15章分枝杆菌(检验)

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1、 分枝杆菌是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势而得名。因具有抗酸性，故又称抗酸杆菌。 第15章 分枝杆菌属人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌对人类致病。人型结核分枝杆菌感染的发病率最高。由于结核分枝杆菌的耐药和AIDS发病率呈上升趋势，结核病成为危胁人类健康的一个严重的全球性公共卫生问题。 世界防治结核病日：3月24日第一节 结核分枝杆菌据2000年全国结核病流行病学抽样调查 结果显示，我国结核病疫情现状为： （1）结核病感染率高：目前全年龄组结核菌感染 率为44.5%，全国约5.5亿人受到了结核菌感染，结 核菌感染率高于全球人口感染率为1/3的水平。 （2）结核病患

2、病率高：全国活动性肺结核患病率 为367/10万，涂阳肺结核患病率为122/10万，菌阳 肺结核患病率为160/10万；估算全国现有活动性肺 结核病人数450万，其中涂阳肺结核病人150万，菌 阳肺结核病人200万。我国结核病疫情现状（3）结核病耐药率高：肺结核病人结核菌初始耐药率为18.6/10万, 继发耐药率为46.5/10万。按照全国菌阳肺结核病人200万计算，全国有耐药病人55.5万。（4）结核病死亡率高：全国结核病死亡专率为9.8/10万,每年因结核病死亡13万人，为各种其他传染病和寄生虫病死亡总和的2倍。 全球结核病疫情现状据世界卫生组织报道，目前全球有近 1/3的人已感染结核杆菌

3、，也就是20亿人口感染了结 核菌。全球有活动性肺结核病人约2000万，每年新 发结核病人约800-1000万，每年约有300万人死于结核病。结核病已成为全世界成人因传染病而死亡的 主要疾病之一。我国是全球22个结核病高负担国家之一，活动性肺结核病人数居世界第二位。 上世纪末为什么全球结核病疫情回升 20世纪90年代，全球结核病疫情回升的主要 原因为： （1）对结核病的忽视：由于发达国家结核病控制 的效果较好，盲目乐观地认为消除结核病在望，放 松了结核病控制工作，削减机构、人员和经费。而 发展中国家尽管疫情严重，但无足够的力量支持结 核病防治工作。 （2）移民和难民增加：来自结核病流行严重地区

4、的大量移民和难民，这些移民和难民大多数是已经 感染了结核菌，发病率很高，他们的发病加重了当 地的结核病的流行。（3）人类免疫缺陷病毒（HIV）感染和艾滋病（AIDS）的流行：HIV感染降低了人体对结核菌的免疫力，使HIV感染合并结核菌感染的人迅速发生结核病。 （4）多耐药结核病例增加：由于结核病人的不规律治疗，病人肺内的结核菌对多种抗结核药物发生耐药。这些病人不但治疗无效，病死率高，而且传染给其他人造成耐药性结核菌的流行。（一）致病物质 致病性-菌体成分、毒性代谢产物、炎症菌体成分：荚膜脂质蛋白质多糖、核酸等一、临床意义1、荚膜：荚膜的主要成分为多糖，部分为脂质和蛋白质。荚膜功能:能与吞噬细胞

5、表面补体受体结合，有助于此菌对吞噬细胞的粘附和侵入；荚膜中有多种酶，可降解宿主大分子物质，作为细菌的营养；能防止有害物质及药物进入；能抑制溶酶体与吞噬体融合。2、脂质：含量越高，致病性越强磷脂：促使单核细胞增生，使巨噬细胞转变为类上皮细胞，形成结核结节和干酪样坏死。索状因子：能破坏线粒体膜，抑制粒细胞游走和吞噬，形成慢性肉芽肿。蜡质D：有佐剂作用，可刺激机体产生迟发型超敏反应。硫酸脑干脂：抑制溶酶体与吞噬体融合，使该菌长期存活于体内。3、蛋白质：有抗原性，与蜡质D结合引起超敏反应，引起组织坏死和中毒症状，无保护性。4、多糖：中性粒细胞增多，致局部细胞中性粒细胞增多，致局部细胞浸润浸润5、核酸：

6、具有感染性所致疾病肺部感染原发感染原发综合征全身粟粒性结核或结核性脑膜 炎结核病（痨病、慢性消耗性疾病、富贵病）传染方式：以呼吸道为主的多途径易感人群：易感率高，发病率低 继发感染继发感染已痊愈的原发感染可以复活成为活已痊愈的原发感染可以复活成为活动性结核病。动性结核病。由外界新侵人的结核分枝杆菌引起。由外界新侵人的结核分枝杆菌引起。l l肺外感染肺外感染经血液、淋巴液经血液、淋巴液脑、肾、骨、关节等脑、肾、骨、关节等 结核结核经消化道经消化道肠结核、结核性腹膜炎等肠结核、结核性腹膜炎等经破损的皮肤经破损的皮肤皮肤结核皮肤结核（三）免疫性1、结核杆菌为胞内寄生菌，以细胞免疫为主2、结核免疫为传

7、染免疫，有菌免疫3、细胞免疫、超敏反应、传染三者同时存在，故可通过结核菌素试验测定机体对结核有无免疫力。形态染色：革兰染色阳性，菌体细长微弯，具有分枝生长现象，抗酸染色阳性（红色）,菌体排列分散 二、生物学特性形态与染色 细长略弯，有时呈分枝状（14） m 0.4m无芽胞、鞭毛,有荚膜齐-尼氏抗酸染色阳性(近年发现结核分枝杆菌在 细胞壁外尚有一层荚膜。一 般因制片时遭受破坏而不易看 到。若在制备电镜标本固定前 用明胶处理，可防止荚膜脱水 收缩。在电镜下可看到菌体外 有一层较厚的透明区，即荚膜， 荚膜对结核分枝杆菌有一定的 保护作用。) 浓石炭酸复红 5分钟3%盐酸酒精脱色1分钟美兰复染1分钟干

8、后镜检抗酸菌红色非抗酸菌兰色加热抗酸染色（抗酸染色（Ziehl-NeelsonZiehl-Neelson）加热使菌体表面疏松，以便染料透入增强染液在脂质中的溶解度具有抗酸性的机制具有分枝菌酸，能与复红结合细胞结构完整石炭酸在脂质中的溶解度大（二）培养特性1、专性需氧，营养要求较高，常用罗氏(Lowenstein)培养基。罗氏培养基成分甘 油马铃薯蛋 黄无机盐孔雀绿2、在液体培养基中，常出现菌膜生长， 并有皱纹 3、生长缓慢，菌 落为粗糙型，典型的“ 菜花样菌落”抵抗力四不怕干燥酸（3% HCl或6% H2SO4) 或碱（4% NaOH) 有抵抗力碱性染料青霉素等 抗生素四怕乙醇湿热紫外线抗痨药

9、物（ 链霉素、异烟肼、 利福平等）（四）变异性形态、菌落、毒力和耐药性均可发生变异。1、毒力变异：卡介苗（BCG）对预防结核起了重大作用，但因各地广泛使用及系列传代，现已发现卡介苗子代株基因组缺失16个区段。卡介苗（BCG）：将有毒的牛 型结核分枝杆菌培养于含甘油、胆汁、 马铃薯的培养基中，经230次移种传代，历 时13年而获得的减毒活菌株，目前广泛 用于人类结核病的预防。2、耐药性变异在2009年全球耐多药/广泛耐药结核病高负担国家部长级会议上，卫生部部长陈竺通报了中国的情况：中国目前耐多药结核的发病率为8.32%，总数约12万人。 3、L-型变异 抗酸性减弱，染色不能发现； 常规培养不能生

10、长； 与结核的恶化、复发有关， 与耐药和肿瘤相关。三、微生物学检验（一）检验程序见图15-2（二）标本采集感染部位不同，采集不同的标本抑制杂菌生长标本：痰液、尿液、脑脊液等（三）标本直接检查1、形态学检查直接涂片染色镜检痰厚涂片，抗酸染色后，观察至少 100个视野，结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色 ，其他细菌和细胞为蓝色。结果应报告“找 到或未找到抗酸性杆菌”，而不能报告“找 到结核分枝杆菌”。2、核酸检测 PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染3、抗PPDIgG的检测 ELISA4、抗原检测ELISA（四）分离培养与鉴定1、分离培养标本接种于选择性固体培养基中，常用罗琴培养基或青霉素血液琼脂培养基，所

11、含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长，如果出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落，涂片染色为抗酸阳性，多数是结核杆菌。2、鉴定(1)PCR反向膜探针杂交ELISA法(PCR杂交梳)(2)DNA探针(3)16s rRNA基因序列测定 (4)高效液相色谱(HPLC)检测 (五)药物敏感性试验将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物的固体培养基上，同时做不含药物的对照组。经过培养，含有药物的培养基上菌落数目是对照组的75以上，则认为该菌对该药物浓度为完全耐药，如无菌落生长则为敏感。（六）免疫学诊断1、结核菌素试验 原理：纯蛋白衍生物(PPD) 注入皮内后，如果受试者已感染结核，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，形成

12、迟发型超敏反应性炎症。结核菌素试剂旧结核菌素（old tuberculin ，OT）纯蛋白衍生物（PPD）: PPD-C、 BCG-PPD方法：v皮下注射v皮肤划痕或点刺v皮内注射以后者应用最为广泛，效果准确 -分别取两种PPD 5单位注入两前臂皮内，4872小时后观察。结果分析 15mm为强阳性可能有活 动性结核病 红肿硬结超过5mm者为阳性 PPD-C侧 BCG-PPD侧 感染 PPD-C侧 BCG-PPD侧 卡介苗接种 红肿硬结小于5mm者为阴性反应受试者处于原发感染的早 期，T淋巴细胞尚未被致敏 老年人 患严重结核病或其他传染 病（如麻疹等）的患者 获得性免疫功能低下，如 艾滋病患者或

13、使用免疫抑制剂治疗者应用：选择BCG接种对象及测定接种效果；诊断婴幼儿结核病；在末接种BCG的人群中作结核分枝杆菌感染的流行病学调查；测定肿瘤病人的细胞免疫功能。第二节 非典型分枝杆菌指结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以 外的分枝杆菌。因具有抗酸性，故又称非典 型抗酸性菌。广泛分布于外环境和人及动物的机 体中。已发现17种以上能引起人类疾病，引 起肺部感染。、光产色分枝杆菌二、暗产色分枝杆菌三、不产色分枝杆菌四、迅速生长分枝杆菌第三节 麻风分枝杆菌麻风病的病原菌，麻风是一种慢性传染病，主要表现为皮肤、粘膜和神经末 梢的损害。晚期可侵犯深部组织和器官，形 成肉芽肿。根据临床表现、免疫病理变化和 细菌检查结果等将麻风分为瘤型、结核样型 和界限类综合征等三种病型。 抗酸杆菌，呈束状或团状排列， G+无 鞭毛、无荚膜和无芽胞。用药后细菌可断裂为颗粒 状、链杆状等，着色不均匀，叫做不完全菌。