细操作步骤包括开机关机次序、编程 、调试、运行、计算等按实际使用中的 先后顺序逐项列出，最后还应有使用的 注意事项。临临床标标本的采集、运送、接收和保存 SOPn特定标本采集的具体方法步骤 n明确规定标本的采集容器要求 n明确标本的采集量 n明确标本采集后送到实验室检
10、测所能容许的最大时间间隔，亦即标本采集后，应在多长时间内送至实验室 n明确标本采集后，在送至实验室检测前的保存方式和条件 临临床标标本的采集、运送、接收和保存 SOPn明确标本从采集处运送至实验室过程中所要求的运送 条件 n明确标本接收时，签收的程序、拒收的标准和标本唯 一编号的规则 n规定标本在实验室内的短期（应有具体时间）和长期 （应有具体时间）保存条件和要求 n制定保证标本安全，即如何防止标本丢失、掉换、变 质的措施 试剂和消耗品的质检 SOPn试剂质检 的基本方面，如试剂的抗干扰能力（主要 是针对提取试剂），即对溶血、脂血标本扩增抑制 作用的了解。可通过自行制备含已知量病毒核酸的不 同
11、程度溶血或脂血的标本进行质检。如为定量检测 试剂，还应包括检测的重复性、线性范围等的质检 ，通常使用2-3份样本进行检测即可。如为定性检测 试剂，则应重点考察测定下限，可用系列稀释的含已 知量靶核酸的血清标本进行 n核酸提取用离心管质检的基本方面 n带滤心吸头的质检主要是滤芯的密封性 项项目检测检测 、结结果判断、解释释和报报告 SOPn标本进入实验程序后的操作编号方式 n根据所用试剂盒确定的详细操作流程 n仪器编程及文件名的编写规则 n结果判读的流程和规则 n结果分析解释的流程 n结果报告流程 实验记录实验记录 及其管理 SOPn日常检验过程中应记录的基本内容的规定，如仪器设备 操作、维护和
12、校准过程及有关数据；检验试剂来源和批 号；检验标本的来源和唯一编号；试剂的配制；实验环 境条件的控制记录；实验室清洁的记录；质控的记录； 原始检测数据及其推导记录等 n对实验记录者的签名方式的规定和要求 n实验记录管理的基本方面：指定专门的管理人；有专门 的保存处如柜子等；记录的登记归档方法；记录的借阅 及销毁记录；记录保存的时间；电子记录的备份保存具 体方法及保存时间等 室内质质量控制 SOPn明确室内质控物（阳性和阴性）的来源 及浓度 n明确所选用的质控方法 n明确失控的判断标准或所采用的失控规 则 n明确失控后的分析及处理措施 阳性质控样本测定结果偏低或为阴性结果偏低 阴性临床标本 中无
13、强阳 性临床标本中 有较强阳性临床标本 中有阳性临床标本 全为阴性观察临床标本情况所用离 心管含 抑制物Taq酶 活性降 低核酸提 取试剂 效率低更换进 口离心 管更换 Taq酶 再检测更换核 酸提取 试剂所有标本重新检测核酸提 取中靶 核酸丢 失核酸提 取中抑 抑物残 留核酸提 取试剂 混入扩增仪 孔间温 度差异随机误差检测质控样本及35份已知 阳性样本质控样本 测定正常 且阳性样 本有些值 增加质控及已 知阳性样 本测定仍 异常按系统误 差途径分 析重新提取或已知浓度DNA在同 一孔内扩增结果正常结果仍低进行扩增 仪孔温度 校准后再 检测Taq酶或 逆转录酶 失活阴性质控样本测定为阳性临床
14、标本亦全为阳性临床标本中有阳性也有阴性扩增产物 “污染”试剂“污染”同时检测的标本情况扩增产物轻 度“污染”标本间交叉 “污染”35空管室 内静置58份水样 本检测试剂直接 扩增检测验证验证58份水样 本检测暂停日常检验，实 验室清洁、通风更换试剂措施有阳性，则确认有 实验室“污染”无阳性，说明为标 本交叉“污染”改善操作措施参加室间质量评价 SOPn明确规定室间质评样本的接收记录方式、保存条件 及实验编号规则 n明确室间质评样本的检测流程，要强调的是，室间 质评样本应以与临床标本相同的方式处理和检测 n明确室间质评样本的报告流程，即填写、复核和签 发如何进行，由谁负责 n明确对返回结果的分析
15、流程和责任人 n明确室间质评检测失败的原因分析流程 n明确如果测定准确性出现问题后，如何针对性采取 措施的流程 投诉处理 SOPn明确投拆第一接触人对投拆的处理流程， 即如何记录、如何针对相关投诉的进一步 处理程序、是否需要报告和如何报告、以 及如何向投拆人返回处理意见等。可将投 拆分为不同类如对检验结果正确性、服务 态度、报告单填写错误等分别编写处理流 程 n投拆有效时的如何改进和采取何种措施的 具体流程。应非常具体并具有可操作性 实验记录表格的设计存在问题n表格种类繁多n重复记录n表格无实用性，用于检查的痕迹很 重记录表格设计的基本原则n信息充分n简单明了n临床标本的检测信息能有机联系起来
16、n融入LIS系统？临床PCR检验流程记录表检验日期 检验项目： 扩增仪中保存文件名： 使用说明： 1本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向 移动。 2各项工作执行后，在相应叙述前的“”内打“”。 3本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。实验前准备 试剂在有效期内 扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 生物安全柜的滤膜在使用有效期内 消毒溶液在有效期内 冲眼器内无菌生理盐水在有效期内 离心管、带滤芯吸头已经过质检合格操作者： 试剂准备区（1区）实验前 ： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 冰箱温度：冷藏室（28） ； 冷冻室（182）
