药物的含量测定

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1、Microsoft第六章 药物的含量测定药药分 制药药2011第一节节 概述药物的含量测定评价药物质量的主要指标。运 用化学、物理或生物化学的方法 和技术，测定药物中主要有效成 分的含量。定 义药物的含量测定化学、物理学、生物学方法方 法 利用某些生物学特性 或特殊反应来定性、 定量化学反应如光吸收 特性、浊 度药物的含量测定基于化学或物理学 原理的含量测定。分 两 类 基于生物学原理的 效价测定。基 础生物检定法，微生 物检定法，酶法。目 标含量测定。含量方法要求n化学原料药（API)：根据药物的化学结构、理 化性质等特点综合考虑适宜的含量测定法。选 用的含量测定法应能准确测试有效成分的含量

2、 ，其准确度和精密度均高。n制剂：可能时应选用与原料药相同的测定 方法，共存药物、辅料、附加剂有干扰时 ，可考虑增加预处理或改进方法,但专属 性要强。含量表示方法（一）原料药含量的表示法 原料药一般以百分含量表示，指样品中被测成分（一般为活 性物质）的百分含量。一般按干燥品计算。 药典凡例规定： “按干燥品（或无水物，或无溶剂）计算 ”时，除另有规定外，应取未经干燥（或未去水，或未去 溶剂）的供试品进行试验，并将计算中的取用量按检查项 下测得的干燥失重（或水分，或溶剂）扣除。因此：含量%（干燥品计）=直接测得量（1-干燥失重）（二）药物制剂含量的表示法一般以相当于标示量的百分数表示，指一个制剂

3、单位中平均含有的药物成分为制剂标准的“规格”项规定量的百分数。如：对乙酰氨基酚片，规格0.5g，经含量测定测得平均每片含对乙酰氨基酚0.45g，则标示量为90%。固体制剂含量测定结果的计算 %100%= 标示量每片实测含量 含量100平均片重= 标示量供试品重测得量标示量平均片重供试品重 测得量100原料药制剂物质的量效价 生物学法（基于生物学原理）药物含量测定方法化学法（基于化学原理） 容量分析法、重量分析仪器分析法（基于物理学原理） 光谱法、色谱法具体方法n容量分析法：包括重量分析法、滴定法（直接 、间接滴定法）n光谱分析法：UV、IR、n色谱分析法：HPLC、GC第二节、容量分析法为经典

4、方法，原料药分析常采用。 常产生滴定误差，如指示剂和仪器容量特点：n1、快速,准确（RSD103 ，n越大柱效高进样tRh0.5hWh/2Wt7.分离度R2（tR2tR1）/（W1W2）pR1.5 认为分离完全W1W2TR2-tR1（二）基本原理待分离物质在两相间进行分配时，在固定相中溶解度较 小的组分，在色谱柱中向前迁移速度较快；在固定相中溶 解度较大的组分，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达 到分离的目的。依固定相与流动相极性的不同，分为正相色谱和反相色谱 1.正相色谱法 流动相极性小于固定相 一般用极性物质作固定相，非极性溶剂(如苯、正己烷等)作 流动相，主要用于分离极性化合物，极性小的

5、组分先流出 ，极性大的组分后流出。 2.反相色谱法 流动相极性大于固定相 一般用非极性物质作固定相，极性溶剂(如水、甲醇、己腈 等)作流动相，主要用于分离非极性或弱极性化合物，极 性大的组分先流出，极性小的组分后流出。（三）固定相和流动相1.固定相 常用化学键合相，分极性和非极性键合相，如 十八烷基硅烷键合硅胶（C18或ODS）和辛基硅烷键合硅 胶（C8）为最常用的非极性键合相，用于反相色谱法；氨基和氰基硅烷键合相为常用的极性键合相，用于 正相色谱法。 2.流动相 有机溶剂+水混合 一般为色谱纯试剂，经0.45um的微孔滤膜过滤，需脱气处理 （四）仪器的基本结构 1.色谱柱柱管-不锈钢，填充硅

6、胶和化 学键合固定相 内径4.6mm 长15cm、20cm和25cm的三种 ， 如安捷伦色谱柱、 Waters色 谱柱、迪马色谱柱等。 2.检测器常用紫外检测器 其次有二极管阵列检测器(DAD) 荧光检测器 示差折光检测器 蒸发光散射检侧器电化学检测器和质谱检测器等 （五） 系统适用性试验定义：指用规定的对照品对色谱系统进行试验， 应符合要求。 包括 柱温、柱长、固定相、流动相； 理论板数：说明分离过程，色谱柱的塔板数越多，柱效越高； 分离度：应大于1.5； 重复性：相对标准偏差应不大于2.0%； 等；（六）在杂质检查和含量测定中的应用1.内标标法（加校正因子）方法： 内标标物+对对照品对对照

7、溶液，进样进样 ，测测定，计计算校 正因子。RRss CACAf=校正因子CR对照品浓度As内标物峰面积CS内标物浓度 AR对照品峰面积 供试试品+内标标供试试品溶液，进样进样 ，测测定供试试品和 内标标物质质的峰面积积或峰高，计计算含量f= AS / CS Ax /CxCx=f Ax AS / CSCx样品浓度Ax样品峰面积例.HPLC法测定盐酸阿夫唑嗪片（规格：5mg）的含量： 取盐酸特拉唑嗪约20mg，称定，置100ml量瓶中，加流 动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得内标溶液。取盐酸 阿夫唑嗪对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中， 加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液 ，精

8、密取该储备液1ml，置100ml量瓶中，精密加内标 溶液5ml，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照 品溶液；另取本品20片，精密称定，研细，精密称细 粉适量（约相当于阿夫唑嗪10mg），置100ml量瓶中， 加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液 10ml，置100ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用流动 相溶解并稀释至刻度，摇匀，得样品溶液。分别精密 取对照品溶液和样品溶液各20l注入液相色谱仪，记 录色谱图，按内标法以峰面积计算含量。操作：对照品取样为10.1mg，20片重为1.6020g，取 样细粉称重158.2mg，测得对照品溶液中盐酸阿夫 唑嗪和内标的峰面积分别为5470

9、124和6126012， 样品溶液中阿夫唑嗪和内标的峰面积分别为 5219986和61198978，计算本品的含量。 解： 对照品浓度：0.0101mg/ml,内标浓度：0.01mg/mg f=(AS/CS)/(AR/CR)=(6126012/0.01)/(5470124/0.0101)=1.13 CX=fAX/(AS/CS)=1.135219986/(6119898/0.0100)=0.009735mg/ml=（0.00973510010/158.2)（1.6020/20） /5100%=98.58% 100平均片重= 标示量供试品重测得量含量 标示量平均片重供试品重 测得量100例.HPL

10、C法测定单硝酸异山梨酯注射液（规格：5ml:20mg ）的含量：取间三甲氧基苯约20mg，称定，置100ml量 瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得内标溶 液。取单硝酸异山梨酯对照品约8mg，精密称定，置 100ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用流动相溶解并 稀释至刻度，摇匀，取20l注入液相色谱仪，记录色 谱图；另取本品2ml，同法测定，按内标法以峰面积计 算含量。已知：对照品取样为8.1mg，测得对照品溶液 中单硝酸异山梨酯和内标的峰面积分别为5467824和 6125843，样品溶液中单硝酸异山梨酯和内标的峰面积 分别为5221345和6122845，计算本品的含量。解：f=(AS

11、/CS)/( AR/CR)=(6125843/0.01)/(5467824/0.081)=9.0 7CX=fAX/(AS/CS)=9.075221345/(612284 5/0.01)=0.07735mg/ml100装量= 标示量取样量测得量含量 标示量装量取样量 测得量100=(0.7735100/5)2/20100%=96.68%2.外标法对照液（R）： AR CR 供试液（X）： AX CXCX CR AX ARCXCR AX AR要求：进样量准确、操作条件稳定A总=Ai=A1+A2+An(%)=Ai / A总100%例题7 用气相色谱法检查大豆油的脂肪 酸组成，相应于棕榈酸、硬酯酸、油

12、酸、亚油酸 和亚麻酸的峰面积分别为129758、43286、 296522、654868、92570，按峰面积归一化法， 计算上述脂肪酸的百分含量。 3、面积归一化法二、气相色谱法1.分离原理注入进样口的样品经加热气化后，被载气带入色谱柱 ，由于其分配系数的不同进行分离，各组分先后进入检测 器，信号记录仪、积分仪和数据处理系统记录色谱信号。 分配系数小的组分先流出，分配系数大的组分后流出。2.色谱仪的基本结构由载气源、进样器、色 谱柱、柱温箱、检测器和 数据处理系统组成 .载气（流动相）： 如氦、氮和氢等.进样器：直接进样或顶空进样微量注射器. 固定相和载体 色谱柱为填充柱或毛细管柱 常用的固

13、定液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚 硅氧烷、聚乙二醇等。毛细管柱 填充柱. 检测器 火焰离子化检测器（FID)、 热导检测器(TCD)、 氮磷检测器（NPD)、 火焰光度检测器(FPD)、 电子捕获检测器(ECD)、 质谱检测器(MS) . .色谱系统适用性和含量色谱系统适用性和含量 测定中的应用测定中的应用 同高效液相色谱法同高效液相色谱法第五节第五节 药品含量测定方法验证药品含量测定方法验证1 专属性2 线性及其范围3 精密度4 准确度5 检测限6 定量限7 耐用性一、专属性(Specificity)v 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下 采用的方法能准确测定出被

14、测物的特性。 v 分析复杂样品混合物时衡量其是否受到干扰的一种方法。A- 对照品B- 样 品C- 阴 性二、线性与范围(Linearity And Range)v线性：在设计的范围内，测试结果与被测物浓度呈正比关 系的程度。 v Y=a+bx （r0.999)范围：达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。eg.原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的80% 120%；制剂含量均匀度检查，范围应为测试浓度的70%130%， 根据剂型特点，如气雾剂、喷雾剂，范围可适当放宽；溶出度 或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的20%1、定义：在规定的测试条件下,同一个均匀

15、样品 经多次测定所得结果彼此符合程度。三、精密度2、表示方法：偏差（d）：标准偏差(SD):相对标准偏差(RSD):重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度至少用9次测定结果评价：制备三个不同浓度样品，每一浓度样品测三次。中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度目的：考察随机变动因素的影响，如日期、分析人员重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验，结果应记载在起草说明中。四、准确度1、定义：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。2、测定法：用百分回收率（R）表示，测定回 收率的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法” （1）回收试验法 空白B+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。R = 测得量 加入量100%（2）加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。R = 测得量-本底量加入量100%方法回收率通常要求达到目视法 信噪比法 S/N=3五、检测限(Limit of Detection, LOD)药物能被检出的最低浓度(g/ml)六、定量限(Limit of Quantitation, LOQ)药物能被定量测定的最低浓度(g/ml)信噪比法 S/N=10影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商