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1、抗体的人工制备人工制备抗体n多克隆抗体 （polyclonal antibody ）n单克隆抗体 （monoclonal antibody ）n基因工程抗体 （genetic engineering antibody) （一）多克隆抗体 （polyclonal antibody(PcAb)n用传统方法将抗原物质免疫动物, 由于这些物质 由多种抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成, 可刺激不同淋巴细胞克隆, 产生多种Ig, 即多克隆 抗体。n由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具 有高度的异质性。缺点n它不能针对某一特定表位，特异性不高 ，常出现交叉反应；n同时也不易大量制备，其应用受到限制
2、。 多克隆抗体主要来源于n动物免疫血清n恢复期患者血清n免疫接种人群PcAb制备的基本过程n抗原制备n动物免疫n试血测定抗体效价n血清分离与保存n多抗纯化与标记用于制备抗血清的动物n小鼠、n大鼠、n兔、n羊、n马等大动物。 （二）单克隆抗体（monoclonal antibody ，McAb）n由单一B细胞克隆针对某一抗原决定簇产生的完全均一的只对某一抗原决定簇起反应的 特异性抗体, 即为单克隆抗体。n通过杂交瘤技术获得。n针对一个抗原决定簇n由一个B细胞分化、增殖产生的子代细胞集团 产生的，n针对一个抗原决定簇的抗体，即由单一B细胞 克隆合成的抗体。特点：1.高度均一性 2.高度专一性3.大
3、量产生4.及稳定性应用n作为诊断试剂用于许多血清学检测; n已广泛应用于疾病的诊断、n特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、n疾病的被动免疫治疗n 或与核素、毒素、化学药物偶联导向药 物, 用于肿瘤治疗。 单克隆抗体的生产n动物体内生产系统n细胞培养生产系统动物体内生产系统n将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，杂交瘤细 胞可在小鼠腹腔中无限繁殖，导致腹水 产生，每毫升腹水可获得520mg的单克 隆抗体，一般一次可收腹水510mL,间隔 34d 采一次，可多次反复采集。选择培养基n 常用HAT选择培养基，H为次黄嘌呤（hypoxanthine）,T 为胸腺嘧啶核苷（thymidine)，二者都是旁路合成DN A的
4、 原料；A是氨基喋呤（ aminoplerin）,是细胞合成DNA的 阻断剂。n在DMEM培养基中加入 H、A、T三种成分即制成HAT选 择培养基，在该培养基中，未融合的骨髓瘤细胞不能生 长，因它缺乏HGPRT酶下能利用旁路途径合成DNA，内 源性的合成又受到氨基喋呤的阻断；至于未融合的脾细 胞则在2周内自然死亡所以只有融合的杂交瘤细胞才能 在该培养基中生长。细胞培养生产系统n悬浮培养系统n细胞固定化培养系统单克隆抗体应用单克隆抗体被广泛用作诊断检测试剂，提高 了常规免疫学检测技术在疾病诊断和分析研 究中的敏感性、特异性、准确性和检测速度 。 单克隆抗体可与同位素、毒素、细胞毒类药 物通过化学
5、偶联制备成导向药物（生物导弹 ），用于肿瘤、自身免疫性疾病治疗和防治 移植排斥反应等。 单克隆抗体应用单克隆抗体可用作生物活性药物的纯化试剂。单克隆抗体与多克隆抗体比较 性 状多克隆抗体单单克隆抗体产生抗体的细胞来 源多株B细胞及其子代细 胞 人或动物免疫血清，恢 复期血清 单株B细胞及其子代细 胞 B细胞杂交瘤的小鼠腹 腔（或上清液） 有效抗体含量0.11.0mg/ml血清0.55.0mg/ml小鼠腹水抗体成分及性质 能识别多种抗原决定簇 的各类及各亚类Ig 只识别一种抗原决定簇 的同一亚类Ig， 其分子结构纯一，独特 性完全相同单克隆抗体与多克隆抗体比较 性 状多克隆抗体单单克隆抗体用 途
6、用于常规多价抗 原的免疫学检测、 易出现交叉反应 ； 用于紧急预防及 治疗各种微生物、 外毒素引起的疾病 作为第一抗体， 用ELISA、放免、 免疫酶联等方法检 测微量抗原，可避 免交叉反应； 将肿瘤特异性 McAb与药物连结 ， 用于治疗肿瘤 n但是由于人-人杂交瘤的技术限制，目前 绝大多数单克隆抗体是鼠源性的。n由于是异种抗原，重复体内使用鼠源性 抗体将促使机体产生抗鼠Ig的抗体，不 仅降低临床疗效，亦可能引起严重的超 敏反应，因而限制了其临床应用。（三）基因工程抗体 :n人-鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗 体、小分子抗体、人源化抗体。n可保持单克隆抗体均一性、特异性强的 优点, 又能克
7、服其为鼠源性的不足。 n 由基因重组技术制备的抗体称为基因工程抗体 (gene engineering antibody，GeAb)，也称第三 代人工抗体。n其原理是由B细胞获得编码抗体的基因，或以 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction， PCR)体外扩增抗体基因片段，经体外DNA重 组后，转化受体细胞，使其表达特定抗体。n目前已成功表达的基因工程抗体有嵌合抗体、 重构建抗体、单链抗体等，其中嵌合抗体研究 较多。n另外重组噬菌体抗体(recombinant phage antibody)是近年以重组噬菌体展示系统 制备的GeAb。n将抗体VH、VL基因经体外PCR扩
8、增后与 噬菌体外壳编码基因连接，重组后可在 噬菌体表面表达抗体融合蛋白，经固相 抗原吸附技术很容易筛选出表达特异抗 体的噬菌体用以大量表达和制备抗体。 抗体基因片段的获得n从B细胞DNA库中筛选；n用探针从杂交瘤细胞、免疫脾细胞的 DNA库或cDNA库中筛选；n以PCR法直接扩增。一、嵌合抗体（Chimeric antibody) n是指在同一抗体分子中含有不同种属来 源抗体片段的抗体，又称杂种抗体。n迄今构建的嵌合抗体多为“鼠-人”类型， 也就是抗体的Fab或F(ab)2来源于鼠类。 而Fc片段来源于人类。重构抗体I advise you to buy out his all share o
9、f power. 我建议你买下他的全部股权。nbuy out 买断全部股份、商业股权或利息（To purchase the entire stock, business rights, or interests of）。n例句：We are now financially sound enough to buy out the next failure.如今，我们（公司）财务运营足够健全 ，承担得起再一次的失败。I would not wish to be inferior to others. 我不希望自己比别人差。nbe inferior to，比差，劣于，次于，不 如n例句He is i
10、nferior to others in many respects.他在许多方面不如别人。I hate to see you in such low spirits. 我讨厌看到你这么情绪低落。n主要是注意spirit这个词的复数形式。作为“精 神、心灵”意义的时候，是不可数名词；而作 为“情绪，心情”的意义时，则一般都使用复数 形式。n例句： He felt in excellent spirits when he arrived home.他回到家里时情绪非常好。Its very creepy to walk alone at 1 am 凌晨一点一个人走很害怕。nCreepy和scary
11、这两个形容词都是用来形容令人 “害怕”的感觉。但这两者其实有些小小的差异 。Creepy 的话是指“心里毛毛的”那种感觉，而 scary则是真的令人感到害怕，所以在程度上来 说scary比creepy还要来得恐怖些。比方说像是 看恐怖电影，也许你可以说 “Its creepy.“ 和 “Its scary.“ 都可以，但是如果像是去从事高空 弹跳 (bungee jump)，我想对大部分的人来说都 是scary而不只是creepy了。（本句选自小笨 霖英语笔记本）Please hand the document in to me. 请把那份文件交给我。nhand in“提交，交出，递交”。这个
12、句子 也可以说成，Please submit the document to me.n例句： Please hand your homework in at once. 请把你们的家庭作业立刻交上来。A man is assisting police with their inquiries. 一名男子协助警方调查。Assist with/in 协助，帮助。例： A team of nurses assisted the doctor in performing the operation. 一组护士协助医生施行手术。He minutes proceedings of the meeting. 他作会议记录。nWho is going to take the minutes? 谁来做会议记录？
