微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、IMVC、硫化氢试验等)

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1、实验八 微生物生理生化特性检测本次实验内容(3人1组)一 糖发酵试验二 好气菌的氨化作用试验三 IMVC试验 一 糖发酵试验1 目的要求2 基本原理3 试验材料4 操作步骤1 目的要求 了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术2 基本原理不同细菌对糖的分解利用能力存在较大差异,且产物不同,是常用的鉴别微生物的生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体;有些细菌只产酸不产气。若产酸,可根据培养基特定的酸碱指示剂的特征性的颜色变化检测;若产气,可从培养基中的杜氏小管中是否有气泡观测。 3 试验材料培养基无菌葡萄糖发酵液体培养基无菌蔗糖发酵液体培养基无菌乳糖发

2、酵液体培养基菌种大肠杆菌枯草杆菌4 操作步骤 在试管外壁标明发酵培养基名称和接种细菌菌名。 取葡萄糖发酵培养基试管3支,分别接种大肠杆菌、枯草杆菌,第三支不接做对照;取蔗糖发酵培养基试管3支,分别接种大肠杆菌、枯草杆菌,第三支不接做对照;取乳糖发酵培养基试管3支,分别接种大肠杆菌、枯草杆菌,第三支不接做对照。 将接种的和做对照的9支试管放置2830培养23天。 观察各试管颜色变化及杜氏小管中是否有气泡。注:记录生长情况用符号表示: :不生长; +:生长差; +:生长一般; +:生长良好 表1 糖发酵试验结果试验试验 菌种 发发酵特性供试试糖葡萄糖蔗糖 乳糖大肠肠杆菌产产酸 产产气 枯草杆菌产产

3、酸 产产气 对对照产产酸、产产气二 好气氨化作用试验1 目的要求2 基本原理3 试验材料4 操作步骤1 目的要求 了解好气氨化作用的原理。 掌握通过氨化作用鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物的接种技术。2 基本原理不同微生物对含氮有机物分解能力及代谢途径、最终产物不尽相同,这些特征性生化反应可作为菌种鉴定的重要依据。微生物可分解含氮有机物,最终产生氨气。以酸碱指示剂试纸检测。 3 试验材料培养基牛肉膏蛋白胨液体培养基菌种土壤颗粒大肠杆菌枯草杆菌4 操作步骤(1)取牛肉膏蛋白胨液体培养基四支,贴好标签,分别接种土壤颗粒、大肠杆菌、枯草杆菌,余下一支不接种作为空白对照,在每支试管口悬挂一条经无菌水

4、湿润的红色 石蕊试纸,并加好试管塞。(2)将已经接种的培养管置于28-30培养5-7日。(3)结果检测:观察各管红色石蕊试纸变色及培养液浑浊情况。表2 好气菌的氨化作用试验结果土壤颗颗粒大肠肠杆菌枯草杆菌空白对对照培养液 浑浊浑浊 程度 红红色石蕊试试 纸变纸变 色程度 接种 菌样检测 项目三 IMVC试验及H2S试验1 目的要求2 基本原理3 试验材料4 操作步骤1 目的要求v 学习掌握IMVIC试验原理。v 学习硫化氢试验检测细菌产生硫化氢的原理和方法。v 学习掌握IMVIC试验及H2S试验在肠道菌鉴定中的方法及意义。2 基本原理IMVC是吲哚(indol)、甲基红(methyl red

5、test)、伏普(Voges-Prokauer test)和柠檬酸盐(citrate test)四个实验的缩写,主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌,多用于水细菌学检查。H2S试验也用于肠道菌鉴定。大肠杆菌虽非致病菌,但在饮用水中超过一定数量,则表示受粪便污染,产气肠杆菌也广泛存在于自然界中,因此检查水时要将两者分开。 检测吲哚的产生。某些细菌可产生色氨酸酶,分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚(红色)。红色者为吲哚试验阳性。 吲哚试验检测分解葡萄糖产生有机酸如甲酸、乙酸 、乳酸等(混合酸发酵)。细菌分解葡萄糖产生混合酸,pH下降明显 呈较强酸性。用甲基红

6、指示剂检测。甲基红指示剂:橘黄(pH6.3)红色(pH4.2)红色者为甲基红反试验阳性。 甲基红试验检测某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。例如丙酮酸,丙酮酸缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇,在碱性条件下能被空气中的氧气氧化生成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的胍基作用生成红色化合物。 红色者为伏-普试验阳性。伏普试验检测柠檬酸盐能否被微生物利用。细菌利用柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后,产生碱性化合物,培养基pH值上升。用1%溴麝香草酚蓝指示剂可以检测出来。指示剂:黄色(pH6.0),绿色(pH6.0-7.0)蓝色(pH7.6)蓝色者为柠檬酸盐试验阳性。柠檬酸盐试验H2S试验检测硫化氢的产生。细

7、菌分解含硫有机化合物(如半胱氨酸)产生硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐(或铁盐等)形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀。黑色沉淀者为H2S试验阳性。3 试验材料培养基蛋白胨水培养基(吲哚试验)葡萄糖蛋白胨水培养基(甲基红试验)葡萄糖蛋白胨水培养基(伏普试验)柠檬酸盐斜面培养基(柠檬酸盐试验)醋酸铅柱状培养基(H2S试验)菌种大肠杆菌、 产气肠杆菌、变形杆菌。 4操作步骤(1)接种与培养 将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支蛋白胨水培养基(吲哚试验)。 将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支葡萄糖蛋白胨水培养基 (甲基红试验)。 将大肠杆菌、产气肠杆菌各接种于1支葡萄糖蛋白胨水培养基(伏-普试验)。 将大肠杆菌

8、、产气肠杆菌各划线接种于1支柠檬酸盐斜面培养基(柠檬酸盐试验)。 将大肠杆菌、变形杆菌各穿刺接种于1支醋酸铅柱状培养基 (H2S试验)。 37培养48小时。(2) 结果观察IMVC试验 吲哚试验 在培养48h后的蛋白胨水培养基中加入3-4滴乙醚,摇动数次静置1-3min,待乙醚上升后,沿试管徐徐加入2滴吲哚试剂,在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。 甲基红试验 在培养48h后的葡萄糖蛋白胨水培养基内加入甲基红试剂2滴,培养基变红者为阳性,变黄者为阴性。(注意:甲基红试剂加得过多,可出现假阳性现象。) 伏-普试验 培养48h后,在培养物内加入5-10滴40%KOH及等量的5%萘酚,用力振荡,37温箱培养15-30min,加快反应,呈红色者为伏-普反应阳性。 柠檬酸盐试验培养48h后,观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长和是否变色。蓝 色为阳性,绿色为阴性。甲基红试验阳性阴性对照大肠杆菌:+产气肠杆菌:-阳性吲哚试验大肠杆菌:+产气肠杆菌:-阳性阴性对照产气肠杆菌:+大肠杆菌:-伏普试验H2S试验培养48h后,观察醋酸铅柱状培养基沿穿刺线有无细菌生长和是否变色。黑色为阳性,没有黑色产生为阴性。试验结果记录见书P58。实 验 报 告按实验内容分别书写。要求每个实验写出:1 实验目的2 实验原理3 实验结果。实验结果用表格形式给出,并对实验结果进行分析。4 讨论

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