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1、第十三章抗生素类药物 的分析抗生素的来源 2、化学合成或半合成1、生物合成（发酵）控制抗生素质量的复杂性*分子结构多不稳定*发酵过程不易控制生产工艺复杂稳定性差发酵液中含有的杂质 各种无机盐、脂肪、蛋白质、降解产物、色素、热原、毒性物质 *发酵过程易受污染*降解后 疗效 失效毒副作用ChP中抗生素类药品的检查项下常增加“安全性检查”异常毒性热原细菌内毒素降压物质无菌抗生素类药品的含量测定方法（一）生物学方法以生物学方法或生化方法测定生理活性物质，并按效价单位计算的测定方法微生物检定法抗生素微生物检定法以抗生素抑制细菌生长的能力或其杀菌能力作为衡量效价的标准优点 *临床效果一致*灵敏度高*干扰物
2、质少*可测未知药物缺点 *操作繁琐*耗时*测定误差大（2000）附录 A （二）理化方法以理化方法测定主药含量，按有效物质的质量计算的测定方法优点*准确度高*简单、快速缺点*不一定代表生物效价*易受干扰*仅用于己知药物-内酰胺类抗生素的分析 青霉素钠青霉素V钾氨苄西林头孢羟氨苄青霉素类头孢菌素类氢化 噻唑环氢化 噻嗪环青霉素类酰胺 侧链6-6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸 （6APA）酸性不稳定不稳定*手性C penicillins母核无母核无UVUV吸收吸收青霉素钠Benzylpenicillin Sodium青霉素V钾Phenoxymethylpenicillin Potassium氨苄西林（
3、氨苄青霉素）Ampicillin7-7-氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸 （7ACA）头孢菌素类酰胺 侧链酸性*手性C不稳定不稳定母核有母核有UVUV吸收吸收头孢羟氨苄cefadroxil性质 *与碱金属成盐 易溶于水pKa=2.52.81. 羧基酸性*与有机碱成盐 难溶于水KK NaNa Benzylpenicillin potassium青霉素钾钾 Benzylpenicillin sodium青霉素钠钠普鲁卡因普鲁卡因青霉素 苄星苄星青霉素普鲁卡因普鲁卡因 二苄基乙二胺二苄基乙二胺K+易溶于有机溶剂难溶于水易溶于水难溶于有机溶剂青霉素青霉素钾青霉素钠2. 溶解性3. 共轭体系 UV4. 内酰
4、胺环不稳定 性因素水溶液 不稳定、易开环干燥纯净 稳定 四元环张力大 酰胺键易水解 不稳定温度氧化剂（头孢噻吩钠水溶液2524h失活8%）（青霉素钠水溶液3024h失活56%）Cu2+、Pb2+、Hg2+、Ag+青霉素的降解反应青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉酸H2O pH2青霉噻唑酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青 霉 素青霉胺 青霉醛HgCl2100H+H2O第一节 内酰胺类药物的分析一、鉴别 1. 抑菌试验2. 沉淀反应溶解过量HCl有机溶剂4. Na+、K+的火焰反应K+ 火焰 紫色Na+ 火焰 鲜黄色3. 水解反应NaOH水解5. UV法青霉素钾 max=268、274nmA26
5、8/A274=1.201.256. HPLC法头孢羟氨苄与对照品比较 tR 值对照品法7. IR青霉素钠、青霉素钾氨苄西林、头孢羟氨苄内酰胺环上的羰基伸缩振动增强而向高波数方向位移-内酰胺环仲酰胺二、检查1. 吸收度青霉素钠A264nm 0.800.88A280nm0.10青霉素V钾（降解后测定）A274nm0.50A306nm0.332. 水分 费休氏水分测定法 3. 细菌内毒素 鲎试剂法4. 无菌 用青霉素酶灭活后检查5. N，N二甲基苯胺的检查氨苄西林杂质来源 青霉素G裂解产生检查方法 气相色谱法内标法加校正因子内标 萘6. 有关物质头孢羟氨苄-对羟基苯甘氨酸7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸检
6、查方法 薄层色谱法茚三酮显色三、含量测定 *碘量法*汞量法*酸碱滴定法*UV法（铜盐法、硫醇汞盐法）*RP-HPLC法（头孢菌素类）（一）汞量法 青霉素V钾1、原理*内酰胺类不直接与汞反应*内酰胺类水解产物可与汞发生定量反应水解青霉胺络汞水解NaOHpH4.6脱羧 Hg(NO3)2pH4.6青霉胺络汞Hg(NO3)2pH4.62:11:1青霉胺与硝酸汞发生络合反应。先按2分子青霉胺与1分子汞离子的比例络合，发生第一次滴定突跃，但突跃范围很小，变化比较平缓，不宜用于做终点，继续用硝酸汞滴定时，青霉胺分子与汞离子按1：1的比例络合，生成稳定的络合物青霉胺络汞，发生第二次滴定突跃。其突跃范围较大，变
7、化较急剧，宜于确定终点。2、方法醋酸盐缓冲液滴定水解 pH4.6pH4.6滴定样 品以未经水解的样品作空白测定3、讨论（1）以第二次滴定突跃为终点电位法指示终点 （2）反应摩尔比 1 : 1（3）空白试验 消除已降解产物干扰（4）优点 不需标准品4、计算（二）硫醇汞盐法 青霉素V钾片咪唑1、原理催化剂咪唑2、方法对照品法pH93、讨论A、咪唑催化的水解率高硫醇汞盐稳定（3h）B、侧链有-NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应95：139、属于-内酰胺类的抗生素药物有A、青霉素B、红霉素C、头孢菌素D、庆大霉素E、四环素 96：83、无旋光性的药物是A、四环素B、青霉素C、盐酸麻黄碱D
8、、乙酰水杨酸E、葡萄糖 96：135、青霉素类药物可用下面哪 些方法测定A、三氯化铁比色法B、汞量法C、碘量法 D、硫醇汞盐法E、酸性染料比色法 99m：71、中国药典(1995年版)测定头孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是A、微生物法B、碘量法C、汞量法D、正相高效液相色谱法E、反相高效液相色谱法 00：86. 汞量法测定青霉素含量时，以电位法指示终点，在滴定曲线下出现两个指示点，计算时以第2次滴定终点为依据，此时青霉素与汞化物的摩尔比为A. 1:0.5B. 1:1C. 1:2D. 1:3E. 1:4 例1、能发生重氮化偶合反应的抗 生素类药物是A、青毒素B、庆大霉素C、苄星青霉素D、盐
9、酸四环素E、普鲁卡因青霉素 例2、硫醇汞盐法测定氨苄青霉素钠的含量，其方法是A. 样品经溶解后，制成一定浓度直接测定B. 样品经酸水解后，用于测定C. 样品经碱水解后，用于测定D. 样品经咪唑催化与氯化汞作用，形成硫醇汞盐后用于测定E. 样品经酸水解后，与微量氯化铜作用形成铜盐后用于测定 第五节 硫酸链霉素和硫酸庆大霉 素的分析 氨基糖苷类药物链霉素 坂口反应麦芽酚反应UV3个碱性中心链霉胍链霉糖庆大霉素（庆大霉素C的复合物）5个碱性中心UV 链霉素max=230nm稳定性硫酸链霉素pH57.5最稳定，硫酸庆大霉素pH212稳定溶解性 易溶于水 一、鉴别 1. 茚三酮反应 氨基糖苷蓝紫色2.
10、N甲基葡萄糖胺反应乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛 H+红色3. 麦芽酚反应链霉素中链霉糖的特征反应 H+紫红4. 坂口反应链霉素中链霉胍的反应 水解橙红色次溴酸钠 8-羟基喹啉 （或- 萘酚）5. 硫酸盐的反应6. TLC 硫酸庆大霉素二、检查 （一）硫酸链霉素干燥失重、异常毒性、热原、降压物质、无菌 水分、硫酸盐、异常毒性、细菌内毒素、降压物质、C组分的检查（二）硫酸庆大霉素庆大霉素C1 、C2 、C1a*对微生物的活性无明显差异*毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同工艺差别C组分比例不一致规定控制各组分的相对百分含量C1 25 50%C1a 15 40%C2a + C2 20 50
11、%测定原理max = 330nmpH10.4三、含量测定抗生素微生物检定法 99m：131、链霉素的鉴别方法为 A、坂口（Sakaguchi）反应B、麦芽酚（Maltol）反应C、三氯化铁反应D、茚三酮反应E、N一甲基葡萄糖胺反应 （ElsonMorgan反应） 99:116120以下反应可适用的药物为A、青霉素 B、链霉素C、两者均能 D、两者均不能116、Kober反应117、羟肟酸铁反应118、坂口反应119、N甲基葡萄糖胺反应120、在酸性溶液中水解DAB BC98：126130 可以鉴别的药物是A、链霉素 B、庆大霉素C、两者均可 D、两者均不可126、用Kober反应127、用坂口
12、反应128、用麦芽酚反应129、用三氯化铁反应130、用茚三酮反应D AADC第六节 罗红霉素的分析 大环内酯类抗生素1. TLC一、鉴别2. IR 二、检查（一）碱度 pH8.010.0（二）有关物质 TLC法（三）水分 费休氏法 3.0%（四）异常毒性三、含量测定抗生素微生物检定法 第七节 盐酸美他环素的分析 四环素类抗生素二甲氨基烯醇羟基酚羟基酰氨基性质两性 二甲氨基烯醇羟基、酚羟基UV四环素类药物的不稳定性1. 差向异构化弱酸性（pH2.06.0）中可发生差向异构化，形成差向四环素类 2. 酸性条件下的降解反应较强酸性（pH2）下降解生成脱水四环素4. 可与金属离子形成有色配位化合物 3. 碱性条件下的降解反应碱性下降解生成异四环素一、鉴别 1. UV 2. HPLC法3. Cl-1. 杂质吸收度差向异构体脱水美他环素 其他杂质A490nm0.20二、检查 2. 有关物质控制生产过程中引入的土霉素 检查方法 HPLC主成分自身对照法四环素类抗生素中“有关物质”检查差向四环素（ETC）脱水四环素（ATC）差向脱水四环素（EATC）金霉素（CTC） 三、含量测定 HPLC法 对照品法含量=A样 c对A对 c样100%00：137. 四环素类抗生素中存在的“有关物质”主要指 A. 差向异构体B. 易氧化物C. 脱水物D. 氯化物E. 差向脱水物
