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1、实验七 微生物的分离纯化与 平板菌落计数（一）培养基的配制和灭菌一、目的要求 n 1.了解培养基配制原理，掌握其制备过 程。 n 2了解高压蒸汽灭菌器的原理，掌握 使用方法。 二、基本原理1,培养基n培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖和积累代谢产 物所需要的营养基质。n其中含有碳源、氮源、能源,无机盐、生长因子以及水分 。n微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内 才能表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将 培养基调到一定pH值范围。n培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其 组成可分合成培养基和天然培养基和半合成培养基。按 其物理状态可分固体培养基，液体培养基和半固体
2、培养 基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别 培养基等。 2,灭菌n 培养基配制后还必须进行灭菌。灭菌和消毒是 二个不同含义的名词。n消毒是指消灭病原菌或有害微生物，而灭菌则是杀死 或消灭一定环境中的所有微生物。 n消毒与灭菌的方法很多，但总的可分为物理法与 化学法两大类。物理法包括加热灭菌（干热灭菌 与湿热灭菌），过滤灭菌、紫外线灭菌等。化学 方法主要是利用有机或无机的化学药品对实验室 用具和其它物体表面进行灭菌与消毒。三、器材 n 药品：按培养基配方（见附录）把需药 品一一排好。1mol/L NaOH,1mol/L HCl。n 其它：pH试纸；试管；三角瓶；量杯 ；量筒；漏斗；电
3、炉；天平；棉花；纱布 ；牛皮纸；细绳子等及消毒灭菌用高压蒸 汽灭菌锅。四、操作步骤n1.称量：按配方准确称量并放入量杯中，（有些 药品需按配方说明先后加入）。 n2.溶化：在量杯中加入所需水量（一般用自来水 ，特殊需用蒸馏水），搅匀，加热溶解。n3.补水:按配方定容至所需体积。 n4.调pH值：用pH试纸测pH，并用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节至所需pH范围.n5.过滤：一般不过滤，特殊情况下需过滤，可用 滤纸，纱布或脱脂棉等。 n 6.分装：根据不同的需要，可将制好的培养基分装 入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。棉塞 的总长度的3/5应在口内，2/5口外。注意不要使
4、培 养基沾染在管（瓶）口上以免浸湿棉塞，引起污染 。 n（1）液体：分装高度以试管高度的1/4左右n（2）固体：分装试管，其量为管高的1/5，灭菌后 制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积 之一半为宜。 n（3）半固体：分装试管一般以试管高度的1/3为宜 ，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。7.灭菌 n培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸 ，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定 进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成 分。n培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时 ，无菌者方可使用，在实验室里用得最多的加热 灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。目的都是使 细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的.n一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃 器皿常用干热灭菌。 各组需要配置的培养基和需要灭 菌的玻璃器皿n1,干热灭菌n包扎培养皿14付(2包),1ml吸管6支至烘箱中 进行干热灭菌(1600C 2h);n2,制备培养基n(1)1-4组制备普通营养琼脂培养基,每组 300ml分装于10支试管(灭菌后摆斜面)及2个 锥形瓶;n(2)5-8组制备EMB培养基,每组300ml分装于 2个锥形瓶,另10支9ml试管无菌水.五、结果与讨论 1.在一般情况下为什么试管或三角瓶培 养基要用棉花塞而不用软木塞或橡皮塞？ n 2.高压蒸汽灭菌过程中为什么一定要排 放锅内的冷空气？
