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1、 21紫外吸收检测器的优点： 灵敏度高；线性范围宽，可同时检测主要成分及痕量成分；流通池可做的很小(1mm 10mm ，容积 8L)；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。紫外吸收检测器的缺点：只有有较强吸收的分子才能进行紫外检测。流动相选择受到限制。在检测波长下，具有一定吸收的溶剂不能用作流动相。 紫外检测器是高效液相色谱仪使用最广泛的一种检测器优点：通用性好。只要折光率与流动相不同的组分都能进行检测，在紫外吸收检测器上不能检测的组分，不需要经过衍生 化，就能直接进行测量。不破坏样品。缺点：灵敏度低：流动相和组分之间的折光率之差有限，不适合痕量分析。折光率强烈地
2、依赖于环境温度，微小的温度波动即可造成基线漂移。检测器的恒温精度应高于0.001。不能用于梯度洗脱。优点：灵敏度极高：比紫外约高两个数量级，最灵敏液相色谱检测器。适合于痕量分析受外界条件(如温度、压力)的影响较小。流动相溶剂不发射荧光，也适用于梯度洗脱。缺点：不是通用型检测器。不是所有化合物在选择的条件下都能发生荧光。对荧光测量中的一些干扰，如背景荧光和淬灭效应等非常敏感。在进行定量分析时，应验证这些干扰是否存在，以及对样品测定的影响程度。b. 示差折光检测器除紫外检测器之外应用最多的检测器。可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比。结构形式偏转式反射式干涉型c.
3、荧光检测器结构：d 蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测Xs Sm n弱224.3 高效液相色谱主要分离方法及基本原理 液-固吸附色谱液-液分配色谱 化学键合相色谱 离子交换色谱 离子色谱 离子对色谱 排阻色谱 亲和色谱液相色谱4.3.1 液-固色谱一、基本原理 溶质分子(X)与溶剂分子(S)在固定相上的竞争吸附： Xm + nSs = Xs + nSm 下标m、s分别表示流动相和固定相。达到吸附平衡时，吸附平衡常数（K）可表示为：K = X m Ss n K分配系数!固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定
4、相吸附剂上的吸附与解吸。在固定相表面发生的竞争作用： (1)组分和流动相分子对吸附剂表面活性中心的竞争(2)各类组分分子，即各种官能团，对活性中心的竞争竞争能力大小,决定了它们的保留值大小。竞争能力大，保留值大。样品中各组分只是烃类取代基不同，则k相差小，分离困难。样品中的组分含极性不同的取代基，或含有数目不等的极性基团，则k相差大，分离容易。强极性组分；吸附力大，保留时间太长适合：非极性、中等极性组分分离三、流动相 不同极性的溶剂 基本原则： 极性大的试样：用极性较强的流动相 极性小的试样：用低极性流动相。 常用溶剂的极性顺序乙 腈甲醇乙 醇丙 醇丙 酮二 氧 六 环四 氢 呋 喃甲 乙 酮
5、甲 强水 酰 胺短极性氟 石 环 二 苯 溴 二 异 正 代 油 己 己 硫 四 乙 氯 氯 丙 乙 乙 丁 烷 醚 烷 烷 化 氯 烷 仿 甲 醚 醚 酸 醇 碳 化 烷 乙 碳 酯长组分保留时间 复杂样品：二元或多元或梯度正相色谱：流动相的极性小于固定液的极性 反相色谱：流动相的极性大于固定液的极性正相与反相的出峰顺序？ 正相色谱：弱极性组分先出 反相色谱：强极性组分先出 不足： 固定液流失但K值大，溶质分子在固定相上吸附作用强，分配系 数也大，保留时间长。 吸附平衡常数K可以由吸附等温线数据求出。二、固定相 按其性质可分为： 极性： 硅胶、氧化铝、氧化镁、 硅酸镁、分子筛及 聚酰胺等 非
6、极性：最常见的是活性碳。 酸性吸附剂：硅胶和硅酸镁等 极性吸附剂： 适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺 碱性吸附剂：氧化铝、氧化镁和聚酰胺等 适于分离酸性溶质，如酚、羧酸衍生物最常用的吸附剂是硅胶 结构类型：全多孔型和薄壳型。4.3.2 液-液分配色谱固定相与流动相互不相溶的液体。基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。 固定相：涂渍固定液。 流动相：与固定相极性相反液体234.3.3 化学键合相色谱法 采用化学键合固定相的液相色谱 一 、化学键合相 化学键合相：通过化学反应将有机分子键合在载体表 面所形成的柱填充剂。 载体：硅胶，表面硅醇基与合适的有机化合物反应。 化学键合相的制备方法： 1硅酯化
7、 使醇与硅醇基发生酯化反应特点：对热不稳定，遇水、酸等强极性溶剂会发生水 解，使酯链断裂 仅适用以干燥的无水乙醇为流动相的体系流动相：非极性或极性小的溶剂（如烃类）中加入适 量的极性溶剂（如氯仿、醇、乙腈等） 分离对象：极性化合物。 组分的分配比k值随其极性的增加而增大，但随流 动相极性的增加而降低。 主要用于分离异构体、极性不同的化合物。 三反相健合相色谱法 固定相：极性较小的键合固定相 流动相：极性较强的溶剂，如甲醇、乙睛-水、水和无 机盐的缓冲溶液等。 分离对象：低极性化合物 反相键合相色谱法柱效高，能获得无拖尾色谱峰2氯化 先氯化，再与有机锂或格氏试剂反应特点：热稳定性和抗水解能力都好
8、 3硅烷化 用有机氯硅烷与硅醇基发生反应在PH 28.5范围内对水稳定 二、正相键合相色谱法 极性键合相，非极性流动相。 固定相：极性的有机基团，CN、NH2双羟基等键合 在硅胶表面。四、分离机理 吸附和分配两种机理兼有 反相键合相色谱的分离机理 分配理论： 吸附理论：疏溶剂作用理论 “分子毛”，有较强的疏水特性 分离过程中： 分子中的非极性部分与固定 相表面上的疏水烷基产生缔合 作用，保留在固定相中 分子中的极性部分受到极性 流动相的作用，促使它离开固 定相，并减小其保留作用。 两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保留行为。4.3.4 离子交换色谱法 一、分离原理R组分离子与离子交换树脂进行
9、离子交换，依靠它们与交换树脂的离子亲合力的大小的差别而达到分离。阳离子交换：R SO3-H+ + M+ R SO3-M+ + H+阴离子交换：R NR3+Cl- + X- R NR3+X- + Cl-一般形式： A + B R B + A达平衡时，平衡常数（离子交换反应的选择系数）：R BA BR AK B/A = KB/A越大，越易保留而难于洗脱。 B离子电荷越大，水合离子半径越小，KB/A值就越大。 磺酸型阳离子交换树脂 一价阳离子的KB/A值顺序： Cs+Rb+ K+NH4+ Na+H+Li+ 二价阳离子的KB/A值顺序： Ba2+Pb2+ Sr2+Ca2+ Cd2+Cu2+ 季胺型阴离
10、子交换树脂 一价阴离子的KB/A值顺序： ClO4- I- HSO4- SCN- NO3- Br- NO2- CN- Cl- BrO3- OH- HCO3- H2PO4- IO3- CH3COO- F-迁到更高能级上的过程。激发电位：将原子中的一个外层E3原子发射光谱 25二、分离类型选择反相键合相色谱第5章 原子发射光谱法 5.1 概述一、原子发射光谱法： 根据物质的气态原子被激发时发射的特征线状光谱 而建立的分析方法。 强度：定量分析 波长：定性分析 二、分析过程 1、试样 蒸发 激发 产生发射（光） 2、分光，形成光谱 3、检测记录光谱 4、根据光谱进行定性、定量分析三、特点 1、选择性
11、好：每种元素都有不受其它元素干扰的特征谱线.5.2 基本原理 一、原子发射光谱的产生固态、液体态 蒸发 气态 样品 原子激发态原子、离子激发2、多元素检测：元素同时发射光谱，可同时测定 3、广普性：气、固、液样均可测定 4、灵敏度高：g/ml，可达10-310-4g/ml。5、分析速度快：几分钟可完成多元素分析，炼钢炉前分析，几分钟即可完成，与计算机技术结合，自动配料。缺点：非金属元素不能检测或灵敏度低。共振线：原子由激发态到基态的跃迁 第一共振线：原子由第 一激发态到基态的跃迁 最易发生，能量最小 原子谱线表： I 原子发射的谱线。 II 一次电离离子发射的谱线。 III 二次电离离子发射的
12、谱线。 Mg：I 285.21 nm ；II 280.27 nm。激发：原子中外层电子从基态跃 原子线 离子线基态或较低 能级电子从基态激发到激发态所需的 能量，用“E”表示，单位：eV 电离：把原子中的外层电子激发至无穷远处，使原子 成为带正电荷的离子，一次电离、二次电离。 电离电位：使原子电离所需的最小能量，用“U”表示， 单位：eV 原子线：激发态的原子发射的谱线 离子线：激发态的离子发射的谱线设激发态能级为E2，低能级为E1，普朗克公式：E=E2-E1=h=hc/ IE2 E1E E E0 结论： 原子能级不连续，原子光谱为线状光谱 元素不同，谱线波长不同(特征光谱)定性分析基础 原子
13、数目多，谱线强度大定量分析基础。 同种元素的原子，原子能级很多，得到一系列不同波 长的光谱或光谱组，按一定顺序排列，强度比例一定I ji = ji hg j E j /kT= eN j /Ng 0g j E /kTN = N eg 0 I ji = A ji N 0 h ji g j E / kT eI = a C b26j二、谱线强度 单位时间内从光源辐射出的某波长的光能的多少。设：N0为基态原子数Nj为处在能级为Ej的原子数 Nji为由能级Ej跃迁到Ei的原子数，Ej Ei 每一个光子的能量为：=E=Ej-Ei=h=hc/ 光强度 N ji = Aji N （Aji: Ej能级上的原子向E
14、i跃迁的机率） I ji = A ji N j h j在弧焰中，热力学平衡体系，N0、Nj处于平衡，波兹曼公式：0gj、g0：激发态、基态能级简并度（统计权重）Ej：激发电位；k：玻兹曼常数；T：热力学温度j j 0 原子线谱线强度：g 0 g j g0 E j / kT eI ji = Aji N 0 h ji 原子内部常数：Aji、ji、gj、g0、E为原子本身特性外界影响： T、N0 影响谱线强度的因素：1、激发电位Ej：Iji与Ej成负指数关系在N0、T一定的情况下，Ej增大， Iji下降2、跃迁几率Aji ：Aji增大，Iji增大3、统计权重gj/g0：Iji与gj/g0成正比4 、激发温度（T）：从公式看，T升高，Iji 增大（一 定范围内正确）三、谱线强度与试样中元素浓度的关系光原 子样 品单位时间内进入弧焰的原子数：M 扩散、对流作用离开弧焰数： MM=M C：样品浓度， M=C （：常数，M与C成正比）N：弧焰内原子数 M=N （：常数） C=N 又 弧焰内原子主要以基态存在，激发态寿命很短NN0 C=N0 C N 0 =原因： 温度升高到电离发生时，中性原子减少，Iji降低，同时Iji增大。代入谱线强度公式可以得到：IjiC I
