临床输血与检验2012第二部分

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1、临床输血与检验张循善 2015.3医疗机构输血科（血库）承担工作和研究领域n免疫血液学 实验室 血液相容性试验 血型 不合新生儿溶血病实验室诊断 输血不良反 应研究n成分输血与自身输血 n血液治疗 血液成分单采和置换术（造血 干细胞移植） 细胞治疗n临床输血质量管理免疫血液学 血液相容性试验 nABO血型鉴定 RhD鉴定 n红细胞意外抗体筛查和鉴定n交叉配血试验AABB Requirements for Pretransfusion Testing1.Positive identification of recipient and recipient sample2.ABO group and

2、 Rh typing of recipient and donor blood.3.Red cell antibody detection tests for clinically significant antibodies using recipients serum or plasma.4.Comparison of current findings of recipients sample with record of previous patient results.5.Selection of components of ABO group and Rh type appropri

3、ate for the recipient.6.Performance of a serologic or computer crossmatch.7.Labeling of products with the recipients identifying information.血型鉴定试验ABO血型鉴定（试管法）n原理红细胞膜 上只有B抗原只有A抗原A、B抗原均有A、B抗原均无A型B型AB型O型有A抗体有B抗体无A、B抗体有A、B抗体血清中ABO血型鉴定n正定型：被检者红细胞与ABO标准血清n反定型：被检者血清或血浆与ABO试剂红 细胞正定型试验方法（试管法）（1）取试管2支分别标上A、B

4、字样（2）向A管滴加抗A标准血清1滴，向B管滴加抗B标准血 清1滴（3）向A、B管各滴加5的待检红细胞悬液各1滴。（4)摇匀，后以1000rpm离心1min，或按说明书要求操作。（5）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集现象。ABOABO血型鉴定卡式法血型鉴定卡式法反定型试验方法（试管法）（1）取试管3支分别标上A、B、O字样（2）向A、B、O三管各滴加待检血清（浆）1滴（3）向A管滴加A型试剂红细胞1滴，向B管滴加B型试剂 红细胞1滴, 向O管滴加O型试剂红细胞1滴。（4）摇匀，后以1000rpm离心1min，或按说明书要求操作。（5）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞

5、浮起，以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。结果判定正定型结果判定 反定型ABO血型鉴定的临床意义（1）输血 血型鉴定是实施输血治疗的首要步骤，应该在 受血者与供血者血型相同，交叉配血完全相合的情况下 才能输血。正反定型一致，保证输血安全，例如类B。（2）器官移植 受者与供者最好选择ABO血型相同进行 移植，血型不符易引起排斥反应导致移植失败 （3）新生儿溶血 母子ABO血型不合可引起新生儿溶血 病，主要是依据血型血清学检查来诊断 （4）其他 ABO血型检查还可用于亲子鉴定，法医学鉴 定以及某些疾病相关的调查等RhD血型鉴定（试管法）原理 从理论上讲人类红细胞上的Rh抗原 主要有C、c、D、d、E

6、、e六种抗原，但 目前尚未发现抗d，因此也未肯定d抗原 ，故Rh抗原主要有五种。其中RhD抗原 性最强，因此，临床意义最大。一般情 况，患者常规进行RhD血型鉴定。RhD遗传RhD血型鉴定（试管法）操作方法 1. 取试管3支，分别标记检测管、阳性对照管、阴 性对照管 2. 各管均加入抗D血清1滴 3. 检测管加入受检者红细胞悬液1滴 4. 对照管分别加入RhD阳性红细胞和RhD阴性红细 胞各1滴 5. 摇匀，以1000rpm离心1分钟或按说明书操作， 取出试管，判定结果结果判定如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集， 受检管凝集，为Rh D阳性；阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受 检管不凝集，则

7、为Rh D阴性Rh D血型鉴定的临床意义（1）输血前检查 为了保证安全输血，输 血前应做RhD血型鉴定。避免Rh阴性个体 误输RhD阳性血液，防止发生同种免疫。（2）新生儿溶血病诊断 由于IgG类的 RhD抗体易通过胎盘，与相应抗原反应从 而破坏胎儿红细胞，引起严重的新生儿溶 血病Coombs TestnUse hemagglutination to detect:n1) Antibodycoated RBCs (“Direct”)n2) Anti-RBC antibody in serum (“Indirect”)Direct vs. Indirect Coombs Testagglutin

8、ationagglutinationTwo Modes of Autoimmune RBC Destruction *交叉配血试验盐水介质配血法 原理ABO、MN、P等血型系统产生的抗体 为IgM抗体，可在盐水介质中与红细胞表 面的相应抗原发生反应，产生肉眼可见的 凝集现象。IgG抗A、抗B的浓度足够大时 ，在盐水介质里中与红细胞也能发生凝集 现象试验方法1. 取小试管两支分别标注主、次管2. 主侧管内加入受血者血清和供血者红细胞悬液各1滴；次侧管内加入供血者血清和受血者红细 胞悬液各1滴3. 混匀，1000rpm离心1min4. 轻轻摇匀后镜检结果判定主、次管均不凝集且无溶血为配血相合， 有

9、凝集或/和溶血为不合 。凝聚胺配血法原理 凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，缩短了红细 胞之间的距离，红细胞之间排斥力的减弱，导致红细胞非特异性聚凝，这种凝聚是可逆的。当红细胞与血清在 低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在凝聚胺的作用下发生凝集。凝聚和凝集外观上是 不能区分的，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电 荷与凝聚胺上的正电荷中和，凝聚现象消失，而抗原抗 体反应产生的凝集不会消失。试验方法1. 取3支洁净小试管，分别标记主、次侧管及对照管2. 主侧管：加入受血者血清（浆）2滴，供血者5%红细胞悬液1滴，再加入低 离子介

10、质溶液0.5ml，室温静置1min3. 次侧管：加入供血者血清（浆）2滴，受血者5%红细胞悬液1滴，再加入低 离子介质溶液0.5ml，室温静置1min4. 各加入2滴凝聚胺试剂，轻轻混匀，室温静置15s 5. 1000rpm，离心1min，取出试管，检查上清液有无溶血反应，若无溶血反应 ，将上清液轻轻倒出，使管底保留大约0.1ml液体6.目测红细胞是否形成凝块，若无凝块出现必须重做。有凝块再轻摇试管，使红细胞凝块浮起7. 各加入重悬液试剂2滴，并轻轻混匀。8.肉眼观察无凝集后，必须使用显微镜观察结果结果判定1. 若为凝聚胺引起的非免疫性凝聚应在 1min内散开，表示两血相容，可以使用 2. 若

11、是抗原抗体引起的凝集则不会散开，表 示两血不相容，不宜使用抗人球蛋白配血法试验原理 在适合的温度、时间等条件下，IgG 型血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合，使红 细胞致敏，但不能在盐水介质中直接凝集带有 相应抗原的红细胞。由于抗人球蛋白试剂是马 或兔抗人球蛋白抗体，加入此类试剂后，在离 心力的作用下，这种抗体（二抗）与致敏在红 细胞膜上的IgG型血型抗体（一抗）发生抗原抗 体结合反应，经抗人球蛋白抗体的“搭桥”作用， 使原来已经致敏的红细胞发生凝集。因此，为 了检测出此类抗体，需要使用抗人球蛋白介质 进行交叉配血试验。 试验方法n取2支试管，分别标明主侧和次侧。主侧管加入 受血者血清2滴和献血

12、者红细胞悬液1滴，次侧 管加入献血者血清2滴和受血者红细胞1滴。n各试管经轻轻混匀后，置37水浴30min，分别 取出后用生理盐水洗涤红细胞3次，倾去上清液 。n各试管内加最适稀释度抗人球蛋白血清1滴， 120g/rpm离心1min或1300g/rpm离心15S后，观察 结果。 结果判定主、次管均不凝集且无溶血为配血相合， 有凝集或/和溶血为不合 。意外抗体筛选的意义和方法意外抗体是指除ABO血型系统抗体以外的其他抗体 ，如抗D、抗E等。主要经输血或妊 娠等免疫刺激产生，人群检出率为0.3 2.0，是引起迟发性免疫反应的主要原因 。临床有意义抗体：引起新生儿溶血病、溶 血性输血反应，或者使输入

13、的红细胞存活 期减少的、在37反应的同种异型抗体。试剂红细胞抗原表达的要求：D,C,E,c,e,M,N,S,s,PI,Le, Lea, Leb,K,k,Fya, Fyb,Jka, Jkb.实验方法盐水直接凝集试验： 是最简单的血型血清学方法，在室温下立即离心。可检出室温或低于室温反应的临床意义不大的抗体如抗M、抗N、抗P、抗Lea等。抗球蛋白试验： 可检出绝大部分临床有意义的不完全抗体，抗球蛋白试剂要有多特异性抗球蛋白抗体，其中含有抗IgG和抗C3d。含抗补体的球蛋白也能够检出结合补体的无临床意义的冷抗体，如抗I、抗HI等抗体筛选的意义n发现临床有意义的抗体n减少溶血性输血反应的发生n有利于免

14、疫溶血性疾病的诊断n有利于提前选择和准备相合的血液n确保临床输血安全、及时、有效输血不良反应分类即发反应 迟发反应免疫性反应 发热反应 溶血反应过敏反应 TA-GVHD溶血反应 输血后紫癜输血相关的急性肺损伤 血细胞或血浆蛋白同种免疫非免疫性反应 细菌污染反应 含铁血黄素沉着症循环超负荷 血栓性静脉炎空气栓塞 经输血传播的传染病出血倾向枸橼酸中毒非免疫性溶血反应电解质紊乱成分输血意义n提高输血疗效n减少和预防输血不良反应和并发症n有利于血液各种成分的保存n节约血液资源自身输血定义自身输血（亦称自体输血）是指采集某一个体的血液或/和血液成分并予以保存，或当其处于出血状态收集其所出血液并作相应处理

15、，需要时将其本人的血液或/和血液成分实施自我回输的一种输血治疗方法。自身输血分类n预存式自身输血n稀释式自身输血n回收式自身输血自体输血的优点1. 杜绝输血传播疾病的危险如：病毒性肝炎、艾滋病、 巨细胞病毒等。 2. 避免红细胞、白细胞、血小板以及蛋白质等抗原、 抗体产生的同种异体免疫反应。3.节省政府开支及患者费用，节约同种血源。解决特殊 血型供血。 4. 无输血反应及输血意外。 5. 血液新鲜，细胞活力好，功能强。 6. 避免了输血导致的免疫功能抑制，术后感染大幅减 少。 7. 大出血抢救成功率高，血液供应及时。 8. 解决宗教信仰人员的用血问题。预存式自身输血指在某一个体计划或可能需要施行输 血治疗前，有计划地采集其全血或/ 和血液成分并作相应保存，在其治疗 时将预先贮存的血液及血液成分进行 回输的一种输血治疗方法。回收式自身输血是指收集患者自身的出血，经过特定的处理后再回输给患者本人的一种输血方法。n术中回收式自身输血术中洗涤回收式自身输血术中非涤净回收式自身输血n术后（床旁）回收式自身输血n外伤时回收式自身输血不同型号的血液回收机稀释法自身输血是指在麻醉成功后手术开始前采 集一定数量的血液，同时输注一 定体积的晶体溶液和胶体溶液， 以补充有效循环容量维持其正常 ，使血液稀释，并在患者失血后 回输其先前采集的血液。血液治疗 治疗