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1、 第九章第九章 维维维维生素生素类药类药类药类药 物的分析物的分析Chapter 9 Analysis of VitaminesVitamine A AVitamine B B1 1Vitamine C CVitamine E E概述q维维生素：维持机体正常代谢必需的一类活性物质q均为人体必须且不能自身合成，结构和生理功能各异q目前共30余种，以大写拉丁字母命名q通常按溶解性分为脂溶性维维生素（A、D、E等）和水溶性维维生素（B族、C族等）第一节 维生素维生素A Av 2-Cis Neovitamin Aa v 4-Cis Neovitamin Ab v 2,4-dicis Neovitami
2、n Ac v 6-Cis Isovitamin Aa v 2,6-dicis Isovitamin Ab维生素A醇Retinol (Vit A alcohol)维生素A 醋酸酯 （VA acetate）维生素A 棕榈酸酯 (VA polmitate)9123 45678V it A3V it A1H2O-vit A: 具有共轭轭多烯烯醇侧链侧链 的环环己烯烯具有多种异构体（新VA、异VA）,其生物效价和光谱各有不同易发生脱氢、脱水、聚合,得到脱氢维生素A（vit A2)、去水维生素A（vitA3）、鲸醇性质质不溶于水，溶于有机溶剂强紫外吸收， max 325328nm不稳定：易被紫外光裂解，氧
3、、氧化剂等氧化可与SbCl3显色鉴别鉴别1）三氯化锑反应条件：无水、无醇2）UVvit A max： 326nm加热后（ vit A3）max: 348、367、389nm3）TLC无醇氯仿含量表示I.U.(International Unit)效价 (I.U./g)维生素A的含量用生物效价即国际单位（IU/g）来表示 1g pure VA acetate 2.907106 I.U. WHOVA acetateVA alcoholPotency (I.U./g) 2.9071063.331064. 效价测测定 UV（三点校正法）、三 氯化锑比色法、 HPLC法 UV（三点校正法）1）前提条件：
4、 杂质的吸收在310340nm波长 范围内呈一条直线，且随波长 的增大吸收度减小； 物质对光的吸收具有加和性 ：各波长处的吸收度是维生素 A与杂质吸收度的代数和4. 效价测定 UV（三点校正法）、三氯化锑比色法、HPLC法 UV（三点校正法）第一步：A的选择选择直接用测得的吸收度A还是校正后的A校？选择选择 依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除第二步：求注意：C为混合样品浓度2）计算步骤：第三步：求效价参数 Vit A (醇) Vit A (醋酸酯)1 IU 0.300ug 0.344ug效价标(IU/g) 3.33106 2.907106(E1cm)标 1820 1530(异丙醇，325nm
5、) (环己烷中328nm)1830 19001%换算因数=效价标(E1cm )标1%第四步：计计算标标示量3）A值值的选择选择第一法： (直接测测定法，适用于维维生素A醋酸酯酯 ) max在326329nm ?否第二法测定 是A/A328-规定值 0.02是用A328计算E计算A校正3.52(2A328-A316-A340) 、否A校正-A328A328f=用第二法测定用A校正计算用A328计算用第二法测定-15% -3% 0 3%第二法：（皂化法，适用于维维生素A醇）第一法无法消除杂质干扰时用此法max在323327nm ?否分离纯化后测定是A300/A3270.73计算A校正 6.815A
6、325-2.555A310-4.260A334 、是A校正-A325A325f=否分离纯化后测定用A校正计算用A325计算-3% 0 3%用A校正计算讨论讨论v 维生素A醋酸酯的吸光度校正公式是用直线方程式法推导而来的，维生素A醇的吸光度校正公式是用相似三角形法推导而来的；v 采用三点校正法，除其中一个点是在吸收峰波长处测 得外，其它两点分别在吸收峰两侧的波长处测 定，因此要求仪器波长准确；v 中国药典（2005年版）收载的维生素A、维生素A胶丸、维生素AD胶丸、维生素AD滴剂均采用本法测定含量。例：维生素AD胶丸的测定已知：w=0.1827g， 0.07985，标示量 10000IU，V=5
7、0ml，稀释倍数D50/2251） max在326329nm以内，第一法计算2）计算各波长与A328比值3） 340nm、360nm处差值超过规定的0.02，需计算校正吸收度A校正A校正3.52(2A328-A316-A340)0.6374） A校正与A328比较：A校正-A328A328 应以A校正计算 -3.925）计算 A校正/Cl= A校正/(w/VD) =61.876) 计算效价及标示量效价 1900117553IU/g标示量效价 /标示量93.9Vit B1盐酸硫胺 Thiamine Hydrochloride第二节 Vit B1氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲 基连接成的季铵类化合物结
8、构特点与鉴别v噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有。2. 性质质1）溶解性（盐盐酸盐盐）：易溶于水，溶液显酸性2）硫色素反应应（特征反应应）：噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有NaOHH2O环化cyclization O2H硫色素 Thiochrome 溶于丁醇，显蓝色荧光 be soluble in butan
9、ol and produce blue fluorescence3）生成沉淀反应v分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂 (碘化铋钾、 碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成 恒定的沉淀。v 维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S，与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS4)紫外吸收特征：246nm的波长处测 定吸光度， 吸收系数为406436；5) 氯化物特性：本品为盐酸盐，其水溶液呈氯化 物的鉴别反应；3. 鉴别鉴别 1）硫色素反应应vit B1 醇层显蓝色荧光（硫色素） 荧光消失2）沉淀反应应与K2HgI4、KI-I、硅钨酸等3）硝酸铅铅反应应vitB1+NaOH Na2S PbS
10、4）氯氯化物反应应 NaOH K3Fe(CN)6 O正丁醇H+ OH-Pb2+1）非水滴定法Vit B1+2HClO4 Vit B12HClO4溶剂：HAc，加Hg(Ac)2 T.S.指示剂：喹哪啶红-亚甲蓝混合指示剂 终点：天蓝色，振摇30s不褪色2）UV维维生素B1分子具有共轭轭双键结键结 构，在紫外区有吸 收。中国药药典维维生素B1片剂剂和注射剂剂含量的测测定含量测测定3）硫色素荧光法原理：vit B1 测定荧光（激发波长365nm，检测波长435nm）方法： NaOH K3Fe(CN)6 O异丁醇对照液+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 S + NaOH + 异丁醇 d供试液+ N
11、aOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 A + NaOH + 异丁醇 b计算：特点：（1）灵敏度高，专属性强，代谢产物不干扰， 适用于体液分析（2）非定量反应，只在一定条件下形成的硫色 素与维维生素B1浓浓度成正比，操作繁琐，干扰因素 多第三第三节节节节 Vit C612345v 结结构 v 又称L-抗坏血酸 v 结结构与糖类类相似v2.性质质和鉴别鉴别 v1）溶解性：易溶于水，水溶液酸性；乙醇中微 溶；三氯氯甲烷烷或乙醚醚中不溶v2）还还原性（二烯烯醇基）：可被氧化成二酮酮基L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸L-ascorbic acid L-dehydroascorbic acid
12、 L-anhydroascorbic acid 有生物活性 有生物活性 无生物活性 with biological activity with biological activity without biological activity 3）酸性：C-3 pKa 4.17，C-2 pKa 11.57通常显一元酸，可与Na2CO3成盐4）水解性（内酯环酯环 ）：强碱中水解开环5）旋光性：6）糖类类性质质：vit C蓝蓝色三氯醋酸 或盐酸吡咯 H2O50blue-3H2O糠醛furfural-CO2戊糖pentaose糖的反应7）紫外吸收特性共轭双键，其稀盐酸溶液 243nm中性、碱性 265n
13、mFehling试剂 Cu2O（红色）（碱性酒石酸铜） AgNO3 Ag (黑色沉淀) 2,6-二氯靛酚 酚亚胺(褪色)KMnO4 MnO2(褪色)亚甲蓝 (褪色)Vit C +含量Assay碘量法原理：维生素C在醋酸酸性条件下，可被碘定量氧化淀粉指示剂测定注意事项：稀醋酸：酸性条件vit C被空气中O2氧化慢新沸过的冷水：减少水中氧的影响立即滴定：避免被O2氧化注射液中有NaHSO3，可加入丙酮消除其干扰自身指示终点：滴定至溶液显红色注意事项：快速滴定：避免其他还原性物质干扰方法专属性比碘量法高但需经常标定2,6-二氯靛酚高效液相色谱谱法v色谱条件：色谱柱：ODS(4.6mm200mm,5m
14、)；流动相：5mmol/L磷酸二氢钠 溶液（磷酸调pH2.5）；流速：1.0ml/min；柱温：20；检测 波长：254nm专属性、线性、精密度与准确度、回收率与稳定性考察日内RSD8.33% 日间RSD 4.36%第五节 Vit ER1R2 Vit E，生育酚醋酸酯(dl-Tocopheryl Acetate)R1 R2 SyntheticProduct content(%)NaturalProduct content(%) -Tocopheryl -CH3-CH3 52.0 68.0-Tocopheryl -CH3 -H 9.3 22.0 -Tocopheryl -H-CH3 28.05.0-Tocoph
