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1、实验四 甲醛滴定法测定 氨基氮一、目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。 二、原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：NH3是弱酸，完全解离时pH为1112或更高，若用碱滴定 NH3所释放的H来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很 难准确指示滴定终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物， 使上述平衡右移，促使NH3释放H，使溶液的酸度增加，滴 定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞 作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算 出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物如蛋 白质水解液
2、，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据 。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度， 随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时 ，表明水解作用已完全。 三、仪器、试剂、材料 仪器 25ml锥形瓶；3ml微量滴定管；吸管；研钵。 试剂 300ml 0.05mol/L标准甘氨酸溶液 准确称取375mg 甘氨酸，溶解后定容至100ml。 500ml 0.02mol/L标准氢氧化钠溶液 20ml酚酞指示剂 0.5 酚酞的50 乙醇溶液 400 ml中性甲醛溶液 在50ml 3637 分析纯甲醛溶液中加入1ml 0.5酚酞乙醇水溶 液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶
3、 中。 四、操作方法 取3个25 ml的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入 0.05mol/L标准甘氨酸溶液2ml和水5ml，混匀。向3 号瓶内加入7 ml水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酞 指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，分别用 0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。 重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准 氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨 酸氨基氮的回收率。 取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测 定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶 液中含有氨基氮的毫克数。 五、结果处理 公式中V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。V对 为滴
4、定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度。甘氨酸氨基氮回收率实际测 得量100 加入理论量氨基氮（毫克/毫升 ）=（V未V对） NNaOH14.008 21. 回收率计算：公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶 耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008 。 氨基氮计算： 注意事项 标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中 保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧 化钠。 中性甲醛溶液在临用前配制，若已放置一段时间， 则使用前需要重新中和。 本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严 格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求 进行。 脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定毫 升数偏低。而酪氨酸的滴定毫升数结果偏高。 思考题 甲醛滴定法为什么不能准确测定含有多 种氨基酸的样品中的氨基氮？
