《生化实验--血糖的测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生化实验--血糖的测定（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、血糖的测定u正常人空腹血糖浓度是多少？u为何能保持恒定？u糖尿病 正常人空腹血糖浓度(fasting plasma glucose,FPG)为 3.89-6.11 mmol/L。 血糖如何维持稳定？关键酶调节关键酶如何调节：激素调节。 常见的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。 降低血糖的激素：胰岛素对糖代谢的调节：胰岛素促进组织、 细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速葡 萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌肉中 ，并抑制糖异生，促进葡萄糖转变为 脂肪酸，贮存于脂肪组织，导致血糖 水平下降。胰岛素缺乏时，血糖浓度 升高，如超过肾糖阈，尿中将出现糖 ，引起糖尿病。胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳
2、定的 主要激素 如果调节失衡，结果是什么？高血糖 或者低血糖。 低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。高血糖：生理性和病理性。高于7.1 mmol/L。高于 8.89 mmol/L，出现糖尿。最常见病理性高血糖： 糖尿病。 糖尿病：高血糖和糖尿。临床特点：三多一少。病 因：胰岛素分泌缺陷和胰岛素受体缺陷。 糖尿病诊断标准？糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多
3、食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。 糖尿病的类型型糖尿病 又叫青年发病型糖 尿病或胰岛素依耐 型糖尿病。 原因：胰腺产生胰 岛素的细胞已经彻 底损坏,从而完全失 去了产生胰岛素的 功能. 治疗：依赖胰岛素 治疗。型糖尿病 又叫非胰岛素依耐 型糖尿病。 原因：自身能够产 生胰岛素，但细胞 无法对其作出反应 ，使胰岛素无法发 挥作用。 治疗：需要胰岛素 单独或与口服药联 合应用的治疗 一般正常人进食后血糖都会暂时性升高， 进食后30分种或60分种可升到最高峰，但 血糖一般不超过8.9 mmol/L；进食2小时后又
4、会回到空腹水平，这就是人体对糖的耐 受现象。 什么是口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）？ 有何临床意义？ 口服葡萄糖耐量试验（Oral glucose tolerance test， OGTT）是一种口服葡 萄糖负荷试验，用以了解人体对进食葡 萄糖后的血糖调节能力。 通过OGTT试验，可以早期发现糖代谢异 常，早期诊断糖尿病(Diabetes Mellitus, DM) ，是一种简单、快捷的诊断方法。实验前三天，受试者每日食物中糖含 量不应低于150g，且维持正常活动，影响 试验的药物应在三天前停用，受试前应空 腹10-15h。空腹取血后，
5、5分钟内饮入250ml含 75g无水葡萄糖的糖水，妊娠妇女用量为 100g，儿童按1.75g/kg体重给予,不超过 75g。服糖后半小时，1小时，2小时，3小时 各抽血一次，作血糖定量检测。于采血同 时，每隔1小时留取尿液作尿糖试验，整个 过程不可吸烟，喝咖啡，喝茶或进食。OGTT方法：WTO标准化 测试前禁食10-16小时，清晨空腹进行。空腹抽静脉血，测空腹静脉血浆葡萄糖，然 后成人口服75 g无水葡萄糖，溶于250 ml水 中，510分钟内饮完。饮后2小时抽静脉血，测静脉血浆葡萄糖。IFG 与 IGT 空腹血糖损伤(Impaired Fasting Glucose, IFG)：空腹血糖6.
6、1mmol/L,但7.0mmol/L 糖耐量受损(Impaired Glucose Tolerance, IGT)：餐后2h血糖7.8mmol/L,但11.1mmol/L IFG 和IGT可以说是一种正常人向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是 糖尿病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据 有关研究报道，每年5-8%的IGT者将发展 成为2型糖尿病。 无糖尿病史，空腹或者随机血糖异常 无糖尿病史，有一过性或持续性糖尿 无糖尿病史，有明显糖尿病家族史 有糖尿病症状，但空腹或者随机血糖 不够标准 分娩巨大胎儿的妇女和有巨大胎儿史 的个体 不明原因肾病和视网膜病 妊
7、娠期、甲亢、感染期出现糖尿者OGTT的适应症血糖测定方法 无机化学法：如Folin-Wu法 有机化学法：如邻甲苯胺法 酶法：己糖激酶法， 酶法：葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还原物质的影响。空腹正常血糖参考值4.46.7mmol/L或80-120mg/dL无机化学法：Folin-Wu法有机化学法：邻甲苯胺法 原理： 葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟 甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Sc
8、hiff碱。 Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。 评价：操作简便，由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定 法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清 中的蛋白质，因此该实验的特异性较高。酶法：己糖激酶法（Hexokinase, HK）n原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。n评价：本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分 析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase, GOD ） 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧 化
9、为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。 过氧化氢在过氧化物酶 (peroxidase，POD)作用下，分解为水 和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的 醌类化合物。 红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长 处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理（1）葡萄糖O2H2O葡萄糖氧化酶 （GOD）（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸H2O2H2O 红色醌式物质过氧化物酶（POD）Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度实验试剂0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)酶试剂 取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶12
10、00U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶于磷酸缓冲液80ml中，定容至100ml，置4保存酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。酶酚混合试剂 将酶试剂和酚试剂等量混合，4 下可存放1个月。葡萄糖标准工作液：5mmol/L 实验操作加入物 BST血清(ml)0.01葡萄糖标准液(ml)0.01蒸馏水(ml)0.01工作液(ml)1.01.01.0 混匀，置 37 水浴保温 15分钟，每管加蒸馏水0.5 ml，在 510nm波长处比色，以空白管（B管）调零，读取各管吸光度。 根据各管吸光度计算其血糖浓度。 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的 葡萄糖含量，
11、但不能直接测定尿液葡 萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等 干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物 酶反应，造成结果假性偏低。对于血液样品需及时分离红细胞。因 为红细胞的酵解将会导致测定结果偏 低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。注意事项严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液， 然后在进行测定。酶酚混合液一般现用现配。 葡萄糖氧化酶对 - D 葡萄糖高度特异，溶液中的葡 萄糖约 36% 为 型， 64% 为 型。葡萄糖的完全 氧化需要 型到 型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋 过程。新配制的葡萄糖标准液主要是 型，故须放 置 2h 以上 (
12、 最好过夜 ) ，待变旋平衡后方可应用。 注意事项计算 ： 葡萄糖标准液：5 mmol/L 血清葡萄糖（mmol/L）=AT/AS CS参考值： 3.96.1 mmol/L不同检测方法所提供的空腹正常血糖 参考值存在差异。 葡萄糖氧化酶法：3.96.1mmol/L Folin-Wu法：4.46.7mmol/L 邻-甲苯胺法：3.96.1mmol/L本法测定葡萄糖非常特异，从原理反 应式中可知第一步是特异反应，第二 步特异性较差。误差往往发生在反应 的第二步。一些还原性物质如尿酸、 维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可 与色原性物质竞争过氧化氢，从而消 耗反应过程中所产生的过氧化氢，产 生竞争性抑制，使测定结果偏低。但 是对测定结果无显著影响。实验误差分析：葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄 糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。 Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考值较其他方法略高。邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测，且邻甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性，临床和科研上已很少采用。血糖测定方法特点THE ENDTHE END
