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1、3.53.5药物分析方法化学分析法容量分析法重量分析法仪器分析法色谱分析法光谱分析法电化学分析核磁、质谱等技术一、常规的化学分析法1. 容量（滴定）分析法 将一种标准溶液滴加 到待测物质的溶液中，直 到与待测物质按化学计量 关系定量反应为止，然后 根据标准溶液的浓度和所 消耗的体积，计算待测物 质含量的方法。基本术语w 滴定：将滴定剂通过滴管滴入待测溶液中的过程 。w 滴定剂（标准溶液）：浓度准确已知的溶液。w 指示剂：滴定分析中能发生颜色改变而指示终点 的试剂。w 滴定终点：滴定分析中 指示剂发生颜色改变的 那一点。2 2、 滴定分析法的分类滴定分析法的分类A A）按化学反应类型分类按化学反
2、应类型分类w 酸碱滴定法：质子转移w 络合滴定法：生成络合物w 氧化还原滴定法：电子转移w 沉淀滴定法：生成沉淀滴定操作滴定操作2 2、 滴定分析法的分类滴定分析法的分类B B）按滴定方式分类）按滴定方式分类w 直接滴定：标液滴定待测物，直到所滴加的试 剂与待测物质按化学计量关系定量反应为止。w 返滴定法：先用过量标准溶液A与待测物反应后 ，再用另一种标准溶液B滴定剩余的A溶液。w 置换滴定： 先用适当试剂与待测物质反应，定 量置换出另一种物质，再用标准溶液去滴定该 物质的方法。NaNa2 2S S2 2OO3 3+K+K2 2CrCr2 2OO7 7S S4 4OO6 62-2-+SO+SO
3、4 42-2- 无定量关系无定量关系 KK2 2CrCr2 2OO7 7+ +过量过量KI KI 定量生成定量生成 I I2 2 Na Na2 2S S2 2OO3 3标液标液 淀粉指示剂淀粉指示剂深蓝色消失深蓝色消失滴定分析对化学反应的要求：a.反应定量、完全b.反应迅速c.具有合适的确定终点的方法特点：简便、快速；适于常量分析；准确度高； 应用广泛。Ch.P（2005）中采用的滴定分析法：酸碱滴定、 银量法、 碘量法、 亚硝酸钠滴定法、 配位滴定法、 双相滴定法、 高锰酸钾滴定法、 溴酸钾滴定法、 碘酸钾滴定法、 高碘酸钾滴定法等。2.重量分析法 w 重量分析法，是将被测组分与试样中的 其
4、他组分分离后，转化成一定的称重形 式，然后用称重方法测定该组分的含量 。重量分析法的分类w 挥发重量法 用加热等方法将待测物中挥发 性成分挥发后，称量残渣，由样品减少的量 来计算该挥发组分的量。w 常用来测定物料的水分、挥发分和灰分。应用 例如： 氯化钡中结晶水含量的测定 水分在试样中存在的形式：吸附水，结晶吸附水：在105110 烘干结晶水：根据具体的物质决定，例如BaCl22H2O可以在120125 烘干 。 w 萃取重量法 溶剂萃取待测物后，将萃取液 蒸干，称量干燥物重量。Ch.P（2005）中收载苯妥英钠的含量测定就 是利用萃取重量法。（P4041）w 沉淀重量法 利用沉淀反应，将待测
5、物转化 为沉淀，分离并称定其重量。被测组分 微溶化合物（沉淀形式） 称量形式 称重 计算被测组分的含量沉淀剂过滤、洗涤烘干(灼烧)沉淀重量法的应用滤，洗 灼烧，800SO42- + BaCl2 BaSO4 BaSO4被测物沉淀剂 沉淀形式 称量形式Mg2+ + (NH4)2HPO4 MgNH4PO46H2O滤，洗 灼烧 ,1100Mg2P2O7滤，洗 灼烧Fe3+ + NH3H2O Fe(OH)3 Fe2O3Ch.P（2005）中收载甲磺酸酚妥拉明的含量测定。P41仪器分析法色谱分析 w 色谱法溯源 俄国科学加1903年发现色谱的吸附原理，开创了 应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸于俄文的
6、文 献 w 1906年正式命名（见诸文献） 色谱法；Chromatography w 50年代开始广泛研究和应用 主要是气相色谱及薄层色谱 w 高效液相色谱法的广泛应用始于70年代色谱的分类气相色谱：流动相是气相气相色谱：流动相是气相液相色谱：流动相是液相液相色谱：流动相是液相色谱液相色谱柱色谱纸色谱薄层色谱高效液相色谱 HPLC气相色谱高效液相色谱w High Performance Liquid Chromatography高效液相色谱法，简称：HPLC w 是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法 的高效能分离手段：高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及 高灵敏度的检测器 w 广泛应用
7、于各个领域：医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业 液相液相色谱的基本流程图色谱的基本流程图流动相泵色谱柱检测器AEGBCD F进样阀泵输液分离 检测 记录进样HPLC的仪器配置高压输液泵高压输液泵自动进样器自动进样器色谱柱及柱温箱色谱柱及柱温箱检测器检测器数据处理系统数据处理系统流动相流动相色谱图：HPLC图形结果色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号 对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间 。 色谱峰保留时间（分）基线 峰高峰宽响应值液相色谱应用：分析型液相色谱 w 定量分析主要基于与标准品的比较是其最大应用领域 w 定性分析：基于样品的保留时间比较
8、借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器 w 对定量及定性分析的要求灵敏度、精度及准确度的要求样品量的要求；复杂样品的分析能力容易使用HPLC在药物分析中的应用常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、 安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素 、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强 心甙、黄酮甙等)、萜类手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分(如 解毒剂D-青霉胺毒性小，L-异构体毒性很强)药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学 研究。HPLC应用示例P55气相色谱法 基本原理 w GC是以惰性气体作为流动相，
9、利用试样中各组分在色谱柱 中的气相和固定相间的分配系数不同，实现分离的目的。w 当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组分就在其 中的两相间进行反复多次的分配（吸附脱附放出）。 由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同 ），各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱 长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的 离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰 。气相色谱仪气相色谱仪通常由五部分组成： 载气系统：气源、气体净化器、供气控制 阀门和仪表。 进样系统：进样器、汽化室。 分离系统：色谱柱、控温柱箱。 检测系统：检测器、检测室。记录系统：放大器、记录仪、色谱工作
10、站 。气相色谱结构流程 1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化干燥管；4-针形阀 ；5-流量计; 6-压力表； 7-进样器；8-色谱柱；9- 热导检测器；10-放大器 ；11-温度控制器；12-记 录仪；载气系统进样系统色谱柱检测系统温控系统应用举例定量分析： a. 色谱峰的测量:以峰的起点和终点的联线作为峰底。从峰高极大值对时 间铀作垂线，对应的时即为保留时间。从峰顶至峰底间的线段即为峰 高。 b. 计算:由色谱峰量出各组分的峰高，然后在各自的校准曲线上查出相应 的待测物浓度。 定性结果：根据标准谱图各组分的保留时间确定被测试样中出现的组分数目和组 分名称。苯系物气相色谱 图平面色谱w 在平面上
11、进行分离的一种色谱方法，主要包 括薄层色谱法和纸色谱法。分类w 薄层色谱法：吸附薄层色谱法分配薄层色谱法分子排阻薄层色谱法 w 纸色谱法：分配w 薄层电泳法定性参数w 比移值(Rf值)溶质移动距离与流动相移动距离 之比。Rf =L/L0 L为原点（origin）至斑点中心的 距离，L0为原点至溶剂前沿（ solvent front）的距离 w 与组分及色谱条件有关 薄层色谱法w 固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄 层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点 显色，（与对照物质）比较进行定性定量 。w 操作步骤：制板（均匀） 点样（集中） 展开 (多 种方式) 显色（紫外灯或显色剂）(thin la
12、yer chromatography；TLC)定性和定量分析定性分析 w 比较Rf值、斑点颜色或荧光 w 常采用已知标准物质对照（同一板上展开） w 多种展开系统的Rf值与对照品一致。 定量分析 w 洗脱法 w 直接定量法1.目视比较法（如杂质限度检查方法）2.薄层扫描法应用示例 中药中化学成分的分析w 例1，如右上图，不同产 地的甘草的TLC图谱。w 例2，某中药的 TLC图谱与HPLC图 谱对照。光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。吸收光谱分析发射光谱分析分子光谱分析原子光谱分析光谱分析在光谱分析中，依据物质对光的
13、选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有:红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.51000 m ,主要用于有机化合物结构鉴定。紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。紫外-可见分光光度法 (ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 它是利用物质的分 子或离子对紫外-可见光 的吸收作用，对物质进 行定性分析、定量分析 及结构分析, 所依据的 光谱是分子或离子吸收 入射光中特
14、定波长的光 而产生的吸收光谱，即 为紫外光谱。紫外光谱的表示法紫外光谱图是由横坐标、纵坐标和吸收曲线组成的。横坐标表示吸收光的波长， 用nm（纳米）为单位。纵坐标表示吸收光的吸收 强度，可以用A(吸光度)、T(透 光率)、1-T(吸收率)中的任何 一个来表示。吸收曲线表示化合物的紫 外吸收情况。曲线最大吸收峰的横坐标 为最大吸收波长。对甲苯乙酮的紫外光谱图在药物分析中的应用UV-Vis分光光度法主要用于药物的鉴别 、杂质检查和含量测定中。 w 应用一：药品的鉴别 w 测定最大吸收波长 例如三唑仑，用无水乙醇制成每 1ml中含5g的溶液，照分光光度法测定，在221nm处有最 大吸收。 w 测定最
15、大吸收波长和最小吸收波长 如五氟利多 w 测定最大波长和不同波长的吸收值比值 w 测定吸收系数例: 在头孢类抗生素中，常在性状项下规定吸收系数， 以控制药品的质量。 药品溶剂max/nm 头孢他啶磷酸缓冲液 pH6.0257400430头孢曲松钠水241495545头孢克洛水264230255 头孢呋 辛 酯甲醇271390292头孢氨苄水262220245应用二：药品的杂质检查 w 用分光光度法对药品中的特殊杂质进行检查 ，可将杂质用适当的溶剂提取，与主成分分 离后测定，还可用杂质的显色反应进行测定 。w 如维生素B2中感光黄素的检查取本品25mg，加无乙醇氯仿10ml，振摇 5min，滤过，滤液照分光光度法，在440nm处测
