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1、无菌培养系统下的松材线虫 消长动态和除菌效果研究许 刚指导老师：张建平生物与环境工程学院松材线虫病是松树病虫害中最严重的疾 病，细菌在松材线虫的致病机制起着重 要的作用。为了对这一结果进行研究， 我们需要获得大量的无菌松材线虫，但 是要获得无菌松材线虫非常困难，导师 张建平创制了一种无菌松材线虫的培养 装置。课题的研究背景 这个装置的设计是用木屑+选择 性培养基(孟加拉红)，但是这个 装置的实验效果还需要优化。我 们做这个实验的目的就是对这个 装置培养效果做更好的优化，使 得优化后的培养基达到产量最高 ，并且达到无菌的效果。具体实验方案v1、真菌的培养时间对松材线虫生长 数量的影响。v2、松材
2、线虫本身的培养时间对松材 线虫带菌状况的影响，如：松材线 虫体内是否带菌的研究v3、松材线虫本身的培养时间对松材 线虫生长数量的影响1、真菌的培养时间对松材线虫培养产量的影响真菌培养 时间234567平均1286394968423326313693283110126平均2415627101023326465343283110126松材线虫的数量随着松枯稍孢菌的培养时间增 加而下降 只是在松枯稍孢菌培养第3天时，松材线虫数量 迅速减少的结果与上述趋势有异，可能是实 验误差。2、松材线虫的培养时间对松材线虫带菌数量的 影响松材线虫 培养时间357911131517取样梯度10-310-210-21
3、0-310-410-410-410-3菌落数2.7125156.7128.713854.3227.3125含菌量2.71031.251041.5671041.2871051.381065.431052.2731061.25105每条松材 线虫带菌 量（cfu）2.712.515.67128.713805432273125注：菌落数采用最后一次观察的培养皿中的菌落 数的平均值松材线虫的带菌状况与时间关系是：先逐渐上升，第11 -15天之间带菌量趋于稳定状态，然后第17天的带菌量 下降。注：每条松材线虫带菌量（cfu）数据取对数后作图3、松材线虫体内带菌状况结果将培养了不同时间的松材线虫研磨后分梯
4、度接入肉汤 培养基中，观察肉汤培养基的浑浊情况，得到数据如下， 数据表示培养后开始浑浊的天数，11可以判断为不浑浊 。编编号 培养 时间时间ABC1231231233116 118 11 11 11 1110 5222 11 11 11222 7 11 11 11333 11 11 11 9121 11 11 11 11 11 11 11222 112 11 11 11 11 1322 11 115 11 11 114 15 11 11 11 11 11 11 11 11 11 17 11 11 11 11 11 1110 11 11培养液不混浊表示样品不带菌，即松材线虫体内是不带 菌的，松材
5、线虫体表带的菌，在研磨之前通过加双氧水消毒 ，已经除去了。假如松材线虫体内带菌的话，那么，所有的 测量样本最终结果都应该显示浑浊的，可是结果中大部分都 是不浑浊的。因此通过这个实验，我们得出结论：用松材线 虫无菌培养装置培养的松材线虫体内不带菌，可以获得真正 的无菌松材线虫，但仍需要谨慎的除菌操作。需长时间才浑 浊的样品可能是由于操作时出现的误差。4、松材线虫本身的培养时间对松材线虫生长数量的影响根据松材线虫在木屑中的不同的生长时间，经过分离， 对松材线虫的生长数量进行测量、计数。接种培养时间57911131517单个培养装置的松材 线虫数量（条）26041315204319226687293
6、531228014341通过图可以分析出松材线虫不同的培养时间对松材线虫生 长状况的影响，虽然略显波动，但是基本趋势还是下降的 ，其中第9天线虫量为最多，这可能是由于松材线虫无菌培 养装置中营养物含量下降造成的。1、在松材线虫无菌培养装置中，随着培养时间的延长， 松材线虫所带细菌越多，但虫体内部都可达到无菌的 程度，通过以H2O2消毒处理可获得完全的无菌松材线 虫。 2、在松材线虫无菌培养装置中，随着培养时间的延长， 松材线虫所带细菌越多，每条松材线虫可达约34条 ，但虫体内部都可达到无菌的程度，通过以H2O2消毒 处理可获得完全的无菌松材线虫。 3、在25培养温度下，松材线虫培养9天，数量最多。 4、在25培养温度下，松材线虫的食料真菌松枯稍孢菌 培养时间3天，松材线虫的产量最高。结 论：
