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1、实 验 一植物组织中总糖及还原糖的测 定3,5-二硝基水杨酸比色法 学时：31、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。一、实验目的：1、还原糖：指含有游离的半缩醛(酮)基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽 糖、乳糖等）；多糖为非还原糖。2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖 和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖 进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 （还原糖以葡萄糖含量计）。 二、实验原理:2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应： 在碱性条件下，还
2、原糖与DNS试剂反应，还原糖被氧化成糖酸及其它产物， DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色,A540)3,5-二硝基水杨酸(DNS)3、在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 1、实验材料：苹果（约0.5 g）2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。3、试剂：（1）1 mg/mL葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）
3、试剂(碱性) （3）6M HCl和6M NaOH 三、实验材料、仪器和试剂：四、实验步骤： 1、葡萄糖标准曲线的绘制2、还原糖的提取3、样品含糖量的测定:1、葡萄糖标准曲线的绘制:取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标， 对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。管 号葡萄糖 标标准液 mL蒸馏馏水 mLDNS mL沸水 浴光密度值值 OD540nm葡萄糖含 量（g）0(参比溶液)011.05min 冷却0.114010.20.820020.40.640030.60.460040.80.280051.0010001.0ml1还原糖提取液蒸馏水mL42、还原糖的提取 取0.5g样品于研钵中，加水2-3ml，充分研磨。 用2-3ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于 10 ml)，转入试管中。 在50水浴中恒温20分钟，冷却后于3000转 离心5分钟。 取上清转入试管中，用蒸馏水定容20毫升，待测。3、样品含糖量的测定:取提取液1.0ml，按上表操作。还原糖含量(g/ g )=五、计算： 还原糖含量1(g) 样液总体积测定用样品液体积样品鲜重(g)总糖含量(g/ g )=水解后还原糖含量 (g) 样液总体积0.9测定用样品液体积样品鲜重(g)六、思考题：六、思考题： 1、何谓还原糖？2、本实验的注意事项?
