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1、一、心血管受体二、心血管受体研究方法二、心血管受体研究方法张幼怡北京大学第三医院血管医学研究所科研三部曲选题 实验 成果新 严 实临床医学临床研究 “立地” 应用性基础研究 “顶天” 原创性“ “填补空白填补空白” ” ？调 节修饰受体mRNA表达受体蛋白表达 功能受体生理状态病理状态转 录降 解合 成转 运定 位密 度降 解功 能 信号转导效 应功能受体密 度功 能 信号转导效 应放射配体结合测定法 免疫学方法药理学功能分析方法 生物化学分析方法 分子生物学方法工具药的应用细胞生物学方法从药物的浓度效应关系来定量分析药物与受体的相互作用是受体功能分析的重要方法。 通过激动剂引起的生物学效应，
2、或拮抗剂对激动剂效应的影响来定量分析激动剂或拮抗剂与受体的亲和性。由于药物与受体的相互作用受药物分子向受体扩散的速度、作用过程及反应速度等动力学因素的影响，因此受体功能分析多是在离体组织上分析平衡条件下的药物浓度效应曲线，以简化复杂的动力学因素。药理学功能分析方法 1. 激动剂(agonist)： 能够与受体结合，改变激活状态与静止状态受体 的比例，从而引起生物学效应的配体。 传统激动剂增加激活状态受体 比例，而反向激动剂则减少激活状态受体的比例。2 . EC50和pD2： EC50表示激动剂产生其50%最大效应所需要的浓度 。激动剂的作用可以为刺激性，也可为抑制性的。EC50的以10为底的
3、负对数值即pD2。-8-7-6-5-41.01.21.41.61.82.0+ propranolol 10mM+ prazosin 100 nMNorepinephrine (log M)3H-leucine incorporation (fold of control)EC50=1mM, pD2=6-10-9-8-7-6-5-40100200300400500600NE+Phen1 uMISONE+Prop1uM PEAgonists(log M)Force(mg)EC50=12nM, pD2= 8.1 EC50=0.8mM, pD2=6.9NE 0.750.28 5.530.65 Rmax
4、(%) pD2 PE 0.180.11 4.760.76 ME 0.260.01 3.720.76 最大效应 (Emax): 反映药物的内在效率；EC50: 表示药物对受体的亲和性和药物 的效强 (potency)。将横轴上的药物浓度转换成对数浓度，曲线则呈“S”型， 曲线最高点仍为Emax， 引起50Emax的激动剂的对数浓度(lg EC50) 即为pD2。 如果没有受体储备，根据激动剂浓度效应曲 线得到的EC50，应能反映激动剂与受体的亲和性 。但实际上激动剂(尤其是完全激动剂)则常常 有受体储备，在此情况下，必须采用Furchgott 方法测定KA值。 方法: 先得到没有拮抗剂存在的激动剂浓度-效 应曲线(对照)，然后给予一定浓度的不可逆拮 抗剂使备用受体失活, 再重新制备激动剂浓度 效应曲线，根据前后两条曲线，按Furchgott 公式计算出KA值 A与A :使用不可逆拮抗剂前后达到某一效应 时激动剂的浓度， q为一常数，表示经不可逆拮抗剂处理后仍保持活 性受体与失活受体的比值。1A 作x 轴,1 A作y 轴,斜率(slope)为1 qy轴上的截距(intercept)为 KA11 q- 1KA = (slope-1) intercept
